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人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用 被引量：6
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作者 赵晶 贾林涛 +5 位作者 许彦鸣 金明 张淼丽 李继硕 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期113-116,共4页
目的　　观察颗粒酶Ｂ（ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ）融合蛋白对转染的ＨｅＬａ细胞的作用。　方法用ＲＴ－ＰＣＲ法获取人ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ全长ｃＤＮＡ，经重组ＰＣＲ将活性型序列的５′端与一段　ＰＥ转膜肽序列融合。将所获重组基因... 目的　　观察颗粒酶Ｂ（ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ）融合蛋白对转染的ＨｅＬａ细胞的作用。　方法用ＲＴ－ＰＣＲ法获取人ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ全长ｃＤＮＡ，经重组ＰＣＲ将活性型序列的５′端与一段　ＰＥ转膜肽序列融合。将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）共表达载体ｐＩＲＥＳ２－ＥＧＦＰ，转染ＨｅＬａ细胞。用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达，荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构。　结果成功地获得了野生型ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ　ｃＤＮＡ及其融合蛋白基因，并构建了融合蛋白基因与ＧＦＰ基因共表达的真核载体。转染ＨｅＬａ细胞后，检测到目的蛋白的表达。荧光显微镜观察转染细胞有两种变化：一种表现为体积增大并常伴随多核现象；另一种出现细胞质和细胞核的固缩。电镜观察显示，多核巨细胞生长状态良好，固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征。结论ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ融合蛋白在ＨｅＬａ细胞中异位表达，可使转染细胞的形态发生变化，出现多核的大细胞和核固缩的小细胞。 展开更多
关键词 granzymeB 融合蛋白 HELA细胞 基因表达
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