结晶紫-杂多酸分光光度法测定地表水中痕量磷酸盐和硅酸盐 被引量：11

1

作者 顾范博 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2005年第6期514-515,共2页

关键词 结晶紫-杂多酸分光光度法 磷酸盐 硅酸盐

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人类新型β3半乳糖基转移酶基因β3GalT7的克隆和鉴定 被引量：3

2

作者 周嘉梁 黄超群 +5 位作者 吴士良 孙其昌 雷伟 金美芳 姜智 沈宏杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第2期140-146,共7页

从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7(AY277592,EC2.4.1.-),并对其进行了鉴定. 该基因定位在人类染色体19q13.2. 它包含一个1 191 bp的开放阅读框(ORF). 编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖... 从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7(AY277592,EC2.4.1.-),并对其进行了鉴定. 该基因定位在人类染色体19q13.2. 它包含一个1 191 bp的开放阅读框(ORF). 编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖基转移酶结构域,分子质量和等电点分别为43.3 ku和8.37. 从原核表达中获得的融合蛋白的分子质量和预测相符. RNA印迹杂交显示β3GalT7在肺、喉和回肠组织中高表达,而在舌、乳房、子宫、睾丸等组织中表达较低. 此外半定量RT-PCR显示β3GalT7在人类不同的肿瘤细胞中转录水平有明显差异. 展开更多

关键词 β3GalT7 克隆 RNA印迹 肿瘤细胞株

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人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究 被引量：1

3

作者 仇灏 金美芳 +4 位作者 周迎会 孙其昌 刘可人 沈宏杰 吴士良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期43-48,共6页

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp... 反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关. 展开更多

关键词 多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶 基质金属蛋白酶 转化生长因子-Β1 SGC7901细胞

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多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2真核表达载体的构建及在SHG-44细胞的表达 被引量：1

4

作者 金美芳 潘浩 +2 位作者 郭向红 仇灏 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2004年第4期277-279,281,共4页

目的 :为探讨O 糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能 ,构建pcDNA3/ppGalNAc T2真核表达质粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG 4 4。方法 :采用PCR技术从pDONR2 0 1 T2得到ppGalNAc T2全长编码序列 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA 3 1,脂质... 目的 :为探讨O 糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能 ,构建pcDNA3/ppGalNAc T2真核表达质粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG 4 4。方法 :采用PCR技术从pDONR2 0 1 T2得到ppGalNAc T2全长编码序列 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA 3 1,脂质体介导基因转染人神经胶质瘤细胞SHG 4 4细胞 ,采用RT PCR法检测重组质粒的表达。结果 :酶切图谱分析和基因测序证实pcDNA3 1 T2真核表达质粒构建成功。RT PCR显示转染细胞有T2的表达。结论 :成功构建了真核表达载体pcDNA3 1 T2 ,并成功转染入SHG 4 4细胞 ,为进一步研究ppGalNAcT2的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2 神经胶质瘤细胞 O-糖基化 真核表达载体 肿瘤发展 肿瘤转移

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人ppGalNAc-T2的原核表达、纯化及其蓖麻蛋白样结构域的结构预测

5

作者 金美芳 丁向明 +4 位作者 仇灏 吴士良 周嘉梁 郭向红 潘浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期476-481,共6页

多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21... 多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISSMODEL服务器对ppGalNAcT2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX4T1T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点. 展开更多

关键词 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 融合表达 谷胱甘肽S-转移酶亲和柱 蛋白印迹 蓖麻蛋白样结构域 结构模拟

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干扰素治疗病理性瘢痕的实验研究

6

作者 孙其昌 周嘉梁 +2 位作者 王秀珍 周迎会 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2004年第4期282-284,共3页

目的 :研究体外干扰素 (INF)对瘢痕组织成纤维细胞 (FB)中转化生长因子 β1(TGF β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF BB)、基质金属蛋白酶 (MMP 1)以及糖基转移酶 (ppGalNAc T2 )的mRNA表达的影响 ,以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理... 目的 :研究体外干扰素 (INF)对瘢痕组织成纤维细胞 (FB)中转化生长因子 β1(TGF β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF BB)、基质金属蛋白酶 (MMP 1)以及糖基转移酶 (ppGalNAc T2 )的mRNA表达的影响 ,以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理。方法 :组织块法培养瘢痕组织FB ,传代后分成 3组①对照组 :生理盐水处理 ;②低浓度组 :10 0U/mlINF α2b处理 ;③高浓度组 :10 0 0 0U/mlINF α2b处理 ;RT PCR检测TGF β1、MMP 1、PDGF BB及ppGalNAc T2表达。结果 :体外培养瘢痕FB经 10 0U/ml及 10 0 0 0U/ml干扰素α 2b处理后 ,RT PCR检测TGF β1、PDGF BB及pp GalNAc T2表达降低 ,MMP 1表达升高 ,呈显著差异 ,且具有浓度依赖性。结论 :干扰素α2b对瘢痕FB具有抑制作用 ,其机理可能与多种细胞因子有关 ,如TGF β1、PDGF BB。 展开更多

关键词 增生性瘢痕 干扰素Α2B TGF-β1 PDGF-BB MMP-1 ppGalNAcT2 治疗 病理性瘢痕 实验 转化生长因子β1 血小板衍生生长因子BB 糖基转移酶 基质金属蛋白酶

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一个中国雄性激素不敏感综合征大家系中AR-Arg^(840)Cys突变的生物学效应

7

作者 王明华 叶璐夷 +3 位作者 蒋东 吴士良 赵志民 王久存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期160-166,共7页

雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤... 雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤维细胞系(GSF),并研究了各细胞系的生长动力曲线和生长周期的分布,发现这些指标和个体病症的严重程度呈一定的正相关性.通过比较野生型与突变性AR的空间结构变化以及转激活能力的变化,结合个体表型的差异性,推测由于个体的基因背景差异,相关AR辅调控因子的表达也会存在着差异,可能最终导致该家系患者显著的表型变化.目前,已利用蛋白质双向电泳,观察到个体间差异表达的蛋白,并在其中寻找AR的辅调控因子,以期进一步阐明AR-Arg840Cys突变一因多效性的机制. 展开更多

关键词 雄性激素不敏感综合征 生殖器皮肤成纤维细胞 辅调控因子 转激活

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GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

8

作者 王明华 蒋东 +1 位作者 吴士良 王久存 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期496-499,共4页

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠... 目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 双向电泳 GSF细胞 蛋白质组

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人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究

9

作者 杭赛宇 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第2期105-108,共4页

目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二... 目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化。 展开更多

关键词 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 序列比较 结构域 系统进化树

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O-糖基化位点预测及糖基化酶催化特点 被引量：7

10

作者 刘可人 金美芳 吴士良 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期25-27,共3页

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催... O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。 展开更多

关键词 O-糖基化 黏蛋白 脯氨酸 串联重复 ppGaNTases

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肺癌患者血清肿瘤标志物检测的临床意义 被引量：5

11

作者 徐跃华 汪家敏 《中国血液流变学杂志》 CAS 2004年第4期524-526,共3页

目的　测定小细胞肺癌和晚期非小细胞肺癌患者化疗前后癌胚抗原 (CEA)、细胞角蛋白 19片段 (CYFRA2 1 1)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的变化 ,并探讨该种变化的临床意义。方法　用放射免疫分析的方法分别测定 2 0例肺部良性疾病、2 0... 目的　测定小细胞肺癌和晚期非小细胞肺癌患者化疗前后癌胚抗原 (CEA)、细胞角蛋白 19片段 (CYFRA2 1 1)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的变化 ,并探讨该种变化的临床意义。方法　用放射免疫分析的方法分别测定 2 0例肺部良性疾病、2 0例广泛期小细胞肺癌 (SCLC)以及 4 5例初诊晚期非小细胞肺癌 (NSCLC)患者化疗前后血清CEA、CYFRA2 1 1、NSE的水平 ,再分别作对比分析。结果　肺癌组CEA、CYFRA2 1 1、NSE的水平高于良性疾病组 ,但CYFRA2 1 1在良性疾病和小细胞肺癌中、NSE在良性疾病和鳞癌以及良性疾病和腺癌中均未见统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;化疗后小细胞肺癌患者NSE显著下降 (P <0 0 1) ,鳞癌患者CYFRA2 1 1水平显著下降 (P <0 .0 1) ,但在腺癌患者只有NSE水平较化疗前下降 ,另两种标志物未见统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论　三种肿瘤标志物在非小细胞肺癌晚期均升高 ,其中CEA在腺癌、CYFRA2 1 1在鳞癌、NSE在SCLC中尤为明显 ,化疗后显著下降 ,三种指标的测定有助于肺癌的病理分型 ,并且可以分别作为判定不同病理类型肺癌化疗疗效的指标。 展开更多

关键词 CYFRA21-1 NSE 患者 良性疾病 鳞癌 肺癌 临床意义 水平 结论 差异

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β3GalT7基因的小干扰RNA筛选及其表达载体构建

12

作者 朱琍燕 仇灏 +4 位作者 岳爱环 马珍妮 吴艳 胡鹤娟 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2007年第2期93-96,共4页

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带... 目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带有荧光标记的RNA oligo进一步验证其有效性,进而构建该基因的RNA干扰表达载体建立其下调表达模型。结果:成功筛选到β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并进一步成功构建β3GalT7的RNA干扰真核表达载体。结论:成功构建β3GalT7的真核干扰表达载体,继而可以获得β3GalT7表达受抑制的人胃癌细胞SGC7901克隆,为研究该基因在肿瘤发生发展中的作用提供实验模型。 展开更多

关键词 人β1 3-半乳糖基转移酶7基因 小干扰RNA RNA干扰表达载体

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