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钠氢交换体-1敲降对缺氧巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1水平及胆固醇外排的影响
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作者 莫显刚 张莉 +4 位作者 张落超 洪伟 王兰 代陆军 文前军 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期909-914,共6页
目的探讨钠氢交换体-1（NHE1）基因敲降对缺氧状态下巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）蛋白水平及胆固醇外流的影响。方法感染表达特异靶向NHE1基因短发夹RNA慢病毒（siNHE1）或表达乱码RNA慢病毒（siNC）的RAW264．7细胞缺氧... 目的探讨钠氢交换体-1（NHE1）基因敲降对缺氧状态下巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）蛋白水平及胆固醇外流的影响。方法感染表达特异靶向NHE1基因短发夹RNA慢病毒（siNHE1）或表达乱码RNA慢病毒（siNC）的RAW264．7细胞缺氧24h，实时定量PCR（qRT-PCR）及免疫印迹（Western blot）检测NHE1 mRNA及蛋白表达水平，用sNARF-1、Fluo-4NW及Suc-LLVY-aminoluciferin分别检测NHE1活性、细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]，）及钙蛋白酶（calpain）活性；免疫印迹检测缺氧状态下ABCA1蛋白水平，高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量及^3H-胆固醇法检测胆固醇外流。结果缺氧相对于常氧上调NHE1 mRNA、蛋白水平表达及活性2．48倍、1．28倍和61．96％（P〈0．05），升高[Ca^2＋]．及calpain活性4．51倍和2．41倍（P〈0．05），而siNHE1降低缺氧细胞NHE1 mRNA、蛋白表达及活性84．95％、60．75％和66．44％（P〈0．05），降低[Ca^2＋]。及calpain活性59．23％和54．66％（P〈0．05）。缺氧使ABCA1蛋白水平降低61．67％（P〈0．05），siNHE1使缺氧细胞ABCA1蛋白水平升高56．52％。缺氧使细胞内总胆固醇及胆固醇酯含量增加74．57％和101．81％（均P〈0．05），而siNHE1降低总胆固醇及胆固醇酯34．24％及49．66％（均P〈0．05）。缺氧降低胆固醇外流34．79％，而缺氧条件下siNHE1使胆固醇外流率升高37．80％。结论NHE1可能通过[Ca^2＋]。／calpain通路在缺氧诱导ABCA1蛋白水平降低及胆固醇外流异常发挥重要作用。 展开更多
关键词 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 钠氢交换体-1 胆固醇
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