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人软骨肉瘤中miR-140-5p靶基因预测验证及对靶基因表达的调控作用观察 被引量：1
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作者 李竟源 许凯 +6 位作者 刘时璋 刘宗智 易智 杜青芳 王坤正 李建辉 祖超 《山东医药》 CAS 2019年第6期13-16,共4页
目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库... 目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库预测miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因,认为miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)。通过NCBI Gen Bank检索GLUT-1 3'UTR序列。构建野生型(WT,正常表达)、突变型(MUT,抑制表达) GLUT-1 3'UTR双荧光素酶报告载体。取人胚肾细胞HEK 293T分为A、B组,分别转染miR-140-5p mimics(促进miR-140-5p表达)+WT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体、miR-140-5p mimics+MUT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体,利用荧光素酶活性检测试剂盒测算萤火虫荧光素酶相对活性。②转染miR-140-5p对人软骨肉瘤细胞株JJ012的GLUT-1 mRNA及蛋白表达影响:取对数生长期JJ012细胞分为观察组、对照组,分别转染miR-140-5p mimics、NC mimics(空白无意义),转染24 h时采用qRT-PCR法检测两组细胞GLUT-1 mRNA,采用Western blotting法检测两组细胞GLUT-1蛋白。结果①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的直接靶基因可能为GLUT-1。A、B组荧光素酶活性分别为0. 37±0. 03、0. 93±0. 01,二者比较,P <0. 05。②观察组、对照组细胞GLUT-1 mRNA相对表达量分别为0. 31±0. 10、0. 95±0. 06,二者比较,P <0. 05。观察组、对照组细胞GLUT-1蛋白相对表达量分别为0. 42±0. 13、0. 93±0. 07,二者比较,P <0. 05。结论 miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为GLUT-1。miR-140-5p主要通过靶向结合GLUT-1 3'UTR区域进行mRNA转录后调控。miR-140-5p主要通过直接靶向作用于GLUT-1 3'UTR进而抑制蛋白翻译过程。 展开更多
关键词 微小RNA-140-5p 微小RNA-140-5p靶基因 葡萄糖转运蛋白1基因 葡萄糖转运蛋白1 软骨肉瘤
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基于数字信息学方法筛选软骨肉瘤细胞中的抑癌MicroRNA及其对软骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响
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作者 李竟源 刘慧通 +6 位作者 许凯 刘时璋 刘宗智 易智 王洪强 李建辉 祖超 《中国数字医学》 2019年第12期51-55,共5页
目的:筛选软骨肉瘤细胞中的抑癌MicroRNA,研究其对软骨肉瘤细胞迁移、侵袭、增殖和生长能力的影响,为进一步探究其作用机理夯实基础。方法:通过筛选30种文献报道最多的miRNA在人软骨肉瘤组织和细胞中的表达情况,并通过数字信息学方法绘... 目的:筛选软骨肉瘤细胞中的抑癌MicroRNA,研究其对软骨肉瘤细胞迁移、侵袭、增殖和生长能力的影响,为进一步探究其作用机理夯实基础。方法:通过筛选30种文献报道最多的miRNA在人软骨肉瘤组织和细胞中的表达情况,并通过数字信息学方法绘制热点图,获得人软骨肉瘤中显著差异表达的目的miRNA--miR-140-5p;RT-PCR确认miR-140-5p在62例人软骨肉瘤组织及3例人软骨肉瘤细胞系JJ012的表达情况;上调miR-140-5p对JJ012细胞迁移、侵袭、增殖能力的影响;通过裸鼠皮下成瘤实验明确miR-140-5p对JJ012体内成瘤能力的作用。结果:miR-140-5p在软骨肉瘤中的低表达有显著差异性;调高miR-140-5p可明确抑制软骨肉瘤细胞的侵袭、迁移和增殖能力;在裸鼠皮下成瘤实验中,miR-140-5p在体内显著抑制软骨肉瘤的生长。结论:miR-140-5p在人软骨肉瘤组织及JJ012细胞中表达降低;上调miR-140-5p能显著抑制JJ012细胞迁移、侵袭、增殖和生长能力。 展开更多
关键词 数字信息学 软骨肉瘤 热点图 微小RNA-140-5p
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黄芩苷对急性药物性肝损伤小鼠的保护机制 被引量：8
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作者 常虎林 刘司南 +3 位作者 苗润晨 万永 张靖垚 耿西林 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2021年第7期1280-1282,共3页
目的:探讨黄芩苷对急性药物性肝损伤小鼠的保护机制。方法:2019年6月至2019年12月,以陕西省人民医院实验中心提供的6~8周C57BL/6雄性小鼠进行实验。采用腹腔注射对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠急性药物性肝损伤模型。按随机数字表法分为空... 目的:探讨黄芩苷对急性药物性肝损伤小鼠的保护机制。方法:2019年6月至2019年12月,以陕西省人民医院实验中心提供的6~8周C57BL/6雄性小鼠进行实验。采用腹腔注射对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠急性药物性肝损伤模型。按随机数字表法分为空白对照组(Control组)、药物肝模型组(APAP组)及黄芩苷治疗组(BA+APAP组),处理16 h后取血标本及肝脏组织,检测各组血清谷丙转氨酶(ALT)活性、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;肝组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、白细胞介素-6(IL-6)水平;观察肝脏病理形态学改变;检测肝组织中细胞外信号调节激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)的表达变化。组间比较采用单因素方差分析。结果:光镜下黄芩苷治疗组肝损伤程度较模型组明显减轻;黄芩苷治疗组血清ALT、血清AST明显低于模型组[(614.2±132.9)、(498.7±52.8)U/L比(6826.4±684.2)、(5860.7±464.8)U/L,t=44.862、67.850,P均<0.05];黄芩苷治疗组血清TNF-α、血清IL-6明显低于模型组[(156.8±44.3)、(673.1±43.7)pg/ml比(334.3±36.8)、(899.8±98.9)pg/ml,t=18.702、3.644,P均<0.05];芩苷治疗组肝匀浆MDA含量明显低于模型组[(6.3±1.6)nmol/mg蛋白比(9.7±1.6)nmol/mg蛋白,t=38.524,P<0.05];黄芩苷治疗组肝匀浆SOD活性明显高于模型组[(12.7±1.7)U/mg蛋白比(8.0±0.6)U/mg蛋白,t=4.854,P<0.05];黄芩苷治疗组肝组织p-ERK/ERK蛋白比值明显低于模型组(0.4±0.2比1.0±0.1,t=18.974,P<0.05)。结论:黄芩苷对APAP诱导的急性药物性肝损伤小鼠具有保护作用,其作用机制可能与减少ERK磷酸化有关。 展开更多
关键词 黄芩苷 对乙酰氨基酚 细胞外调节蛋白激酶 肝损伤
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