绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究 被引量：4

1

作者 赵东 马春骥 +3 位作者 李敏 陈晓虎 张旭强 王红燕 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期155-156,共2页

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 k... 为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 猪肺炎支原体 抗原 免疫印迹分析

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谷氨酰胺对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞凋亡的调控作用 被引量：2

2

作者 安琪 于嘉霖 +1 位作者 吴晓玲 邓光存 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期3054-3063,共10页

旨在探讨谷氨酰胺在牛分枝杆菌卡介苗(Bacille Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染巨噬细胞过程中对凋亡的调控作用。本文采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,首先建立了BCG感染致细胞凋亡的细胞模型,采用Western blotting检测凋亡关键因子的... 旨在探讨谷氨酰胺在牛分枝杆菌卡介苗(Bacille Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染巨噬细胞过程中对凋亡的调控作用。本文采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,首先建立了BCG感染致细胞凋亡的细胞模型,采用Western blotting检测凋亡关键因子的表达变化,确定最佳感染条件;进而利用无谷氨酰胺培养基构建谷氨酰胺剥夺模型并结合BCG感染,采用ELISA、免疫印迹、免疫荧光和流式细胞术等技术检测了细胞内谷氨酰胺关键代谢指标的差异变化。通过上述研究,阐明谷氨酰胺对BCG诱导的巨噬细胞凋亡的调控作用,并初步探讨其机制。结果表明,BCG感染显著上调了小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中Caspase 3和PARP的蛋白表达(P<0.001),最佳感染时间为12 h,最佳感染复数为10 MOI,同时BCG感染促进了RAW264.7细胞内谷氨酰胺的分解代谢。剥夺谷氨酰胺后能极显著降低BCG感染后巨噬细胞中谷氨酸(P<0.001)和谷胱甘肽(P<0.01)的含量,极显著增加了细胞内ROS的含量(P<0.001)。同时,抑制谷氨酰胺代谢促进了RAW264.7细胞内促凋亡蛋白Caspase 3、PARP、Cytc和Bax的表达(P<0.001),极显著下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.001)。综上表明,在BCG感染RAW264.7细胞的过程中,抑制谷氨酰胺代谢可以降低细胞内谷胱甘肽的含量,造成ROS的累积,进而通过内源性途径促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 BCG 谷氨酰胺 巨噬细胞RAW264.7 细胞凋亡

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宿主细胞感染支原体后的“宿命” 被引量：1

3

作者 吴习习 罗海霞 +2 位作者 郝秀静 马春骥 李敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期459-465,共7页

支原体(Mycoplasma)是介于细菌与病毒之间的一类原核微生物,无细胞壁,依靠细胞膜维持其个体形态和多种生理功能。临床上,支原体可引起动物和人类多种疾病,严重影响畜牧业的发展,威胁人类健康,但是目前针对支原体疾病的抗生素治疗效果不... 支原体(Mycoplasma)是介于细菌与病毒之间的一类原核微生物,无细胞壁,依靠细胞膜维持其个体形态和多种生理功能。临床上,支原体可引起动物和人类多种疾病,严重影响畜牧业的发展,威胁人类健康,但是目前针对支原体疾病的抗生素治疗效果不佳、疫苗有效性较差,且缺乏较为敏感的诊断工具,加之支原体个体微小、生长缓慢,暂缺乏有效的研究手段,其感染宿主细胞的分子机制仍不清楚,因此,至今支原体引起的疾病很难预防和控制。随着人们对支原体感染宿主细胞机制愈发关注,并取得了一些进展,本文就支原体感染后诱导宿主细胞的凋亡、自噬、癌变等方面进行概述,以期对支原体致病机制的研究提供帮助。 展开更多

关键词 支原体 凋亡 自噬 细胞癌变

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梅花鹿结核分枝杆菌的分离与鉴定 被引量：1

4

作者 谢琴 韩坤 +5 位作者 王玉炯 李敏 徐广贤 李元刚 周栋 吕淑陶 《中国动物检疫》 CAS 2009年第2期58-59,共2页

目的探讨梅花鹿结核病的诊断方法,以及进行结核病的病原学的调查研究。方法利用病理学诊断方法、微生物分离方法以及分子生物学技术对患病梅花鹿进行疾病诊断。结果确定所分离的分枝杆菌是结核分枝杆菌,PCR法扩增出结核分枝杆菌特异的22... 目的探讨梅花鹿结核病的诊断方法,以及进行结核病的病原学的调查研究。方法利用病理学诊断方法、微生物分离方法以及分子生物学技术对患病梅花鹿进行疾病诊断。结果确定所分离的分枝杆菌是结核分枝杆菌,PCR法扩增出结核分枝杆菌特异的225bp片段,证实梅花鹿感染了结核分枝杆菌。结论结核病的诊断可以通过微生物分离诊断方法进行,分子生物学技术在结核病的诊断中的应用逐渐成为必不可少的诊断方法,它将有利于病原分离困难的小块病变组织的诊断。 展开更多

关键词 梅花鹿 结核分枝杆菌 PCR

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结核分枝杆菌Erp蛋白PGLTS的4基序突变体的构建

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作者 郝秀静 马超 +2 位作者 李敏 赵东 马佳丽 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第7期31-34,共4页

以结核分枝杆菌H37Ra DNA为模板,通过PCR扩增,获得靶基因erp片段。采用重叠延伸PCR的方法得到erp基因PGLTS的4基序的突变体,依次删除突变体的C-末端、N-末端和C/N-端,构建重组质粒p ET28a-C4、p ET28a-N4、p ET28a-CN4,转化BL21(DE3)p L... 以结核分枝杆菌H37Ra DNA为模板,通过PCR扩增,获得靶基因erp片段。采用重叠延伸PCR的方法得到erp基因PGLTS的4基序的突变体,依次删除突变体的C-末端、N-末端和C/N-端,构建重组质粒p ET28a-C4、p ET28a-N4、p ET28a-CN4,转化BL21(DE3)p Lys S。对重组菌株IPTG诱导后的表达产物进行Tricine SDS-PAGE,得到大小分别约为11.2、15.4、4.8 ku的目的蛋白。Western blotting分析结果表明,目的蛋白表达特异。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 重复输出蛋白 重叠延伸PCR PGLTS 原核表达

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黑果枸杞多倍体诱导及鉴定 被引量：26

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作者 张虹 龙宏周 +1 位作者 路国栋 陈任 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期59-65,共7页

为了建立黑果枸杞多倍体诱导方法及快速、准确和高效的多倍体鉴定技术,以黑果枸杞二倍体种子经浸泡后的吸胀种子与萌动种子为材料,用不同浓度的秋水仙素进行不同时间的诱导处理,通过流式细胞仪测定细胞核DNA含量的方法对诱导后的植株进... 为了建立黑果枸杞多倍体诱导方法及快速、准确和高效的多倍体鉴定技术,以黑果枸杞二倍体种子经浸泡后的吸胀种子与萌动种子为材料,用不同浓度的秋水仙素进行不同时间的诱导处理,通过流式细胞仪测定细胞核DNA含量的方法对诱导后的植株进行倍性鉴定,并与传统的染色体计数、气孔密度和大小测定、叶绿素相对含量测定等不同方法进行比较。结果表明,0.1%的秋水仙素(内含2%的DMSO)可有效地诱导黑果枸杞萌动种子的染色体加倍,其中24 h处理的效果最好,诱导率为33.3%。经流式细胞仪细胞核DNA含量测定以及压片染色体计数等方法鉴定,获得的多倍体有四倍体、八倍体。在形态上,多倍体植株具有叶色深绿,叶脆,易折断,叶片加厚、卷曲,叶下表皮气孔增大,密度减少等特征。本研究建立的黑果枸杞多倍体诱导方法以及利用流式细胞仪进行细胞核DNA含量测定分析植株倍性技术可方便快速的培育出黑果枸杞多倍体植株,为黑果枸杞新品种选育提供参考。 展开更多

关键词 黑果枸杞 多倍体 倍性鉴定 流式细胞仪

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线粒体自噬与癌症关系的研究进展 被引量：5

7

作者 李旭卉 吴习习 +2 位作者 张凯 罗海霞 李敏 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期109-114,共6页

线粒体自噬是选择性自噬的一种,线粒体通过自噬途径被选择性清除。线粒体自噬对于细胞内环境稳定来说十分关键,细胞利用线粒体自噬机制消除功能障碍的线粒体或减少线粒体数量等来适应应激,维持胞内内环境的稳定。因此,对于线粒体自噬的... 线粒体自噬是选择性自噬的一种,线粒体通过自噬途径被选择性清除。线粒体自噬对于细胞内环境稳定来说十分关键,细胞利用线粒体自噬机制消除功能障碍的线粒体或减少线粒体数量等来适应应激,维持胞内内环境的稳定。因此,对于线粒体自噬的分子机制以及生理作用的研究具有重要的生物学意义。细胞可通过多种分子机制介导线粒体自噬,如PINK1/Parkin、Nix和FUNDC1途径。线粒体自噬调控机制的失调或障碍与人类多种疾病的发病密切相关,有研究发现在多种癌症中存在着不同水平的线粒体自噬,包括直肠癌、肺癌、乳腺癌等,从而也反映了线粒体自噬与癌症的密切关系。论文介绍了线粒体自噬作用和过程的最新研究进展,并着重总结自噬与癌症的关系。 展开更多

关键词 线粒体自噬 PINK1 癌症

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硒砂瓜连作地微生物群落变化及一株优势芽孢杆菌的分离鉴定 被引量：4

8

作者 岳思君 李海荣 +3 位作者 武珍珍 郑蕊 周娟 苏建宇 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2016年第12期19-22,37,共5页

为揭示由于长期连作而造成硒砂瓜减产的主要因素,以不同连作年限的宁夏硒砂瓜种植区土壤微生物作为研究对象,分析连作1 a、连作3 a、连作5 a、连作7 a和连作10 a的硒砂瓜种植区土壤微生物群落的变化规律。在此基础上对一株优势芽孢杆菌... 为揭示由于长期连作而造成硒砂瓜减产的主要因素,以不同连作年限的宁夏硒砂瓜种植区土壤微生物作为研究对象,分析连作1 a、连作3 a、连作5 a、连作7 a和连作10 a的硒砂瓜种植区土壤微生物群落的变化规律。在此基础上对一株优势芽孢杆菌NB1菌株进行分离纯化鉴定。结果表明,随着连作年限的增加,硒砂瓜土壤微生物总量呈明显的下降趋势,且微生物菌群结构也发生了变化,总体表现为真菌增加、细菌和放线菌减少的发展态势。通过芽孢细菌形态特征、生理生化反应结合16S rDNA基因序列分析,初步鉴定NB1菌株为枯草芽孢杆菌。研究结果不仅为改善土壤微生物群落结构提供了理论依据,也为最大限度地发挥有益微生物作用、解决硒砂瓜连作障碍提供了科学依据。 展开更多

关键词 硒砂瓜 连作 微生物群落 芽孢杆菌

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评价ELISA方法在奶牛结核病检测中的应用 被引量：2

9

作者 周栋 周静 +2 位作者 韩坤 李敏 谢琴 《中国动物检疫》 CAS 2009年第5期50-51,共2页

本实验通过PPD变态反应对ELISA检测结果进行评价,为ELISA方法在牛结核病检测中使用的可行性提供一定的数据支持。

关键词 评价 奶牛 牛结核病

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枸杞品质及其与土壤肥力关系的研究 被引量：19

10

作者 张自萍 史晓文 +1 位作者 曹丽华 赵世华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1238-1242,共5页

目的通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬、盛果期和秋果中总糖、多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝卜素的量及百粒质量,并分析总糖碱比,研究枸杞中这些指标间以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。方法采用HPLC和分光光度等实验方法... 目的通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬、盛果期和秋果中总糖、多糖、甜菜碱、氨基酸、总黄酮、类胡萝卜素的量及百粒质量,并分析总糖碱比,研究枸杞中这些指标间以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。方法采用HPLC和分光光度等实验方法以及聚类分析、相关性分析和方差分析等生物统计方法。结果枸杞中各指标被归为以总糖、甜菜碱和类胡萝卜素为代表的3类,各指标受各种土壤肥力因子的作用不同。结论总糖、甜菜碱和类胡萝卜素这3种成分及糖碱比值能较科学地评价枸杞的品质;施肥时应综合考虑各种肥力因子对枸杞成分的协同作用,不宜片面考虑其单一的相关性。该研究为枸杞品质评价及合理施肥提供了依据。 展开更多

关键词 枸杞 总糖碱比 聚类分析 相关性分析 土壤肥力因子

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枸杞糖碱成分及其与土壤肥力间的关系研究 被引量：8

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作者 张自萍 史晓文 +1 位作者 郭荣 郑蕊 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2008年第6期149-153,共5页

通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬果和盛果期果实中总糖、甜菜碱含量,研究枸杞中这两种成分的含量和比值变化以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。结果表明:枸杞头茬果中总糖、甜菜碱含量均大于盛果期,而糖碱比在两茬间无显著性差异,... 通过测定宁夏8个不同产区枸杞头茬果和盛果期果实中总糖、甜菜碱含量,研究枸杞中这两种成分的含量和比值变化以及它们与土壤肥力因子间的相互关系。结果表明:枸杞头茬果中总糖、甜菜碱含量均大于盛果期,而糖碱比在两茬间无显著性差异,但多数处于中糖中碱的优质枸杞范围内;土壤中的速效磷和速效钾是影响枸杞果实糖碱比的关键肥力因子。 展开更多

关键词 枸杞 总糖 甜菜碱 糖碱比 土壤肥力因子

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宁夏枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱指纹图谱研究 被引量：5

12

作者 廖国玲 张自萍 郭荣 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第6期642-646,共5页

建立宁夏枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱指纹图谱,为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。以10批宁夏不同产地的宁夏枸杞主栽品种"宁杞Ⅰ号"样品建立枸杞甜菜碱提取物指纹图谱共有模式,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统&... 建立宁夏枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱指纹图谱,为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。以10批宁夏不同产地的宁夏枸杞主栽品种"宁杞Ⅰ号"样品建立枸杞甜菜碱提取物指纹图谱共有模式,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件进行数据处理,对15批不同来源的枸杞样品进行了分析。结果表明:8个特征峰构成了宁夏枸杞甜菜碱提取物的色谱指纹图谱,不同产地、不同品种的枸杞样品甜菜碱提取物指纹图谱存在差异;建立的枸杞甜菜碱提取物高效液相色谱(HPLC)指纹图谱对不同产地、不同品种枸杞的鉴别有参考价值。 展开更多

关键词 宁夏枸杞 甜菜碱 高效液相色谱 指纹图谱 共有模式 相似度

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叶绿素结合蛋白CP24介导光照响应基因StRSM 1调控叶绿素积累 被引量：3

13

作者 撒世娟 伍涵宇 +2 位作者 张晓萍 郑蕊 姚新灵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期198-204,共7页

单MYB转录因子成员RSM(RADIALIS-like SANT/MYB)突变,倒置黑暗诱导的叶绿素减少,原因有待确定;为了揭示RSM如何调控叶绿素积累,本研究运用基因工程途径,获得了普通烟草和马铃薯体内抑制和过量表达StRSM 1阳性转化株系,测定了阳性转化株... 单MYB转录因子成员RSM(RADIALIS-like SANT/MYB)突变,倒置黑暗诱导的叶绿素减少,原因有待确定;为了揭示RSM如何调控叶绿素积累,本研究运用基因工程途径,获得了普通烟草和马铃薯体内抑制和过量表达StRSM 1阳性转化株系,测定了阳性转化株系的叶绿素积累等生理表型;结果显示,普通烟草和马铃薯体内抑制RSM 1表达,显著增加了叶绿素积累,叶色随之加深;RSM 1过量表达,显著减少叶绿素积累,叶色变浅。叶绿素代谢相关基因表达测定结果显示,StRSM 1过量表达增加了黑暗下叶绿素结合蛋白CP24基因的表达,改变了其表达模式。以上结果表明,转录因子StRSM 1响应光照反向调控叶绿素积累,叶绿素结合蛋白CP24参与了StRSM 1对叶绿素积累的调控。结果有助于进一步明确RSM 1如何响应光照和深刻理解RSM 1参与的光照响应。 展开更多

关键词 StRSM 1 叶绿素结合蛋白 叶绿素

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RIP3对BCG感染后小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用研究 被引量：2

14

作者 韩璐 张嘉美 +4 位作者 于嘉霖 方舒 马臣杰 邓光存 吴晓玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1289-1295,共7页

目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在卡介苗(BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒... 目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在卡介苗(BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒体膜电位及活性氧含量进行检测;通过Western blot检测RIP3及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:BCG感染RAW264.7细胞后,细胞活力下降且RIP3蛋白表达量显著上调(P<0.01)。而与BCG单独感染组相比,BCG感染结合RIP3干扰处理组细胞凋亡率及活性氧含量降低,线粒体膜电位升高,同时促凋亡蛋白Bax与cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著降低(P<0.01)。结论:在BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的过程中,RIP3参与了BCG诱导的RAW264.7细胞的凋亡,且该过程可能是通过线粒体途径实现的。 展开更多

关键词 受体相互作用蛋白3 卡介苗 RAW264.7细胞 细胞凋亡

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