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犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建及初步免疫试验 被引量：2
1
作者 罗洪林 王豪举 +3 位作者 谌剑波 周雪梅 周容琼 周作勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期325-329,共5页
为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)真核表达质粒的免疫原性,本实验利用RT-PCR方法扩增TPx基因,将其克隆于真核表达载体pVAX1中构建重组质粒pVAX1-TPx,并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测,评价其... 为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)真核表达质粒的免疫原性,本实验利用RT-PCR方法扩增TPx基因,将其克隆于真核表达载体pVAX1中构建重组质粒pVAX1-TPx,并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测,评价其在体内诱导的免疫反应。实验结果表明,将pVAX1-TPx转染于Cos7细胞中能够正确表达TPx,其分子量约为28 ku,并被阳性血清所识别。将pVAX1-TPx免疫BALB/c小鼠并采用ELISA检测结果显示,重组质粒免疫组的外周血中抗体、Th2细胞分泌的IL4及IL13细胞因子水平均显著高于空质粒及空白对照组(p<0.05);但Th1分泌的IFN-γ及IL2水平差异不显著。此外,淋巴细胞增殖试验结果也表明,pVAX1-TPx免疫组显著高于其他两个对照组(p<0.05)。实验数据表明pVAX1-TPx免疫可以有效诱导特异性的体液和细胞免疫。 展开更多
关键词 犬恶丝虫 TPx 表达质粒 免疫原性
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IL-4对肝片吸虫感染诱导的巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2分布的影响 被引量：1
2
作者 王晶 张文韬 +5 位作者 王豪举 郭智莉 周雪梅 周容琼 周作勇 罗洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期17-22,共6页
为阐明小鼠感染肝片吸虫后巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2（FABP2）的分布，采用肝片吸虫囊蚴为感染源，经口分别感染雌性BALB／c野生型（wT）及其IL一4单抗处置小鼠，在运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞，并设立人工巯基醋酸... 为阐明小鼠感染肝片吸虫后巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2（FABP2）的分布，采用肝片吸虫囊蚴为感染源，经口分别感染雌性BALB／c野生型（wT）及其IL一4单抗处置小鼠，在运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞，并设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测选择性激活巨噬细胞的标记蛋白Relma、Yml和Ar—ginasel以确定其激活状态。采用特异性抗体对所获取的巨噬细胞细胞质染色后用共聚焦显微镜摄取不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片。野生型BALB／c巨噬细胞中Relma、Yml和Arginasel均大量表达；IL-4单抗处置BALB／c小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠中巨噬细胞中的Relma、Yml和Arginasel的表达量较野生型小鼠中的极显著或显著下降。FABP2在FeMφ中并不分布于细胞质膜下，而是呈点状广泛分布于细胞质中，其荧光强度在12～24h间呈上升趋势，在24～48h间却呈下降趋势。 展开更多
关键词 肝片吸虫 巨噬细胞 脂肪酸结合蛋白2
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小鼠感染肝片吸虫早期IL-4/IFN-!及M2巨噬细胞标记分子的变化 被引量：1
3
作者 罗洪林 张文韬 +3 位作者 郭智莉 周雪梅 周容琼 周作勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1253-1258,共6页
为弄清肝片吸虫感染早期的主要细胞免疫类型及选择性激活巨噬细胞(M2或AAMΦ)标记分子的变化,本试验采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后用间接ELISA对腹腔中IL-4和IFN-!的水... 为弄清肝片吸虫感染早期的主要细胞免疫类型及选择性激活巨噬细胞(M2或AAMΦ)标记分子的变化,本试验采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型小鼠,运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后用间接ELISA对腹腔中IL-4和IFN-!的水平进行测定,并对细胞因子IL-4、转录因子GATA3和M2的标记蛋白Relm"、Ym1分子的mRNA进行荧光定量PCR检测。结果显示,在感染后1,3,5,7周,从所获取肝脏组织中扩增的ITS2片段条带清晰,大小正确,测序后确定为肝片吸虫ITS2序列,表明肝片吸虫感染成功。对腹腔中IL-4和IFN-!的水平测定表明感染组IL-4在感染后1,3,5周比对照组的显著增加(P=0.013,P<0.01,P=0.02),但在第7周时无显著差异。IL-4的水平显著高于IFN-!(P=0.011),而在第7周两者间无显著差异;对腹腔中IL-4、GATA3、Relm"和Ym1mRNA水平的测定结果表明,感染后IL-4和GATA3mRNA水平在第3周达到最高峰;于感染后1,3,5,7周,IL-4和GATA3mRNA水平都分别显著高于对照组(IL4:P=0.01,P=0.012,P=0.023,P=0.014;GATA3:P=0.011,P<0.01,P=0.032,P=0.014),但IL-4和GATA3间无显著差异;Relm"和Ym1mRNA水平都分别显著高于对照组(Relm":P<0.01,P<0.01,P<0.01,P=0.011;Ym1:P<0.01,P<0.01,P<0.01,P=0.012),且二者间无显著差异,并随时间推移mRNA水平都呈下降趋势,于第7周达到最低水平。本研究成功利用肝片吸虫-小鼠模型研究蠕虫感染早期细胞免疫类型及M2标记分子的变化,发现在肝片吸虫感染小鼠早期主要引起Th2为主的细胞免疫。IL-4和M2巨噬细胞标记分子Relm"和Ym1在感染后1,3,5,7周都显著增加且具有相似的变化趋势,但Relm"和Ym1在第1周的高表达可能受诸多因素的影响还有待深入研究。 展开更多
关键词 肝片吸虫 M2巨噬细胞 TH2细胞因子 Relm" Ym1
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IL-4受体阻断对小鼠急性感染肝片吸虫后肝脏单核细胞悬液中细胞因子的影响 被引量：1
4
作者 罗洪林 王豪举 +4 位作者 张文韬 郭智莉 周雪梅 周容琼 周作勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期118-122,共5页
本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13... 本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ进行测定;同时也对肝脏中IL-4及IL-12P40mRNA水平进行荧光定量PCR检测。结果显示,IL-4和IL-5的表达模式相似。在非感染状态下,无论是否进行抗体处置,两者都处于较低表达水平。在感染状态下,两者在非抗体处置小鼠中的表达显著高于抗体处置组(P<0.05)。IL-13与IL-4及IL-5的表达差异在于感染并用抗体处置后,小鼠肝脏单核细胞中的IL-13仍有较高水平表达。IFN-γ的表达量在感染后有所增加,但在有无抗体处理间无显著差异(P>0.05)。mRNA检测结果显示,在非感染状态下,抗体处置后的IL-4mRNA水平显著低于非抗体处置组(P<0.05)。感染后非抗体处置组小鼠中IL-4mRNA水平极显著高于抗体处置组(P<0.01),同时也极显著高于非感染非抗体处置组(P<0.01)。IL-12P40mRNA的水平在感染状态下,抗体处置组的IL-12P40mRNA虽较非抗体处置组低,但无显著差异(P>0.05)。但感染后非抗体处置组的IL-12P40mRNA水平均极显著高于感染组抗体处置和非抗体处置组(P<0.01)。本试验结果表明,IL-4Rα对肝片吸虫感染急性期IL-5和IL-4的表达极其重要,但对IL-13及IFN-γ的影响较小。 展开更多
关键词 肝片吸虫 IL-4受体 肝脏单核细胞 细胞因子
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犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建及初步免疫试验
5
作者 罗洪林 王豪举 谌剑波 《中国畜牧兽医文摘》 2014年第4期68-68,共1页
为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）真核表达质粒的免疫原性，本实验利用RT—PCR方法扩增TPx基因，将其克隆于真核表达载体pvAxloe构建重组质粒pVAXI—TPx，并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测... 为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）真核表达质粒的免疫原性，本实验利用RT—PCR方法扩增TPx基因，将其克隆于真核表达载体pvAxloe构建重组质粒pVAXI—TPx，并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测，评价其在体内诱导的免疫反应。 展开更多
关键词 真核表达质粒 过氧化物酶 硫氧还蛋白 犬恶丝虫 免疫试验 真核表达载体 PCR方法 免疫原性
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