目的鉴定结核分枝杆菌对异烟肼和链霉素耐药相关的潜在蛋白。方法以药物敏感株(01105)和标准株H37Rv为对照,核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合Nano液相色谱-串联质谱分析仪(LC-M...目的鉴定结核分枝杆菌对异烟肼和链霉素耐药相关的潜在蛋白。方法以药物敏感株(01105)和标准株H37Rv为对照,核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合Nano液相色谱-串联质谱分析仪(LC-MS-MS)技术和生物信息学,鉴定并相对定量结核分枝杆菌对异烟肼与链霉素耐药的临床分离株02166菌体蛋白。结果 02166菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为153个和130个,02166菌株与01105菌株和H37Rv比较差异表达蛋白均为86个(共同差异表达蛋白)。差异表达蛋白理论相对分子质量和等电点分布广泛,相对分子质量从7.63～326.22,等电点从3.74～12.48,其主要参与中间代谢、呼吸作用和脂类代谢。共同差异表达蛋白:9个核糖体蛋白(Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701、Rv0719、Rv1630、Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c)在02166菌株中表达下调;5个蛋白(Rv0234c、Rv2466c、Rv2626c、Rv2986c和Rv3118)在02166菌株中呈显著差异表达,其中琥珀酸半醛脱氢酶(Rv0234c)和假定未知蛋白(Rv2466c)在02166菌株中表达上调倍数>1.2,DNA结合蛋白HU同系物hupB(Rv2986c)、假定未知蛋白(Rv2626c和Rv3118)在02166菌株中表达下调倍数<0.5。结论 iTRAQ发现了耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌异烟肼或链霉素耐药机制奠定了基础。展开更多
文摘目的初步探讨MF59/h BCG复合佐剂增强重组结核分枝杆菌蛋白（TP）免疫反应的机制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分别体外刺激RAW264.7细胞,刺激培养24 h后收集上清,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG、TP及其配伍分别于小鼠左后腿皮下或肌肉注射,注射后24、48或72 h取注射部位的肌肉组织剪碎、PBS冲洗,采用胶原蛋白水解酶消化法和机械法结合将肌肉组织解离为单个细胞;荧光抗体标记细胞,流式细胞术分析巨噬细胞含量。结果任何免疫原刺激RAW264.7细胞,其培养上清均未检测到IL-1β;MF59和h BCG均能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1,且TNF-α分泌水平呈剂量依赖;而TP却不能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1。1∶100 MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25、50μg/ml h BCG和空白对照（所有P〈0.01）;1∶250MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25μg/ml h BCG和空白对照（P〈0.05）。1∶250 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α水平显著低于1∶100 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）（P〈0.01）。同一免疫原皮下注射和肌肉注射后24 h,其注射部位肌肉组织募集的巨噬细胞含量比较,差异均无统计学差异（P〉0.05）;MF59、50μg h BCG、10μg/ml TP、MF59/50μg h BCG和MF59/10μg TP肌肉注射后24 h,均未见明显的巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织,而它们分别皮下注射（除50μg h BCG外）的注射部位肌肉组织募集到不同数量的巨噬细胞;10μg TP皮下注射及MF59/50μg h BCG/10μg TP皮下注射与肌肉注射后24 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量均显著高于PBS对照（P〈0.05）。50μg h BCG皮下注射后72 h和250μg h BCG皮下注射后24 h,其注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高;但与对�
文摘目的鉴定结核分枝杆菌对异烟肼和链霉素耐药相关的潜在蛋白。方法以药物敏感株(01105)和标准株H37Rv为对照,核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合Nano液相色谱-串联质谱分析仪(LC-MS-MS)技术和生物信息学,鉴定并相对定量结核分枝杆菌对异烟肼与链霉素耐药的临床分离株02166菌体蛋白。结果 02166菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为153个和130个,02166菌株与01105菌株和H37Rv比较差异表达蛋白均为86个(共同差异表达蛋白)。差异表达蛋白理论相对分子质量和等电点分布广泛,相对分子质量从7.63～326.22,等电点从3.74～12.48,其主要参与中间代谢、呼吸作用和脂类代谢。共同差异表达蛋白:9个核糖体蛋白(Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701、Rv0719、Rv1630、Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c)在02166菌株中表达下调;5个蛋白(Rv0234c、Rv2466c、Rv2626c、Rv2986c和Rv3118)在02166菌株中呈显著差异表达,其中琥珀酸半醛脱氢酶(Rv0234c)和假定未知蛋白(Rv2466c)在02166菌株中表达上调倍数>1.2,DNA结合蛋白HU同系物hupB(Rv2986c)、假定未知蛋白(Rv2626c和Rv3118)在02166菌株中表达下调倍数<0.5。结论 iTRAQ发现了耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌异烟肼或链霉素耐药机制奠定了基础。
