CD630_27900基因缺失显著降低艰难拟梭菌自溶速率、毒力及对酸和抗生素的耐受性

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作者 杨君仪 鲍江舰 +8 位作者 邵瑞瑞 张婷 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 陈峥宏 崔古贞 洪伟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2440-2455,共16页

艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株... 艰难拟梭菌(Clostridioidesdifficile)CD630_27900基因位于slpA-cwp66基因座上,CD630_27900基因属于假定的Lmbe家族的酶,但基因功能尚未明确。【目的】本研究通过构建艰难拟梭菌CD630_27900基因敲除菌株,比较野生型菌株(CD630)与突变株表型差异,探讨CD630_27900基因对艰难拟梭菌感染的影响。【方法】用非等长同源臂偶联等位交换(allele-coupled exchange, ACE)构建CD630_27900基因缺失菌株与回补菌株。比较它们在生长曲线、自溶素(cwp19,Acd)基因表达、细胞毒力、主要毒素基因表达、抗生素及pH敏感性差异,以研究CD630_27900基因的功能。【结果】成功构建△CD630_27900突变菌株和::CD630_27900回补菌株。菌株△CD630_27900在衰亡期自溶速率显著低于菌株CD630,::CD630_27900自溶速率恢复。实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitative polymerasechainreaction,RT-qPCR)结果显示,缺失CD630_27900基因,自溶素cwp19、Acd基因表达量降低,::CD630_27900自溶素基因表达增强。相较于CD630,△CD630_27900菌株细胞毒力、毒素基因tcdA、tcdB表达量降低。相较于CD630,△CD630_27900对氨苄青霉素、甲硝唑、阿莫西林、万古霉素、诺氟沙星、头孢西丁、卡那霉素更加敏感,::CD630_27900对以上抗生素敏感性恢复。此外,△CD630_27900对酸比CD630敏感,对碱敏感性未发生变化。::CD630_27900对酸敏感性恢复至野生型水平。【结论】敲除CD630_27900基因,艰难拟梭菌自溶速率变慢、自溶素cwp19、Acd基因表达量降低、细胞毒力、毒素基因tcd A和tcd B降低,说明CD630_27900基因影响菌株自溶以及毒力释放。菌株△CD630_27900对临床上常见的抗生素及酸性环境更加敏感,且这些变化均可通过基因回补恢复。提示该基因可作为联合抗生素治疗艰难梭菌感染(Clostridioides difficile infection, CDI)的潜在靶点。 展开更多

关键词 艰难拟梭菌 CD630_27900基因 肽聚糖脱乙酰化 非等长同源臂偶联等位交换 突变表型

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天麻对APP/PS1痴呆小鼠模型的神经保护作用及其对衰老相关蛋白的影响

2

作者 高玉梅 王晓玲 +4 位作者 胡晓霞 李若淳 江沂 齐晓岚 周莉 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第23期5767-5772,共6页

目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg
... 目的探讨天麻(RG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织衰老相关蛋白水平的影响及其神经保护作用。方法30只C57正常小鼠随机分为正常组、正常给药组;30只APP/PS1模型小鼠随机分为模型组、模型给药组;正常给药组、模型给药组灌胃给予1.5 g/(kg·d)的RG,各组小鼠6月龄时进行水迷宫实验;免疫组织化学检测脑组织内Aβ聚集;Western印迹测定脑组织中衰老相关蛋白p53、p21表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组脑组织中白细胞介素(IL)-6、IL-8表达。结果与正常组比较,模型组学习记忆能力显著降低,脑组织内Aβ斑块聚集明显增多,p21、IL-6、IL-8表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,模型加药组学习记忆能力显著升高,脑组织内Aβ斑块聚集明显减少,p21、IL-6、IL-8表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论RG可能通过调控衰老相关蛋白及IL-6、IL-8表达延缓衰老进程,改善阿尔茨海默病(AD)病理进程。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 天麻 衰老

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幽门螺杆菌CagA的序列差异对细胞形态的影响

3

作者 曾晓燕 全欣莹 +5 位作者 李雷蕾 贾岑岑 廖永慧 谢渊 赵艳 周建奖 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第5期537-541,共5页

目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA... 目的比较幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染过程中不同细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)序列对胃上皮癌细胞株AGS形态的影响,探讨CagA序列的结构差异。方法将含不同CagA序列的4株东亚株、3株西方株、1株cagA基因敲除株和1株CagA C端缺失株的Hp以感染复数30∶1分别感染AGS细胞6 h和7 d,观察不同时间点的细胞形态变化。以未感染及煮沸10 min的Hp感染AGS细胞为空白对照及阴性对照。从GenBank数据库收集150条cagA基因序列,用MEGA7.0软件进行聚类分析。结果cagA基因敲除株和cagA基因C端缺失株Hp感染AGS细胞6 h均未出现明显的细胞形态改变,其它7株(cagA基因完整)感染细胞后均出现明显的蜂鸟样表型的形态改变。将9株Hp煮沸10 min灭活后感染的细胞也未出现明显的形态改变。Hp持续感染7 d后,只有3株西方株和1株东亚株感染的细胞呈现蜂鸟样表型,另3株带CagA的EPIYA基序变异的东亚株未发生细胞形变。聚类分析显示,多株起源于东亚国家日本、中国和韩国的Hp聚类于西方株,且西方株CagA中EPIYA基序更容易发生变异。结论Hp西方株在中国和其它东亚国家普遍流行,其CagA比东亚株的CagA有更强的致细胞形变能力和更多的EPIYA基序变异,完整的CagA序列是诱导细胞形变的主要因素。这些数据对深入研究Hp不同基因型的致病能力有重要意义。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 CAGA 聚类分析 细胞形态学

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天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响 被引量：10

4

作者 高玉梅 王晓玲 +4 位作者 邓于新 任家谋 沈祥春 官志忠 齐晓岚 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期52-58,共7页

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有... 目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1� 展开更多

关键词 天麻 APP/PS1双转基因小鼠 阿尔茨海默病 Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路

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蛋白激酶Cδ参与帕金森大鼠模型中6-OHDA的神经毒性作用 被引量：3

5

作者 韩飞 李成朋 +4 位作者 董智慧 禹文峰 张春林 焦玲 官志忠 《中风与神经疾病杂志》 北大核心 2017年第11期969-972,共4页

目的研究蛋白激酶Cδ(PKCδ)细胞核转移在帕金森大鼠模型神经元丢失中的病理作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为Sham组(10只)和PD组(30只),立体定位右侧纹状体注射生理盐水或6-OHDA溶液并通过阿朴吗啡(APO)诱导旋转进行模型筛选,免疫组... 目的研究蛋白激酶Cδ(PKCδ)细胞核转移在帕金森大鼠模型神经元丢失中的病理作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为Sham组(10只)和PD组(30只),立体定位右侧纹状体注射生理盐水或6-OHDA溶液并通过阿朴吗啡(APO)诱导旋转进行模型筛选,免疫组化检测黑质致密部(SNpc)酪氨酸羟化酶(TH)表达情况。采用Western blotting检测PKCδ蛋白表达并通过共聚焦观察PKCδ在细胞核的表达。结果 PD组SNpc部位TH阳性神经元形态发生了病理改变且密度显著下降(P<0.05);Western blotting显示PD组SNpc组织中PKCδ及Cleaved PKCδ的表达较Sham组显著上调(P<0.05);共聚焦显微镜提示PD组SNpc部位PKCδ与细胞核有共定位。结论 PKCδ的酶解激活及细胞核转位可能参与了PD的神经病理发生。 展开更多

关键词 6-羟基多巴胺 帕金森病 蛋白激酶Cδ 转位

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PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系 被引量：2

6

作者 江银辉 杨碧 +1 位作者 吴昌学 周建奖 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第12期1390-1394,共5页

目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用... 目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用聚乙二醇(PEG)介导黄曲霉菌原生质体转化法,将携带ptrA的质粒pPTRI整合到黄曲菌株LD-F基因组DNA中,随机挑选7个转化子,通过聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,验证ptrA是否整合到黄曲菌基因组DNA中。结果:0.2 mg/L PT可以完全抑制黄曲霉菌的菌丝生长,1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶处理黄曲霉菌丝2 h可得到大量的原生质体;PCR检测结果显示,质粒pPTRI能够成功整合到黄曲菌基因组。结论:以PT为抗性筛选,建立PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系。 展开更多

关键词 黄曲霉菌 吡啶磺胺素 PEG介导 原生质体 遗传转化

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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析

7

作者 邵瑞瑞 周青帅 +5 位作者 崔古贞 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 洪伟 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期320-331,共12页

为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础. 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 生物学特征 基因组分析 耐药菌治疗

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幽门螺杆菌阿莫西林稳定耐药克隆的筛选及其基因突变的检测

8

作者 陆秋丹 糜孟衡 +3 位作者 崔古贞 张峥嵘 吴晓娟 陈峥宏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第1期39-44,共6页

目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(M... 目的探讨阿莫西林(AMX)不稳定耐药的幽门螺杆菌(Hp)演化成AMX稳定高水平耐药的表型及其突变基因的检测。方法以冻存后的Hp菌株H390作为出发菌株,在不断增加AMX浓度的培养基上连续传代,筛选对AMX耐药的克隆,检测耐药克隆的最小抑菌浓度(MIC),置于-80℃冻存3个月后再复苏,根据冻存后MIC下降情况判断其耐药性是否稳定。对获得的AMX最高MIC值的克隆H390r和出发菌株H390进行基因组测序分析和外排泵抑制试验,检测并鉴定与H390r获得的AMX高水平耐药性相关的基因突变。结果通过AMX筛选获得4个AMX高水平耐药克隆,MIC分别为12、32、64和≥256 mg/L,经-80℃冻存后,MIC均未发生改变。相比于亲本菌株H390,AMX稳定耐药克隆H390r存在多个基因的突变,包括与AMX耐药性相关的编码RND外排系统的hefC、编码孔蛋白的hopB与hopC和编码青霉素结合蛋白的ftsI。H390r在有外排泵抑制剂存在时对AMX的MIC大幅降低。结论AMX能够在不稳定耐药的Hp中筛选出稳定耐药的克隆;H390r存在与AMX耐药相关的hefC、hopB、hopC和ftsI基因突变。这些突变可能是H390r获得AMX稳定高水平耐药的主要原因。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 阿莫西林 不稳定耐药 稳定耐药

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阿糖胞苷对人急性髓系白血病细胞活力、凋亡的作用及机制 被引量：6

9

作者 彭煜晖 梁欣明 +4 位作者 付文莉 喻艳琴 段娟娟 吴昌学 张启芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第12期1376-1381,共6页

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对人急性髓系白血病(AML)细胞活力、凋亡的作用及机制。方法选取对数生长期人AML细胞株MV4-11,分别用二甲基亚砜(DMSO)及0.5、1.0、1.5μmol/L Ara-C作用24、48和72 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)和流式细胞仪检... 目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对人急性髓系白血病(AML)细胞活力、凋亡的作用及机制。方法选取对数生长期人AML细胞株MV4-11,分别用二甲基亚砜(DMSO)及0.5、1.0、1.5μmol/L Ara-C作用24、48和72 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)和流式细胞仪检测各组细胞不同时间的光密度(OD)值和细胞凋亡情况;取对数生长期MV4-11细胞分为空白组和1.0μmol/L Ara-C组,1.0μmol/L Ara-C组细胞分别处理3、6、12、24及48 h,采用蛋白印迹法检测各组MV4-11细胞中Caspase 3、c-Myc及高迁移率族蛋白1(HMGB1)的蛋白表达;利用cBioportal在线分析工具和R包(survminer)分析c-Myc表达水平与AML患者生存期的相关性。结果与DMSO组相比,0.5、1.0及1.5μmol/L Ara-C组MV4-11细胞不同时间的细胞活力均降低、凋亡细胞比例升高,且对Ara-C均有浓度依赖性(P<0.0001或P<0.01);与DMSO组相比,1.0μmol/L Ara-C组MV4-11细胞经不同时间处理后Caspase 3表达水平均降低,且有时间依赖(P<0.05);与DMSO组相比,1.0μmol/L Ara-C组MV4-11细胞经不同时间后,细胞的HMGB1和c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);c-Myc高表达与AML患者较差生存期呈正相关((P<0.05)。结论Ara-C可抑制人AML细胞活力和诱导细胞凋亡,其机制可能与HMGB1/c-Myc的下调有关。 展开更多

关键词 阿糖胞苷 细胞凋亡 急性髓系白血病 高迁移率族蛋白1基因 C-MYC基因 cBioportal数据库

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黑骨藤对高表达表皮生长因子受体突变体Ⅲ的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及机制

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作者 唐银彤 官志忠 +5 位作者 陆定艳 陈帅帅 吴忠秀 曹陶涛 郭玮钰 刘亭 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第10期1137-1144,共8页

目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(... 目的探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制。方法取对数生长期的DKMG和不表达EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(100 mg/L黑骨藤培养液)、中浓度黑骨藤组(200 mg/L黑骨藤培养液)及高浓度黑骨藤组(400 mg/L黑骨藤培养液),处理细胞24 h,采用细胞增殖与毒力检测试剂盒(MTS)检测各组DKMG、U87MG细胞的存活率,采用流式细胞术检测各组DKMG细胞凋亡率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及BCL2-Associated X(Bax)的信使核糖核酸(mRNA)表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋酶家族(Caspase-3、Cleaved caspase-3)蛋白的表达。结果MTS检测显示,与Con组相比,各浓度黑骨藤组DKMG细胞存活率明显降低(P<0.05),各浓度黑骨藤组U87MG细胞存活率比较、差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞凋亡率明显增加(P<0.05);qRT-PCR结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ和Bcl-2 mRNA表达降低(P<0.05),Bax表达无变化(P>0.05);Western blot结果显示,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论黑骨藤可诱发DKMG细胞凋亡,产生细胞杀伤作用,其机制可能与下调EGFRvⅢ、Bcl-2、Caspase-3表达及上调Bax、Cleaved caspase-3表达有关。 展开更多

关键词 细胞凋亡 黑骨藤 DKMG细胞 U87MG细胞 表皮生长因子受体突变体Ⅲ 细胞毒性

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核酸内切酶G在慢性氟中毒大鼠脑组织中的表达及其意义 被引量：5

11

作者 杨梅 任真奎 +2 位作者 周冰峰 官志忠 禹文峰 《中华地方病学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期327-332,共6页

目的 了解核酸内切酶G（endonuclease G，Endo G）介导的非Caspase依赖性细胞凋亡通路参与慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 清洁级SD大鼠60只，体重100 ~ 120 g，按体重采用随机数字表法分成对照组和染氟组，每组30只... 目的 了解核酸内切酶G（endonuclease G，Endo G）介导的非Caspase依赖性细胞凋亡通路参与慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 清洁级SD大鼠60只，体重100 ~ 120 g，按体重采用随机数字表法分成对照组和染氟组，每组30只，雌雄各半，均饲以标准营养动物饲料（含氟量 〈 0.5 mg／kg）。复制慢性氟中毒大鼠模型，对照组自由饮用自来水（含氟量 〈 0.5 mg／L）；染氟组自由饮用含氟化钠蒸馏水（氟含量为50.0 mg／L）。饲养10个月，处死大鼠，取脑组织备用。采用流式细胞术检测脑组织细胞凋亡率；免疫组织化学法检测EndoG在大鼠脑组织皮质及海马区的细胞分布；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Endo G在大鼠脑组织线粒体和细胞核中的蛋白表达。结果 细胞凋亡结果：染氟组大鼠海马、皮质神经细胞凋亡率［（2.6 ± 0.6）%、（3.1 ± 0.7）%］与对照组［（1.3 ± 0.6）%、（1.9 ± 0.3）%］比较明显升高，差异均有统计学意义（t = 3.1、3.4，P均 〈 0.05）。免疫组织化学结果：海马CA1、CA2、CA3、CA4区染氟组Endo G评分［（11.1 ± 2.2）、（10.2 ± 1.9）、（9.8 ± 3.1）、（9.9 ± 1.6）分］与对照组［（5.8 ± 1.8）、（6.7 ± 2.6）、（5.2 ± 2.4）、（7.2 ± 2.1）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.9、2.5、2.4、2.3，P 〈 0.01或 〈 0.05）；额叶上层、额叶下层、顶叶上层染氟组Endo G评分［（10.6 ± 2.9）、（8.2 ± 2.4）、（11.1 ± 2.8）分］与对照组［（7.7 ± 2.6）、（6.1 ± 1.9）、（8.1 ± 2.6）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.2、2.5、2.3，P均〈0.05）。Western blot结果：在海马以及皮质的线粒体中，染氟组EndoG 的蛋白表达［（86.4 ±7.2）%、（83.9 ± 6.8）%］与对照组［（100.0 ± 6.1）%、（100.0 ± 5.5）%］比较明显降低，差异有统计学意义（t = 2.6、2.3，P均 〈 0.05）� 展开更多

关键词 核酸内切酶G 氟中毒 细胞凋亡

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抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

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作者 杨洁 邓于新 +2 位作者 彭亚倩 陈竹懿 齐晓岚 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第13期3187-3192,共6页

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免... 目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 LY294002 冈田酸 磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β p21 p53

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过表达CagA对胃癌细胞中GLUT1表达的影响 被引量：4

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作者 程薇 杨丽萍 +5 位作者 周建奖 谢渊 全欣莹 陈定宇 王琴容 赵艳 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第4期381-386,共6页

目的探究幽门螺杆菌(H.pylori)的细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)过表达对胃癌细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响。方法用过表达cagA腺病毒感染人胃癌细胞株AGS和人原代胃癌细胞,免疫荧光检测GLUT1的表达;用过表达glut1慢病毒及其空载... 目的探究幽门螺杆菌(H.pylori)的细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)过表达对胃癌细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响。方法用过表达cagA腺病毒感染人胃癌细胞株AGS和人原代胃癌细胞,免疫荧光检测GLUT1的表达;用过表达glut1慢病毒及其空载体慢病毒感染胃癌细胞株AGS和BGC-823、0.002 mg/L嘌呤霉素筛选,用Western blot、免疫荧光验证稳转细胞株;最后用过表达cagA腺病毒感染过表达GLUT1的稳转细胞株,免疫荧光检测GLUT1与CagA的细胞定位。结果成功建立过表达glut1的稳转细胞株AGS/glut1和BGC-823/glut1,免疫荧光结果显示CagA和GLUT1蛋白主要在细胞膜上表达,且过表达CagA能引起细胞膜上GLUT1蛋白达降低并出现碎片化,且CagA与Glut1在细胞膜上共定位。结论CagA与GLUT1共定位于细胞膜上,破坏细胞膜,抑制GLUT1蛋白的表达。 展开更多

关键词 胃肿瘤 螺杆菌 幽门 细胞毒素相关基因A蛋白 葡萄糖转运蛋白1

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黄曲霉基因敲除体系的构建及其RNA依赖的RNA聚合酶1基因在生长发育中的作用

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作者 刘翔 杨碧 +4 位作者 田询 周建鸿 禹文峰 齐晓岚 江银辉 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第11期1282-1291,共10页

目的探讨黄曲霉(A.flavus)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在A.flavus生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重... 目的探讨黄曲霉(A.flavus)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在A.flavus生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入A.flavus的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得A.flavus基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与A.flavus表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。 展开更多

关键词 基因敲除技术 原生质体 黄曲霉 重叠延伸聚合酶链式反应 聚乙二醇 RNA依赖的RNA聚合酶1

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黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞凋亡和IL-6/STAT3表达的影响 被引量：3

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作者 张健 彭煜晖 +7 位作者 李毅 梁欣明 付文莉 张婷 柏华 禹文峰 吴昌学 张启芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第6期627-631,638,共6页

目的研究黄连素(BBR)对人耐紫杉醇(PTX)去势性前列腺癌细胞凋亡和白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录因子3(STAT3)表达的影响。方法选取对数生长期人耐PTX前列腺癌细胞株DU145 R,用DMSO、10及20μmol/L BBR处理72 h,采用流式细胞术检测D... 目的研究黄连素(BBR)对人耐紫杉醇(PTX)去势性前列腺癌细胞凋亡和白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录因子3(STAT3)表达的影响。方法选取对数生长期人耐PTX前列腺癌细胞株DU145 R,用DMSO、10及20μmol/L BBR处理72 h,采用流式细胞术检测DU145 R细胞凋亡;取0、10及20μmol/L BBR处理24 h的DU145 R细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)与蛋白印迹(Western blot)分别检测DU145 R细胞中IL-6、STAT3 mRNA及蛋白表达。结果与DMSO组相比,10和20μmol/L BBR组DU145 R细胞凋亡数量增加(P<0.05);与0μmol/L组比较,10和20μmol/L BBR组DU145 R细胞中IL-6与STAT3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论BBR可能通过下调IL-6/STAT3表达诱导DU145 R细胞的凋亡。 展开更多

关键词 白细胞介素6 前列腺肿瘤 前列腺癌细胞 紫杉醇 耐药 黄连素 信号转导与转录因子3

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黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞活力、增殖及HMGB1表达的影响 被引量：2

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作者 张健 彭煜晖 +7 位作者 李毅 梁欣明 付文莉 张婷 柏华 禹文峰 吴昌学 张启芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第6期632-638,共7页

目的探讨黄连素(BBR)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)紫杉醇(PTX)耐药细胞活力、增殖及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响。方法取对数生长期的PTX耐药前列腺癌细胞株DU145 R,用0、5、10、20、30及50μmol/LBBR处理,采用细胞计数试剂盒8(CC... 目的探讨黄连素(BBR)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)紫杉醇(PTX)耐药细胞活力、增殖及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响。方法取对数生长期的PTX耐药前列腺癌细胞株DU145 R,用0、5、10、20、30及50μmol/LBBR处理,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)分别于48和72 h评估6组DU145 R细胞的细胞活力;分别用二甲基亚砜(DMSO)、10及20μmol/L BBR处理对数生长期的DU145 R细胞,采用细胞克隆形成实验检测3组DU145 R细胞的克隆形成数;利用Oncomine数据库与人类蛋白质图谱数据库(HPA)分别分析HMGB1 mRNA及蛋白在前列腺癌和正常组织中的表达,利用TIMER2.0数据库分析HMGB1表达与前列腺癌患者生存的相关性;取对数生长期细胞DU145及DU145 R(分为0、10及20μmol/L BBR处理组),采用蛋白印迹法检测2组细胞中HMGB1蛋白表达。结果与0μmol/L BBR组相比,各浓度组DU145 R细胞的细胞活力降低(P<0.05);与DMSO组相比,5和10μmol/L BBR组DU145 R细胞的克隆形成数量减少(P<0.05);与正常组织相比,前列腺癌组织中HMGB1 mRNA及蛋白表达增加(P<0.001),且HMGB1高表达与前列腺癌患者不良预后相关(P=0.0193);与DU145组相比,DU145 R各组细胞HMGB1的表达明显增高(P<0.001);与0μmol/L BBR组相比,10和20μmol/L BBR组DU145 R细胞HMGB1蛋白表达下调(P<0.05)。结论BBR可抑制CRPC PTX耐药细胞增殖、细胞活力及HMGB1的表达。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 前列腺癌细胞 紫杉醇 耐药 Oncomine数据库 人类蛋白质图谱 高迁移率族蛋白1 黄连素

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N2a/APP695细胞表达载脂蛋白E4对线粒体自噬的影响 被引量：1

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作者 付燕林 吴昌学 +6 位作者 郑菊 龙培艳 张文萍 高霄 王正微 齐晓岚 肖雁 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第5期497-503,共7页

目的探讨载脂蛋白E4(APOE4)表达对N2a/APP695细胞中线粒体自噬的影响。方法慢病毒APOE4感染N2a/APP695细胞构建表达APOE4细胞组(表达组),同时设立N2a/APP695正常细胞组(正常组)、阴性对照慢病毒空载N2a/APP695细胞组(阴性对照组),共3个... 目的探讨载脂蛋白E4(APOE4)表达对N2a/APP695细胞中线粒体自噬的影响。方法慢病毒APOE4感染N2a/APP695细胞构建表达APOE4细胞组(表达组),同时设立N2a/APP695正常细胞组(正常组)、阴性对照慢病毒空载N2a/APP695细胞组(阴性对照组),共3个实验组;培养72 h后进行嘌呤霉素筛选处理,Western blot检测细胞APOE4表达情况、线粒体融合蛋白-2(MFN2)、MFN1及线粒体分裂蛋白-1(FIS1)、线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,激光共聚焦观察线粒体形态及细胞中胆固醇含量,免疫荧光观察线粒体与LC3Ⅱ的共定位情况。结果成功构建表达APOE4的慢病毒感染N2a/APP695细胞;与正常组和阴性对照组相比,表达组MFN2、MFN1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FIS1、PINK1、Parkin蛋白表达明显上调(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值下调(P<0.05),线粒体形态碎片化和细胞中胆固醇高,LC3Ⅱ与线粒体的共定位减少。结论表达APOE4的N2a/APP695细胞中线粒体分裂增多、线粒体自噬关键通路障碍、自噬异常,这可能与APOE4减少胆固醇外排、细胞内游离胆固醇增多、进而破坏线粒体分裂融合平衡有关。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 载脂蛋白E 线粒体自噬 胆固醇

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大肠埃希菌密度感应调节子qseC基因失活突变株构建及其生物学特性

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作者 周青帅 赵行行 +5 位作者 李冬梅 崔古贞 陈峥宏 任玮 齐晓岚 洪伟 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期288-294,共7页

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其... 目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其对大肠埃希菌生理、生化特征的影响。方法使用嗜热二型内含子基因打靶系统(Thermotargetron)构建大肠埃希菌HMS174菌株qseC基因失活突变株,测定其生长速率、溶血能力、生物膜形成和运动能力等表型的变化,以及对酸碱和6种抗生素的敏感性。结果成功构建了大肠埃希菌HMS174 qseC627s位点的打靶载体,该载体基因失活效率为100%。对比大肠埃希菌HMS174与ΔqseC627s突变株的表型发现,突变株生长速率和最大生物量降低、溶血能力丧失、生物膜形成能力降低、运动能力减弱、对酸、碱的耐受能力降低。抗生素敏感性测定结果表明,ΔqseC627s对氯霉素、氨苄青霉素、四环素、阿莫西林、甲硝唑耐受性降低。结论大肠埃希菌HMS174中qseC基因缺失后,突变株表型和对抗外界压力因素发生了显著改变。 展开更多

关键词 大肠埃希菌 密度感应系统 Thermotargetron 突变株表型

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幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

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作者 贾岑岑 王琴容 +2 位作者 周建奖 程薇 赵艳 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第2期133-140,共8页

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA... 目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;H.pylori GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于H.pylori GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。结论CagA是H.pylori感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。 展开更多

关键词 螺杆菌 幽门 胃肿瘤 细胞周期 细胞毒素相关基因A蛋白 DNA损伤 磷酸化组蛋白H2AX

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RANK基因2个SNP位点多态性与贵州燃煤污染型地氟病患病风险的相关性

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作者 赵安宿 田薇 +5 位作者 李瑞超 喻艳琴 王婵娟 张婷 吴昌学 何燕 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第4期391-396,共6页

目的探讨核因子κB受体活化因子(RANK)基因rsrs1505034、rs884205单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤型地氟病患病风险的关系。方法483例贵州地氟病区人群按照氟斑牙诊断标准(WS/T 208-2011)分为地氟组(283例,氟斑牙程度在极轻度及以上)和... 目的探讨核因子κB受体活化因子(RANK)基因rsrs1505034、rs884205单核苷酸多态性(SNP)与贵州燃煤型地氟病患病风险的关系。方法483例贵州地氟病区人群按照氟斑牙诊断标准(WS/T 208-2011)分为地氟组(283例,氟斑牙程度在极轻度及以上)和对照组(200例,氟斑牙分度正常),采用TaqMan-MGB探针法对2组人群外周血DNA样本RANK基因的rs1505034、rs884205位点进行基因分型,分析rs1505034、rs884205等位基因和基因型在两组的分布,采用SNPstats对SNP位点基因型与燃煤型地氟病发生发展的相关遗传模式进行分析,采用SHEsis对RANK基因rs1805034和rs884205位点之间进行连锁不平衡分析。结果RANK基因rs1805034位点等位基因和基因型频率在地氟组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);最优遗传模式分析显示,RANK基因rs1805034位点最优遗传模式为共显性,在该遗传模式下C/T基因型和T/T基因型相对于C/C基因型是燃煤型地氟病发生的保护因素(OR=0.17,95%CI为0.09~0.31;OR=0.04,95%CI为0.02~0.08);rs884205位点与燃煤型地氟病的发生无相关性(P>0.05);SHEsis分析结果显示上述2个位点之间不存在连锁不平衡(D′<0.5)。结论RANK基因rs1805034位点多态型可能与贵州燃煤型地氟病的发生相关。 展开更多

关键词 燃煤污染型地氟病 RANK基因 基因多态性 等位基因 基因型

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