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采用等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条检测登革热病毒 被引量：4
1
作者 赵锦 夏海雄 +4 位作者 刘雨杰 Ravinder Pal 范安然 何志旭 曾令文 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期405-412,共8页
目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置... 目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。 展开更多
关键词 登革热/诊断 DNA引物 序列分析 核酸扩增技术 纳米技术 金/诊断应用 生物技术
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呼肠孤病毒导致白血病细胞凋亡的分子机制研究 被引量：1
2
作者 李晨 莫晶 +4 位作者 舒莉萍 吴西军 许键炜 杨燕 何志旭 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期649-653,共5页
目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利... 目的初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。方法用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利用流式细胞术检测HL60细胞凋亡率;Western blot检测HL60细胞中双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)活化水平和凋亡相关蛋白表达情况。用PKR特异性抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)作用HL60细胞24 h后,Reo3感染HL60细胞48 h,检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白表达水平。结果 MOI为1的Reo3作用于HL60细胞48 h后对细胞的抑制作用明显,细胞存活率为(24.333±3.396)%,细胞凋亡率为(29.96±2.06)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组比较,感染Reo3的HL60细胞PKR、 p-PKR、Bax、Caspase3、cleaved Caspase3蛋白表达均升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05)。与未加抑制剂组比较,采用2-AP预处理的HL60细胞感染Reo3后细胞凋亡率下降(P<0.05),PKR磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达水平亦下降(P<0.05)。结论溶瘤病毒Reo3作用HL60细胞可以引起PKR的活化,导致HL60细胞的凋亡。 展开更多
关键词 呼肠孤病毒 HL60细胞 细胞凋亡 凋亡相关蛋白 PKR 2-氨基嘌呤
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基于高分辨率熔解曲线技术的CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变快速检测研究 被引量：1
3
作者 陈黎 卢茜 +2 位作者 杨红兰 张鹏 何志旭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期90-96,共7页
旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果... 旨在建立一种通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术快速检测CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变的方法。采用野生型、纯合突变及杂合突变小鼠胚胎干细胞优化和完善HRM检测条件,然后应用建立的HRM方法对30个测序结果已知的CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆进行检测,根据熔解温度与熔解曲线的差异区分野生型、纯合突变型及杂合突变型,以验证HRM方法的可行性和准确性。结果表明,优化的HRM检测方法能够鉴别野生型、纯合突变型及杂合突变型小鼠胚胎干细胞。应用建立的HRM方法分析30个CRISPR/Cas9技术编辑过的小鼠胚胎干细胞单克隆,结果显示,14个单克隆为杂合突变型、2个单克隆为纯合突变型、14个单克隆为野生型,与测序结果一致,准确率为100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线法能对CRISPR/Cas9介导的细胞基因突变进行快速筛选,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线 CRISPR/Cas9 细胞基因突变 检测
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CalothrixinB衍生物对白血病K562细胞的抑制作用及机制
4
作者 龙群 肖潇 +4 位作者 宋晶睿 饶青 刘晟 何志旭 李艳梅 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第5期497-504,共8页
目的:研究CalothrixinB衍生物L20对白血病K562细胞的抑制作用及其机制。方法:采用四唑盐(MTT)法检测化合物L20对K562细胞的抑制作用,使用流式细胞分析仪检测化合物L20对K562细胞凋亡及周期的影响,用DCFH-DA标记的荧光探针通过荧光显微... 目的:研究CalothrixinB衍生物L20对白血病K562细胞的抑制作用及其机制。方法:采用四唑盐(MTT)法检测化合物L20对K562细胞的抑制作用,使用流式细胞分析仪检测化合物L20对K562细胞凋亡及周期的影响,用DCFH-DA标记的荧光探针通过荧光显微镜观察活性氧(ROS)的改变,Western蛋白印迹检测相关蛋白的表达。结果:L20处理后的K562细胞增殖受到明显抑制,L20能够诱导K562细胞凋亡,并使其细胞周期阻滞在G 2/M期,L20还可以使ROS在K562细胞中堆积;在蛋白水平上L20能够下调p-ERK、BCL-2和p-CDC25C,上调BAX、p-CDK1及CDC25C,并激活Caspase家族。结论:L20具有通过MAPK通路诱导K562细胞凋亡及将细胞周期阻滞在G 2/M期的活性。 展开更多
关键词 白血病 Calothrixins B K562细胞 凋亡 G2/M期 MAPK通路
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Flavaglines类化合物对人白血病HEL细胞的作用及机制
5
作者 龙群 肖潇 +4 位作者 宋晶睿 饶青 苑春茂 何志旭 李艳梅 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第5期505-511,共7页
目的:探讨Flavaglines类化合物对人白血病HEL细胞的作用及机制。方法:取HEL细胞培养至对数生长期,以DMSO组为空白对照组,采用过四唑盐(MTT)法检测阳性对照药阿霉素(0.100、0.050、0.030、0.010及0.006μmol/L)、化合物M8(0.20、0.10、0... 目的:探讨Flavaglines类化合物对人白血病HEL细胞的作用及机制。方法:取HEL细胞培养至对数生长期,以DMSO组为空白对照组,采用过四唑盐(MTT)法检测阳性对照药阿霉素(0.100、0.050、0.030、0.010及0.006μmol/L)、化合物M8(0.20、0.10、0.05、0.03及0.01μmol/L)及M9(2.50、1.25、0.63、0.30及0.16μmol/L)对HEL细胞作用72 h后的吸光度值(OD)并计算抑制率和半抑制浓度(IC 50)值;采用流式细胞仪检测M8(0.20、0.05及0.02μmol/L)和M9(1.00、0.50及0.25μmol/L)对HEL细胞作用24、48及72 h后的细胞凋亡率;采用Western blot分析M8(0.20μmol/L)和M9(1.00μmol/L)对HEL细胞作用24 h后B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Caspase3、Cleave-Caspase3、磷酸化信号传导转录激活蛋白3(p-Stat3)及c-Myc蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,阿霉素及化合物M8、M9抑制HEL细胞增殖的抑制率均随浓度的增加而增高(P<0.05或P<0.01),IC 50值分别为(0.06±0.001)μmol/L及(0.02±0.010)μmol/L、(0.21±0.060)μmol/L;流式细胞仪结果显示,化合物M8和M9促进HEL细胞的凋亡率随浓度的增加而增高(P<0.05或P<0.01);Western blot结果显示,与DMSO组比较,M8和M9组HEL细胞的Bcl-2、Caspase3、p-Stat3及c-Myc蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01),Cleave-Caspase3蛋白表达增加(P<0.01)。结论:Flavaglines类化合物M8和M9可通过影响Stat3信号通路而促进HEL细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 白血病 细胞凋亡 环戊烷苯啶呋喃类化合物 HEL细胞 抑制增殖 信号传导转录激活蛋白3
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