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沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究 被引量：4
1
作者 王洁 张颖骞 +1 位作者 钟光明 余平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1558-1561,共4页
目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1b... 目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 OmcB 抗原性
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鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
2
作者 王洁 张颖骞 +1 位作者 钟光明 余平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期2219-2223,共5页
目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免... 目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 TARP 单克隆抗体
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沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位及抗原性研究 被引量：5
3
作者 陆春雪 曾浩 +5 位作者 吴移谋 彭波 胡四海 蔡恒玲 李忠玉 钟光明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期203-207,共5页
目的分析沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位并探讨其抗原性。方法利用PCR技术获得衣原体CT841基因,将基因序列克隆到载体pGEX6p,转化大肠杆菌XL1-blue,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT841。融合蛋白经纯化后免疫小鼠制备特异性抗... 目的分析沙眼衣原体蛋白水解酶CT841在感染细胞中的定位并探讨其抗原性。方法利用PCR技术获得衣原体CT841基因,将基因序列克隆到载体pGEX6p,转化大肠杆菌XL1-blue,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT841。融合蛋白经纯化后免疫小鼠制备特异性抗体,间接免疫荧光法分析CT841在感染细胞中的分布特征;ELISA法分析CT841的抗原性。结果CT841原核表达重组体成功构建;CT841在感染细胞的表达模式与主要外膜蛋白MOMP相似,而与衣原体蛋白酶样活性因子CPAF及包涵体膜蛋白IncA的分布模式不同;CT841与衣原体感染患者、猴、鼠血清均发生强烈的免疫反应。结论沙眼衣原体蛋白酶CT841是定位于衣原体菌体上的免疫优势抗原。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 CT841 细胞定位 抗原性
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沙眼衣原体D型生殖道感染小鼠动物模型的建立及评价 被引量：4
4
作者 陆春雪 吴移谋 +4 位作者 彭波 胡四海 李忠玉 陈丽丽 钟光明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期212-217,共6页
目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应... 目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应用该临床株建立ctD型感染模型，免疫荧光检测阴道脱落上皮细胞中衣原体的含量；原位组织免疫荧光检测上生殖道的衣原体感染定植情况；分离生殖道组织，肉眼观察并进行病理学评分。结果ct临床株感染小鼠下生殖道其排菌量及排菌周期明显延长，可见衣原体有上行感染和定植，并能引发类似人类生殖道感染的病理变化。结论成功建立了CtD型生殖道感染动物模型。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 生殖道感染 动物模型
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