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猪细小病毒M2株在ST细胞中培养条件优化 被引量：5
1
作者 唐满华 陈瑞爱 +5 位作者 何玲 李春红 梁桂益 廖翠银 陈振波 同戈 《现代畜牧兽医》 2013年第10期55-60,共6页
为探索猪细小病毒M2株在ST细胞中培养的适宜条件，将其分别以同步接毒法和单层接毒法接种于ST细胞，比较其接种效果，选择更有效的方法，再对其培养条件（细胞浓度、血清种类、血清含量和收毒时间等）进行优化。结果表明，同步接种法相... 为探索猪细小病毒M2株在ST细胞中培养的适宜条件，将其分别以同步接毒法和单层接毒法接种于ST细胞，比较其接种效果，选择更有效的方法，再对其培养条件（细胞浓度、血清种类、血清含量和收毒时间等）进行优化。结果表明，同步接种法相对于单层接种法更具优势。同步接毒，采用含量为5%的胎牛血清或6%的新生牛血清培养，细胞浓度控制在3.2×104～1.5×105个/mL内，在病毒接种后，80%以上细胞出现细胞病变时收获病毒，能获得较高病毒含量的病毒液。本研究结果为制备高效价的PPV- M2株病毒抗原提供了数据资料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ST细胞 培养条件
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猪卵泡抑素基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达
2
作者 刘玉鹏 陈瑞爱 +1 位作者 李超 施振旦 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期12-15,共4页
根据猪卵泡抑素(follistatin,FS)基因编码区序列(GenBank登录号:M36512.1)设计并合成1对引物,经PCR扩增获得了FS基因成熟肽序列,将其克隆入pMD18-T载体并转化E.coli DH5α感受态细胞,进行PCR、双酶切及测序验证。然后将其克隆到表达载体... 根据猪卵泡抑素(follistatin,FS)基因编码区序列(GenBank登录号:M36512.1)设计并合成1对引物,经PCR扩增获得了FS基因成熟肽序列,将其克隆入pMD18-T载体并转化E.coli DH5α感受态细胞,进行PCR、双酶切及测序验证。然后将其克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pR-FS并转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,再经PCR、双酶切和测序验证。转化重组质粒pR-FS的重组菌经IPTG诱导后的表达产物进行SDS-PAGE分析,分子质量与预期相符,为26.1ku左右,经0.2mmol/L IPTG诱导3h之后表达量达到最高,约占总菌体蛋白的30%。表达产物可经Ni-NTA凝胶纯化。以上结果表明正确完成了猪FS基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达及纯化。 展开更多
关键词 卵泡抑素 成熟肽序列 克隆 表达
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猪伪狂犬病病毒TK／gE双基因缺失株PRV／TK^-／gE^-的构建及其生物学特性 被引量：5
3
作者 邵定勇 黄红亮 +3 位作者 唐兆新 任常宝 谢小雨 陈瑞爱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1127-1132,共6页
为了构建伪狂犬病病毒新兴株(PRV-XX)TK/gE双基因缺失的重组病毒,利用PCR从PRV-XX株基因组分别扩增gE基因两侧序列LgE和RgE,将LgE和RgE克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-gE/HEK;进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到质粒... 为了构建伪狂犬病病毒新兴株(PRV-XX)TK/gE双基因缺失的重组病毒,利用PCR从PRV-XX株基因组分别扩增gE基因两侧序列LgE和RgE,将LgE和RgE克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-gE/HEK;进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到质粒中,构建转移质粒pUC19-gE/EGFP;先用构建好的pUC19-TK/EGFP质粒与PRV-XX基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-/EGFP;再用pUC19-TK/HEK与PRV/TK-/EGFP病毒基因组共转染BHK21细胞,噬斑筛选纯化获得重组病毒PRV/TK-。在此基础上,用同样方法获得重组病毒PRV/TK-/gE-/EGFP和PRV/TK-/gE-。重组病毒PRV/TK-/gE-的生物学特性研究结果表明:TK/gE缺失稳定,30代次内未见缺失位点变化;TK/gE缺失后,重组病毒PRV/TK-/gE-毒力是亲本毒株PRV-XX株的1/48,但不影响其在ST细胞上的增殖;PRV/TK-/gE-对猪安全有效,其最小免疫剂量为105.0 TCID50,免疫水平与某进口伪狂犬病疫苗相当。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒XX株 TK gE双基因缺失 生物学特性
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多黏菌素B应用研究进展 被引量：2
4
作者 刘锦容 张文炎 +2 位作者 詹烜子 唐兆新 陈瑞爱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第9期99-101,共3页
多黏菌素B(PMB)具有杀菌与中和内毒素活性双重功效。近年来,医院感染的多重耐药革兰阴性菌日益增多,使得PMB重新受到重视。由于无法确定单独使用或联合用药时PMB的药物代谢学、药效学和毒效学等参数,PMB的最佳剂量仍无法确定。PMB在去... 多黏菌素B(PMB)具有杀菌与中和内毒素活性双重功效。近年来,医院感染的多重耐药革兰阴性菌日益增多,使得PMB重新受到重视。由于无法确定单独使用或联合用药时PMB的药物代谢学、药效学和毒效学等参数,PMB的最佳剂量仍无法确定。PMB在去除内毒素方面的应用主要是利用多黏菌素B固定化纤维柱(PXB),通过血液灌流过滤法在体外治疗脓毒血症和休克反应,已经取得良好效果,但由于研究分析存在缺乏空白对照等问题,仍需对PXB进行细致的研究,从而使其广泛应用到易受内毒素污染的化学药品和生物制品的生产中去。 展开更多
关键词 多黏菌素B 多重耐药革兰阴性菌 内毒素
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猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究 被引量：1
5
作者 唐满华 陈瑞爱 +1 位作者 何玲 梁桂益 《中国兽药杂志》 2013年第1期14-16,22,共4页
通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,... 通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ST细胞 增殖规律
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PPV培养细胞的选择及在ST细胞中的增值规律
6
作者 唐满华 陈瑞爱 +5 位作者 何玲 李春红 梁桂益 廖翠银 陈振波 同戈 《中国动物保健》 2013年第11期19-23,共5页
猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同，如不能掌握其规律，将难以生产出优质的疫苗.本研究对PPV（M2株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究，得出ST细胞更适合其生长。之后将PPVM2毒株同步接种于ST细胞，用测定HA和TCID5... 猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同，如不能掌握其规律，将难以生产出优质的疫苗.本研究对PPV（M2株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究，得出ST细胞更适合其生长。之后将PPVM2毒株同步接种于ST细胞，用测定HA和TCID50的方法研究了其在ST细胞上增殖的基本规律。病毒在接种后24h可在细胞较稀的区域看到非常轻微的病变，病毒TCID50测定结果也表明，接毒后17h，病毒已经明显增殖。当病毒培养到约40h，其TCID50即接近高峰，并进入平台期，病毒的TCID50已达到10^7.5／0．hmL以上。继续培养，最高可达到10^8.5／0．1mL以上，且直到122h，也不见明显降低。病毒培养40-122h，不管是用Gibco血清还是用Hyclone血清培养病毒，其差异都非常小，变异系数都在5％以内。病毒HA价也出现同样的平台期，但HA价的平台期出现比TCID50的平台期出现更晚。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ST细胞 增值规律
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