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基因治疗骨质疏松、骨转移癌的可行性研究 被引量:2
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作者 刘继中 纪宗玲 +2 位作者 胡蕴玉 陈苏民 陶惠人 《现代康复》 CSCD 2001年第11期54-55,共2页
目的研究人骨保护素(OPG)转染小鼠胚胎成肌细胞C2C12后细胞形态及细胞周期的变化。方法采用Western blot方法证实OPG在真核细胞中表达。对稳定转染OPG基因的C2C12细胞的形态、细胞周期等进行检测。结... 目的研究人骨保护素(OPG)转染小鼠胚胎成肌细胞C2C12后细胞形态及细胞周期的变化。方法采用Western blot方法证实OPG在真核细胞中表达。对稳定转染OPG基因的C2C12细胞的形态、细胞周期等进行检测。结果成功克隆了人OPG编码区基因并构建了真核表达载体pcDNA3-OPG。结论人OPG编码区基因稳定转染的小鼠胚胎成肌细胞生长状态良好,DNA合成旺盛,无诱导细胞凋亡现象,为采用OPG基因治疗骨质疏松、骨转移癌等的可行性提供了依据。 展开更多
关键词 骨保护素 细胞形态 细胞周期 基因疗法 骨质疏松 骨转移瘤
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大鼠烫伤后不同时间、不同厚度皮片移植对p53基因表达的影响
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作者 姚庆君 陈璧 +6 位作者 胡大海 徐明达 董茂龙 贾赤宇 王树森 刘新平 药立波 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第10期108-109,i007,共3页
目的:了解大鼠深Ⅱ度烧伤后不同时间、不同厚度皮片移植对细胞增殖的抑制因子-抑癌基因p53基因表达影响。方法:实验于2002-07/2003-08在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室及基础部生物化学实验室完成。每只大鼠背部两处1%深Ⅱ度烫伤,... 目的:了解大鼠深Ⅱ度烧伤后不同时间、不同厚度皮片移植对细胞增殖的抑制因子-抑癌基因p53基因表达影响。方法:实验于2002-07/2003-08在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室及基础部生物化学实验室完成。每只大鼠背部两处1%深Ⅱ度烫伤,行自体刃厚、全厚皮片移植,移植时间分别为:伤后即刻、伤后1周、伤后2周,在皮片移植术后的1,2,3,4周时间点取材,每个时间点5个标本。提取标本组织总mRNA,行p53基因及内参照PCR扩增,电泳后比较各时间点总光密度值。结果:在伤后即刻、伤后1周及伤后2周皮肤移植p53基因表达量为0.82±0.12,0.72±0.09,0.65±0.07,刃厚、全厚皮片移植后p53基因表达量为0.63±0.06,0.85±0.11,在不同移植时间组及刃厚与全厚皮片组间比较差异均有非常显著性意义(P<0.01),p53基因在大鼠的创伤愈合中表现出了与尽早皮片移植及移植物厚度上的正相关性。结论:p53参与了大鼠烧伤后皮肤移植后的创伤愈合,尽快及尽可能厚的皮肤移植有助于p53表达的增高,可能与减少瘢痕形成有关。 展开更多
关键词 烧伤 瘢痕 肥大性 基因 抑制 基因 P53
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创伤愈合前后不同时期增生性瘢痕组织中p16基因的多态性分析
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作者 姚庆君 贾赤宇 +5 位作者 陈璧 卢宁 徐明达 刘新平 药立波 王树森 《中国临床康复》 CSCD 2004年第29期6372-6373,i005,共3页
目的:了解深Ⅱ度烧伤愈合前及愈合后不同时期增生性瘢痕基因组中抑癌基因p16第2外显子(exon2)有无缺失及突变。方法:深Ⅱ度烧伤临床标本取材时间:愈合早期为17,21,28d及愈后4,8,18,32个月增生性瘢痕组织,每组5例,用聚合酶链反应(PCR)单... 目的:了解深Ⅱ度烧伤愈合前及愈合后不同时期增生性瘢痕基因组中抑癌基因p16第2外显子(exon2)有无缺失及突变。方法:深Ⅱ度烧伤临床标本取材时间:愈合早期为17,21,28d及愈后4,8,18,32个月增生性瘢痕组织,每组5例,用聚合酶链反应(PCR)单链构象多态性(SSCR)分析方法,动态观察p16exon2有无缺失及突变发生。结果:PCR结果显示,基因组中p16exon2无缺失发生,SSCP分析显示各时间点p16exon2无突变发生。结论:基因组中p16exon2在烧伤愈合早期及不同时期增生性瘢痕基因组中未发生缺失与突变,在肿瘤中多见的抑癌基因p16exon2缺失及突变不是烧伤瘢痕增生的发生机制。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 突变 不同时期 深Ⅱ度烧伤 抑癌基因P16 创伤愈合 P16基因 基因组 SSCR 取材时间
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利用基因工程技术构建重组人血小板因子4真核表达载体
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作者 陈衍 杨岚 +3 位作者 朱帮福 纪宗玲 陈苏民 任军 《中国临床康复》 CSCD 2003年第26期3543-3545,T001,共4页
目的:构建携带绿色荧光蛋白标签的重组人血小板因子4基因(plateletfactor4,PF4)的真核表达载体,并在真核细胞中表达,为研究其生物学功能奠定基础。方法:人工合成PF4基因模板,通过PCR方法扩增PF4-cDNA,然后克隆至pUC19克隆载体,经序列测... 目的:构建携带绿色荧光蛋白标签的重组人血小板因子4基因(plateletfactor4,PF4)的真核表达载体,并在真核细胞中表达,为研究其生物学功能奠定基础。方法:人工合成PF4基因模板,通过PCR方法扩增PF4-cDNA,然后克隆至pUC19克隆载体,经序列测定后重组入pIRES2-EGFP真核表达载体并进行酶切鉴定。将鉴定正确的质粒用脂质体转染法瞬式转染至COS7细胞中。结果:获得了PF4-cDNA基因,序列分析表明,该序列与GenBank数据库中的序列一致。重组质粒酶切鉴定表明,PF4基因已与pIRES2-EGFP真核表达载体正确连接。荧光显微镜示,此载体成功转染至COS7细胞中,并获得有效表达。结论:利用基因工程技术,成功的构建了携带绿色荧光蛋白标签的PF4的真核表达载体,并在真核细胞中获得有效表达,为下一步研究其在真核细胞中的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 重组人血小板因子4基因 真核表达载体 绿色荧光蛋白 基因工程技术
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^(131)I-血管抑素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的干预效应
5
作者 邵秋菊 袁梦晖 +4 位作者 徐海峰 李福洋 周润锁 张王峰 杨建 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第14期124-125,i005,共3页
目的:观察131I标记的血管抑素在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠体内的放射受体显像,评价血管抑素及131I-血管抑素和单纯131I对小鼠Lewis肺癌移植瘤的治疗效果,探讨131I-血管抑素治疗实体瘤的临床应用前景。方法:①2001-02/05在第四军医大学唐... 目的:观察131I标记的血管抑素在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠体内的放射受体显像,评价血管抑素及131I-血管抑素和单纯131I对小鼠Lewis肺癌移植瘤的治疗效果,探讨131I-血管抑素治疗实体瘤的临床应用前景。方法:①2001-02/05在第四军医大学唐都医院核医学实验室进行显像实验:用氯胺-T法进行131I标记,将标记产物131I-血管抑素从尾静脉注入荷Lewis肺癌的C57BL/6小鼠体内,用131I标记的白蛋白作为对照,分别于24,48,96,144h后进行ECT扫描。②2002-07/2003-02在该实验室进行治疗实验:28只荷Lewis肺癌的C57BL/6小鼠(右前肢皮下移植瘤直径约1cm)随机分成4组,分别腹腔注射131I-血管抑素(含131I11.1MBq,血管抑素12.5mg/kg),血管抑素(12.5mg/kg),131I(11.1MBq)和生理盐水各0.3mL,1次/周,治疗2次,观察14d内肿瘤体积的变化。结果:131I-血管抑素尾静脉注射后,48h内γ显像以全身分布为主,96h后肿瘤部位显像,并呈高度特异性浓集。131I-血管抑素,131I,血管抑素和生理盐水治疗两周后,各组小鼠Lewis肺癌移植瘤的平均体积分别为(1963±126),(5219±351),(3943±236),(7353±350)mm3,其抑瘤率分别为73.3%,29.0%,46.4%,与生理盐水组比较,差异有显著性意义(P=0.0003)。结论:131I-血管抑素可以高度特异性浓集于小鼠Lewis肺癌移植瘤部位, 展开更多
关键词 肺肿瘤 抑制素类 放射性核素显像
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HER2阳性乳腺癌转移患者最佳治疗方案的研究进展 被引量:3
6
作者 席宇菁 才延辉 +5 位作者 晋毅 曹钟元 相庚 柴丽清 赵晶 阎爱荣 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第35期6984-6989,共6页
针对人表皮生长因子受体HER2的靶向制剂曲妥珠单抗,显著改善了HER2阳性乳腺癌转移患者疾病的发展状况,提高了患者的总体生存期(OS),然而耐药现象时有发生。其它靶向制剂如帕妥珠单抗,酪氨酸激酶受体抑制剂拉帕替尼和ado-transtusumab em... 针对人表皮生长因子受体HER2的靶向制剂曲妥珠单抗,显著改善了HER2阳性乳腺癌转移患者疾病的发展状况,提高了患者的总体生存期(OS),然而耐药现象时有发生。其它靶向制剂如帕妥珠单抗,酪氨酸激酶受体抑制剂拉帕替尼和ado-transtusumab emtansine等克服了其耐药性,为治疗提供了更多选择。这些HER2靶向制剂单用或联用已显示出良好的临床功效,但最佳治疗次序依然未知。随着新型靶向制剂的出现,最佳治疗方案的研究成为热点。本篇综述重点阐述了目前HER2阳性乳腺癌转移患者最佳治疗方案的研究进展,以及新型靶向制剂的现有状况。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 乳腺癌转移 靶向治疗 最佳治疗方案
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抗胃癌单链抗体可变区序列分析及空间结构模拟 被引量:2
7
作者 杨丽娟 侯颖春 +2 位作者 白玉杰 药立波 苏成芝 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第21期2333-2336,共4页
目的:考察抗人胃癌抗体可变区轻、重链序列,选择合适的连接肽构建单链抗体,并模拟其三级结构,预测单链抗体结构与功能关系.方法:利用获得的源自抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出的抗体可变区轻、重链序列,通过分析抗体轻重链可变区C-端、N... 目的:考察抗人胃癌抗体可变区轻、重链序列,选择合适的连接肽构建单链抗体,并模拟其三级结构,预测单链抗体结构与功能关系.方法:利用获得的源自抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出的抗体可变区轻、重链序列,通过分析抗体轻重链可变区C-端、N-端结构特征,选择合适的连接肽,进而利用分子模拟原理构建单链抗体可变区的空间构象;经过力学优化、动力学模拟确定其稳定的三维结构;借助距离几何学、表观静电分布、溶液可及性表面积分析,对单链抗体的结构特征及理化性质进行理论分析.结果:成功获得的单链抗体稳定构象,除连接肽位置的1个氨基酸构象不合理之外,其他位置构象合适.轻链CDR1、CDR2以及重链CDR3溶液可及性表面积分布较强,而轻链CDR3、重链CDR1、CDR2分布较弱.重链CDR3区带有较强的负电性.结论:所构建的单链抗体三维空间结构具有较高的合理性和可靠性. 展开更多
关键词 胃癌 单链抗体 力学优化 动力学模拟 溶液可及性表面积 表观静电分布
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自制显示系统检测免疫印迹中的目的蛋白 被引量:2
8
作者 张晓楠 陈南春 +1 位作者 程司堃 张延凤 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期59-61,共3页
目前蛋白免疫印迹显示系统有显色法和化学发光法,因化学发光法具有灵敏、快速、准确等特点而倍受科研工作者的青睐,但一般商品化的化学发光试剂盒价格颇为昂贵,为此,在参考文献的基础上作了一些改进,将Tris-CI的pH值从7.5提高到11... 目前蛋白免疫印迹显示系统有显色法和化学发光法,因化学发光法具有灵敏、快速、准确等特点而倍受科研工作者的青睐,但一般商品化的化学发光试剂盒价格颇为昂贵,为此,在参考文献的基础上作了一些改进,将Tris-CI的pH值从7.5提高到11.0,同时提高了对碘苯酚的浓度(从1mmol/L提高到2mmol/L),得到了自制的化学发光试剂。首先用其检测了大肠杆茵中表达的2种不同分子量的蛋白(gam,13kDa;bet,30kDa),发现当蛋白上样量为2~20ng时,各蛋白条带均清晰显示。随后的斑点免疫印迹实验表明:自制及进口化学发光试剂在检测酶标二抗效价方面有着同样高的敏感性。 展开更多
关键词 免疫印迹 辣根过氧化物酶 WESTERN BLOT gam蛋白 bet蛋白
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溶氧反馈-分批补料高密度培养人骨形成蛋白-2工程菌 被引量:3
9
作者 李毅 蒲勤 +3 位作者 赵忠良 柴玉波 陈南春 陈苏民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期718-723,共6页
对表达人骨形成蛋白 2成熟肽的基因工程大肠杆菌E .coliDH5α pDH B2 m在 5 0 0mL摇瓶中进行了培养条件的摸索实验 ,并在此基础上扩大至NBSBiofloIV 2 0L发酵罐 ,利用溶氧反馈 -分批补料培养技术 :在培养过程中保持适当的溶解氧 (4 0 % ... 对表达人骨形成蛋白 2成熟肽的基因工程大肠杆菌E .coliDH5α pDH B2 m在 5 0 0mL摇瓶中进行了培养条件的摸索实验 ,并在此基础上扩大至NBSBiofloIV 2 0L发酵罐 ,利用溶氧反馈 -分批补料培养技术 :在培养过程中保持适当的溶解氧 (4 0 % ) ,以溶氧值在线反馈控制搅拌速度及流加补料培养基 ,使细菌保持适当的比生长率 ,成功地进行了工程菌的高密度培养 ,最终菌体密度达OD60 0 =5 7,每升干菌量 2 2 .8g ,目的蛋白的表达量占细菌总蛋白的30 % ,人骨形成蛋白 2成熟肽的理论产率达到 3.5 9g L。 展开更多
关键词 溶氧反馈-分批补料 高密度培养 人骨形成蛋白-2 工程菌
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全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
10
作者 薛国柱 窦科峰 +1 位作者 赵爱志 药立波 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第12期2898-2901,共4页
目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定. 方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮“黏附-洗脱-扩增”的... 目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定. 方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮“黏附-洗脱-扩增”的亲和筛选. 将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过EIASA 法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性. 结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体. 结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性. 展开更多
关键词 全人源肝癌噬菌体单链抗体库 鉴定 筛选 肝癌抗体 肝癌细胞
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抗胃癌抗体重链可变区序列分析及空间结构模拟 被引量:1
11
作者 杨丽娟 侯颖春 +1 位作者 药立波 苏成芝 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第4期413-416,共4页
目的:通过序列分析确定抗胃癌抗体重链可变区(V_H)的一级结构,并借助同源模建方法模拟其三级结构.方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出V_H基因,并进行序列测定、翻译和分析.利用计算机辅助蛋白质空间模拟技术,采用同源模建、力学优化... 目的:通过序列分析确定抗胃癌抗体重链可变区(V_H)的一级结构,并借助同源模建方法模拟其三级结构.方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出V_H基因,并进行序列测定、翻译和分析.利用计算机辅助蛋白质空间模拟技术,采用同源模建、力学优化合理模建V_H的三维空间结构.结果:序列比对分析表明获得的V_H序列符合鼠抗体可变区特征,通过Kabat分析确定了FR、CDR;合理搭建了抗体重链可变区的空间构象,并通过分子力学优化获得了稳定的三维结构.结论:所测得的V_H一级结构和构建的三维空间结构均有较高的可靠性,为进一步的生物学实验奠定了基础. 展开更多
关键词 胃癌 计算机辅助分子模拟 抗体可变区
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抗胃癌抗体轻链可变区序列测定和三维结构模建
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作者 杨丽娟 白玉杰 +2 位作者 药立波 闫小君 苏成芝 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第8期1778-1780,共3页
目的:确定抗胃癌抗体轻链可变区(VL)的一级结构,并模建其三级结构. 方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出VL基因,并进行序列测定和分析.利用同源蛋白结构模建技术,采用计算机辅助分子设计系统模建VL的三维空间结构. 结果:所获得的VL序... 目的:确定抗胃癌抗体轻链可变区(VL)的一级结构,并模建其三级结构. 方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出VL基因,并进行序列测定和分析.利用同源蛋白结构模建技术,采用计算机辅助分子设计系统模建VL的三维空间结构. 结果:所获得的VL序列符合鼠抗体可变区特征,并成功构建了其三维空间结构. 结论:所测得的VL一级结构和构建的三维空间结构均有较高的可靠性. 展开更多
关键词 轻链可变区 噬菌体抗体库 人胃癌 序列测定 三维结构 一级结构 同源蛋白 三维空间结构 VL基因 计算机辅助分子设计
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红细胞作为基因药物运输载体的研究进展
13
作者 吴勋 赵晶 阎博 《医学分子生物学杂志》 CAS 2015年第6期338-341,共4页
基因治疗是一种通过导入治疗性核酸而干预体内基因表达的治疗策略。裸露的基因治疗药物往往存在易被核酸酶降解、细胞靶向能力差和细胞内吞效率低等缺点。因此,需要寻找合适的运输载体,将基因治疗药物安全、高效地运输至靶细胞,以克... 基因治疗是一种通过导入治疗性核酸而干预体内基因表达的治疗策略。裸露的基因治疗药物往往存在易被核酸酶降解、细胞靶向能力差和细胞内吞效率低等缺点。因此,需要寻找合适的运输载体,将基因治疗药物安全、高效地运输至靶细胞,以克服目前基因转运面临的瓶颈问题。近年来,红细胞作为新兴的非病毒基因运载系统,不仅能延长药物在体内的滞留时间,而且可以靶向定位。红细胞在运输DNA、肽核酸、核苷酸类似物等基因药物方面取得了重要进展。 展开更多
关键词 红细胞 基因药物载体 基因治疗
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间充质干细胞恶性转化风险分析
14
作者 才延辉 闫博 赵晶 《医学分子生物学杂志》 CAS 2013年第3期167-171,共5页
间充质干细胞(MSCs)作为组织修复的种子细胞和细胞治疗载体已进入临床试验,但其安全性近年来受到质疑。首先从5个层次总结了MSCs恶性表型的鉴定方法。MSCs的应用包括体外扩增培养和体内注射治疗两个阶段,由于前一阶段可控性相对较... 间充质干细胞(MSCs)作为组织修复的种子细胞和细胞治疗载体已进入临床试验,但其安全性近年来受到质疑。首先从5个层次总结了MSCs恶性表型的鉴定方法。MSCs的应用包括体外扩增培养和体内注射治疗两个阶段,由于前一阶段可控性相对较强,因此分析了MSCs来源、培养代数和培养环境对其恶变的可能影响。最后,还概括了目前利用MSCs体外培养模型推断得出的其恶变可能的分子机制.包括原癌基因活化、抑癌基因失活、病毒感染、miRNA含量调节、细胞因子诱导。 展开更多
关键词 间充质干细胞 恶性转化
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利用双启动子表达载体pDH2-YggG-P_(tac)-Era研究E.coli Era和YggG蛋白间的相互关系
15
作者 黄勇 张晓楠 +4 位作者 王涛 王丽 关路媛 陈南春 陈苏民 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期12-18,共7页
yggG是从大肠杆菌全基因组文库中钓取并克隆的Era结合蛋白基因,研究表明该基因可能表达产物YggG294蛋白对宿主菌的生长具有强烈的抑制作用。为了阐明YggG294所引起的细菌生长抑制是否与Era相关,构建可同时可控性表达Era和YggG294蛋白的... yggG是从大肠杆菌全基因组文库中钓取并克隆的Era结合蛋白基因,研究表明该基因可能表达产物YggG294蛋白对宿主菌的生长具有强烈的抑制作用。为了阐明YggG294所引起的细菌生长抑制是否与Era相关,构建可同时可控性表达Era和YggG294蛋白的双启动子表达载体。利用所构建的双启动子表达载体在同一细胞中同时可控性地表达YggG294与Era蛋白。结果显示,在不表达和少量表达YggG294的细菌细胞内,Era的表达量与总蛋白量的比值随着诱导时间增加而增高,而YggG294大量表达的细菌内Era的表达量未明显改变,并且Era的表达量与总蛋白量的比值基本保持不变,但是在全细胞裂解液中并未检测到Era蛋白的降解产物;Era蛋白的预表达对YggG294表达所引起的细菌生长率下降无影响。上述结果说明,YggG294对Era蛋白无水解作用,YggG与Era蛋白间的相互作用与YggG294对细菌生长抑制作用无直接的联系。由此可以推论,Era与YggG294引起的细菌生长抑制无关,YggG294是通过其它途径引起宿主菌生长抑制。 展开更多
关键词 双启动子表达载体 YggG蛋白 ERA蛋白 功能研究
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人成釉蛋白C端肽的大量表达及纯化
16
作者 田宇 鲁红 +4 位作者 倪龙兴 肖明振 余擎 蒲勤 路凡 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期219-221,共3页
目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,... 目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1mmol/L,32℃继续振荡诱导培养5h,收集细菌,诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱Ni-NTA结合蛋白,收集洗脱蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。②离子交换层析缓冲液(pH 7.4,50 mmol/L Tris·Cl)平衡Q SapharoseHP层析柱,将初步纯化的蛋白样品加在Q Sapharose HP凝胶介质上,梯度洗脱结合的蛋白,收集洗脱峰,制样,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定洗脱蛋白。结果:①表达重组人成釉蛋白C端肽的金属螯合亲和层析结果:诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱下Ni-NTA结合蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳证实获得初步纯化的重组人成釉蛋白C端肽,其中仍含一些杂蛋白。②重组人成釉蛋白C端肽的离子交换层析结果:获得多个蛋白洗脱峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳法证实获得纯化的重组人成釉蛋白C端肽。结论:获得了纯化的人成釉蛋白重组蛋白。 展开更多
关键词 牙釉质蛋白质类/分离和提纯 色谱法 亲和 色谱法 离子交换
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人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性
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作者 田宇 鲁红 +4 位作者 倪龙兴 肖明振 余擎 蒲勤 路凡 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期18-20,共3页
目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫... 目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。 展开更多
关键词 印迹法 蛋白质 牙胚 牙釉质蛋白质类 抗体
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