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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用 被引量：53
1
作者 肇静娴 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 王南 狄静芳 曾山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-111,共3页
目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或C... 目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 + T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4 + T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术 。 展开更多
关键词 活体染料羧基荧光素乙酰乙酸 CFDA-SE 淋巴细胞 细胞增殖 荧光抗体标记 流式细胞术
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黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用 被引量：36
2
作者 何贤辉 曾耀英 +2 位作者 徐丽慧 邱海霞 蔡小嫦 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1183-1186,共4页
目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活... 目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。 展开更多
关键词 黄连素 T淋巴细胞 活化抗原 细胞周期
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喘可治注射液对人外周血单个核细胞Th1/Th2细胞因子谱的影响 被引量：43
3
作者 肇静娴 曾耀英 +2 位作者 王青 俞瑜 王通 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期356-359,共4页
目的:通过研究喘可治注射液对人外周血单个核细胞(PBMCs)Th1/Th2细胞因子谱的影响,探讨喘可治注射液的免疫调节作用机制。方法:以流式微球分析(CBA)法检测不同处理情况下,人外周血单个核细胞分泌Th1(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2(IL-4、I... 目的:通过研究喘可治注射液对人外周血单个核细胞(PBMCs)Th1/Th2细胞因子谱的影响,探讨喘可治注射液的免疫调节作用机制。方法:以流式微球分析(CBA)法检测不同处理情况下,人外周血单个核细胞分泌Th1(IFN-γ、TNF-α、IL-2)和Th2(IL-4、IL-6、IL-10)细胞因子水平。结果:健康人PBMCs体外培养12小时后,上清中细胞因子主要为TNFα和IL6,喘可治使Th1和Th2细胞因子全面升高;喘可治对PDB加离子霉素诱导的PBMCs分泌Th1和Th2细胞因子具有抑制作用,并能抑制流感病人异常升高的INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-10分泌。结论:喘可治注射液上调健康人PBMCs分泌Th1和Th2细胞因子,对异常活化的PBMCs分泌的Th1和Th2细胞因子则具有下调作用。 展开更多
关键词 喘可治 外周血单个核细胞 TH1/TH2 细胞因子 流式微球分析法
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无排卵型功血患者子宫内膜VEGF和雌、孕激素受体的表达 被引量：24
4
作者 罗璐 朱凤川 +1 位作者 曾耀英 马炎辉 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第2期196-200,共5页
研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增... 研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增殖期和 6 0例无排卵型功血患者子宫内膜的表达。选用微血管密度标记物CD34,测定子宫内膜微血管密度 (MVD)。无排卵型功血患者单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮VEGF蛋白和MVD明显低于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 ) ;而单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮PR蛋白明显高于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 )。相关分析显示 ,子宫内膜腺上皮VEGF与MVD呈显著性正相关 (r =0 6 6 6 ,P <0 0 5 ) ;与腺上皮PR呈显著性负相关 (r=- 0 6 2 9,P <0 0 5 )。正常增殖期内膜与功血增殖期内膜比较 ,腺上皮VEGF和PR蛋白差异无显著性意义。首次指出病理表现为单纯性增生和复合性增生的无排卵型功血患者 ,其子宫异常出血与子宫内膜VEGF和PR的表达失调有关。PR间接作用于无排卵型功血子宫内膜腺上皮VEGF ,使后者分泌减少 ,微血管形成障碍 。 展开更多
关键词 无排卵型功血 子宫内膜 VEGF 雌激素受体 表达 孕激素受体 功能性子宫出血
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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量：24
5
作者 何贤辉 徐丽慧 +1 位作者 刘毅 曾耀英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期99-103,共5页
β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。 展开更多
关键词 β2-微球蛋白基因 克隆 大肠杆菌 表达 基因克隆 重组蛋白 包涵体
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天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究 被引量：16
6
作者 何贤辉 曾耀英 +3 位作者 孙荭 曾洁铭 徐丽慧 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期200-203,T001,共5页
目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞... 目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡现象 ,TCS (2 0mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为 48 7%± 2 3% ( x±s) ,明显高于对照组的凋亡率 (6 3%± 1 0 % ) (P <0 0 5 ) ,而CHX (5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为 6 5 3%± 3 9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实 ,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变 ,如染色体凝缩、核碎裂等 ;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX (0 2mg/L)处理可显著加强TCS的作用 ,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL - 6 0细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论 :TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡 ,CHX可加强这种作用。 展开更多
关键词 天花粉素 放线菌酮 细胞凋亡 流式细胞术 白血病 HL-60细胞
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雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用 被引量：21
7
作者 俞瑜 曾耀英 +2 位作者 刘良 季煜华 肇静娴 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期499-502,共4页
目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(C... 目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 小鼠 体外活化 IFN-γmRNA表达 RT-PCR技术 免疫抑制作用 流式细胞仪检测 CD69 IL-2 CD25 细胞因子表达 活化标志 T淋巴细胞 分子药理学 淋巴结细胞 T细胞活化 TRD 无菌分离 不同浓度 刀豆蛋白 单克隆体 荧光标记
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VEGF诱导血管内皮细胞产生H_2O_2及其促增殖作用 被引量：17
8
作者 钱中清 曾耀英 +3 位作者 王通 林羿 季煜华 肇静娴 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期533-535,共3页
目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-2... 目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-20mmol/LH2O2对VEGF促增殖功能的影响。结果:①在VEGF刺激血管内皮细胞15min后,细胞内开始出现逐渐增强的荧光,且随时间逐渐增强,至45min左右最强,随后逐渐减弱;而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生,且荧光强度不随时间变化;②3×106U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用(P<0.01);③外源性加入5-10mmol/LH2O2时对血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.01),但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用(P<0.01)。结论:VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H2O2,在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H2O2对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。 展开更多
关键词 过氧化氢 血管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子 过氧化氢酶
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杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响 被引量：16
9
作者 俞瑜 曾耀英 +3 位作者 刘良 季煜华 邢飞跃 肇静娴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页
目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光... 目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。 展开更多
关键词 杨梅素 淋巴细胞活化 增殖 细胞因子
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Th1/Th2细胞在炎症浸润中的不同表现 被引量：11
10
作者 李振 蔡小嫦 《国外医学（免疫学分册）》 CAS 2002年第1期36-38,共3页
Th细胞向外周组织的浸润是局部炎症部位极化免疫的首要条件。Th细胞向外浸润过程中表达了不同的受体以适应不同的需要 ,Th1细胞优先表达P 和E 选择素配体、CXCR3、CCR5、粘合素α6 β1等分子 ;Th2细胞则优先表达CCR3、CCR4、CCR8等分子 ... Th细胞向外周组织的浸润是局部炎症部位极化免疫的首要条件。Th细胞向外浸润过程中表达了不同的受体以适应不同的需要 ,Th1细胞优先表达P 和E 选择素配体、CXCR3、CCR5、粘合素α6 β1等分子 ;Th2细胞则优先表达CCR3、CCR4、CCR8等分子 ,导致它们在炎症浸润过程中具有不同的外渗潜力 ,产生不同的局部炎症反应 ,而且它们之间也可通过负性调节来互相抑制对方。 展开更多
关键词 炎症 TH1/TH2细胞 粘附分子 趋化因子受体
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一种分离、培养扩增小鼠NK细胞方法的建立 被引量：16
11
作者 杨志刚 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 王通 江逊 唐德燊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期379-381,389,共4页
目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪... 目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度。以YAC -1为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%。效靶细胞25∶1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P<0.01)。MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个。结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25∶1时,NK细胞对YAC1细胞的杀伤率约为80%。 展开更多
关键词 NK细胞 分离 培养 扩增增殖 IL-2
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麒麟菜中蕨藻红素抗肿瘤活性研究 被引量：16
12
作者 杨宜婷 岑颖洲 +1 位作者 肇静娴 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期851-852,共2页
目的 :探讨把蕨红藻素 (caulerpin)发展成为抗肿瘤药物的可能性。方法 :检测caulerpin对细胞株HL6 0的细胞毒作用及诱导细胞凋亡作用。结果 :Caulerpin对HL6 0细胞有一定的细胞毒和细胞诱导凋亡作用。结论
关键词 麒麟菜 抗肿瘤活性 蕨藻红素 药物筛选试验 细胞凋亡
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环孢菌素A对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理学评价 被引量：8
13
作者 全世明 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 曾山 狄静芳 肇静娴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期225-227,共3页
目的　应用血清免疫药理学技术 ,探讨环孢菌素A(CsA)对T细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CsA免疫调节的分子机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　分离小鼠淋巴结细胞 ,分别与CsA、5 %CsA血清预孵后 ,加入多克隆刺激剂继续培养共 2 4h... 目的　应用血清免疫药理学技术 ,探讨环孢菌素A(CsA)对T细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CsA免疫调节的分子机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　分离小鼠淋巴结细胞 ,分别与CsA、5 %CsA血清预孵后 ,加入多克隆刺激剂继续培养共 2 4h。收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术分析T细胞上CD6 9分子的表达情况。结果　在CsA和 5 %CsA血清作用下 ,ConA活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (2 4 15± 3 38) %和 (2 3 6 8±6 89) % ,与相应对照组 [分别为 (6 4 6 7± 5 88) %和 (6 4 35± 10 13) % ]相比较均有显著差异 (P <0 0 1) ;在CsA和5 %CsA血清作用下 ,PDB活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (78 86± 7 70 ) %和 (80 0 5± 9 91) % ,与相应对照组 [分别为 (84 79± 6 87) %和 (79 6 8± 4 17) % ]相比较均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　CsA(410nmol/L)和含CsA血清均可强烈抑制ConA刺激的T细胞活化 ,而对PDB刺激的T细胞活化无抑制效应。 5 %CsA血清与CsA单纯药物体外实验的结果相一致 。 展开更多
关键词 环孢菌素A CD69 T淋巴细胞 血清免疫药理学
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小檗碱对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响 被引量：13
14
作者 杜丽蕊 何贤辉 +1 位作者 徐丽慧 曾耀英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期418-421,共4页
目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法... 目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法建立模型,Ber处理的DTH组每天腹腔注射(i.p)Ber,连续7d,总剂量为30mg/kg体质量。激发后48h,取小鼠双耳称重了解Ber对炎症抑制率的影响。镜下观察耳廓局部组织的变化;以结晶紫法检查Ber对脾脏T淋巴细胞与细胞外基质(ECM)黏附作用的影响;以膜联蛋白V(AnnexinV)染色检查淋巴结细胞的凋亡率。结果:双耳称重的结果显示,Ber处理的DTH组与DTH组具有显著的差异(P<0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,Ber能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润。Ber处理的DTH组的T细胞与ECM的黏附能力明显降低(P<0.05)。Ber处理的DTH组与DTH组和对照组的细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。结论:Ber对DNFB诱导的小鼠DTH具有明显的抑制作用,降低小鼠T细胞与ECM的黏附能力可能是其抑制DTH的机制之一。 展开更多
关键词 小檗碱 淋巴细胞 细胞黏附 迟发型超敏反应
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地塞米松影响小鼠胸腺细胞c-Myc表达以及凋亡研究 被引量：11
15
作者 王通 曾耀英 +3 位作者 李校堃 肇静娴 王青 付小兵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期550-555,共6页
目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通... 目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通过AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术测定 30min、3h、6h和 9h凋亡和坏死细胞比率 ,在 6h时点电镜观察细胞形态 ,利用SDS -PAGE及Westernblot检测 0min、30min、1h和 3h细胞内c -Myc和caspase - 3信号变化特点。结果 :在 1μmol/LDEX诱导下 ,小鼠胸腺细胞在 30min、3h、6h和 9h凋亡比率分别为(5 70± 0 4 6 ) %、(35 79± 1 13) %、(5 0 6 1± 2 15 ) %和 (35 5 2± 1 6 6 ) % ,对照组分别为 (5 97± 0 2 5 ) %、(10 2 0±0 71) %、(12 10± 0 6 6 ) %和 (15 4 5± 0 5 1) % ,组间差异显著 (P <0 0 1)。相应DEX组坏死比率分别为 (4 5 8±0 5 1) %、(4 6 6± 0 6 7) %、(2 5 36± 1 6 4 ) %和 (46 99± 2 6 7) % ,对照组分别为 (4 38± 0 39) %、(4 19± 0 73) %、(9 6 3± 1 2 5 ) %和 (13 38± 0 72 ) % ,组间差异显著 (P <0 0 1) ;电镜观察结果显示DEX处理 6h见较多典型凋亡细胞。对照组在 0min即可检测到c -Myc的明显表达 ,30min略见增多 ,1h? 展开更多
关键词 地塞米松 胸腺细胞 细胞凋亡 C-MYC表达 半胱氨酸灭冬氨酸蛋白酶3
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小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立 被引量：10
16
作者 杨志刚 曾耀英 +2 位作者 王青 王通 曾蕙兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1947-1949,共3页
目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴... 目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果 :单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD ,2 0 %的小鼠长期存活 (超过 12 0d) ,无急性GVHD表现 ;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异 ,其中骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合组小鼠全部在移植后 5 - 14d出现典型的弓背体位 ,存活期 6 - 2 4d ,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论 :以供鼠骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合进行的异基因骨髓移植 ,10 0 %引出致死性的急性GVHD。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓移植 移植物抗宿主病 动物模型
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中药喘可治对小鼠胸腺细胞抗凋亡作用研究 被引量：14
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作者 王通 曾耀英 俞渝 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期490-491,共2页
目的:研究中药喘可治(CKZ)对小鼠胸腺细胞的抗凋亡作用。方法:以地塞米松(DEX )诱导小鼠胸腺细胞凋亡建模,以CKZ保护小鼠胸腺细胞;6h时点以AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测早期凋亡和坏死细胞、以PI染色流式细胞术检测晚期凋亡。结... 目的:研究中药喘可治(CKZ)对小鼠胸腺细胞的抗凋亡作用。方法:以地塞米松(DEX )诱导小鼠胸腺细胞凋亡建模,以CKZ保护小鼠胸腺细胞;6h时点以AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测早期凋亡和坏死细胞、以PI染色流式细胞术检测晚期凋亡。结果:CKZ +DEX组早期凋亡比率(3 5 2 9±2 73 ) %显著低于DEX组(4 5 97±1 3 9) %(P <0 0 1) ;该两组坏死细胞比率差异不显著。DEX +CKZ组晚期凋亡百分率为(17 2 6±4 5 8) % ,显著低于CKZ组(3 3 88±5 61) % (P <0 0 1)。上述各组数据与对照组差异显著(P <0 0 1)。 展开更多
关键词 喘可治 地塞米松 抗凋亡 流式细胞术 动物实验
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氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖 被引量：13
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作者 伍斌 蔡小嫦 +4 位作者 曾耀英 施军 王通 肇静娴 黄秀艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期931-935,共5页
目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用... 目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法①建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明,在500、125和31mg/L组,OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。结论OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂。 展开更多
关键词 二硝基氟苯 皮炎 变应性接触性 苦参 淋巴细胞
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视网膜Müller细胞原代培养的技术研究 被引量：10
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作者 彭广华 李志杰 李辰 《眼科研究》 CSCD 1998年第1期13-15,共3页
目的介绍一种新的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞条件化原代培养的方法。方法使用ＣｏｎＡ活化脾细胞培养上清液作为条件化培养基，分别培养人、大鼠、小鼠的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞，并进行形态学观察及免疫组织化学染色。结果用该方法原... 目的介绍一种新的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞条件化原代培养的方法。方法使用ＣｏｎＡ活化脾细胞培养上清液作为条件化培养基，分别培养人、大鼠、小鼠的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞，并进行形态学观察及免疫组织化学染色。结果用该方法原代培养不同种类的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞，免疫组织化学染色显示９０％以上的视网膜Ｍüｌｅｒ细胞的神经胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）和Ｓ－１００蛋白染色阳性。结论视网膜Ｍüｌｅｒ细胞的条件化原代培养是一种可靠的、快速获得不同种类视网膜Ｍüｌｅｒ细胞的理想方法。 展开更多
关键词 视网膜 细胞培养 MUELLER细胞 原代培养
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小檗碱对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 被引量：7
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作者 杜丽蕊 何贤辉 +2 位作者 徐丽慧 曾耀英 王青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期687-692,共6页
目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分... 目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分析小檗碱对淋巴细胞增殖率的影响 ;以WST 1检测淋巴细胞的增殖情况 ;用碘化丙锭 (PI)染色分析细胞周期分布 ;细胞凋亡以Annexin V染色进行分析。结果 :CFSE染色分析显示 ,当浓度为 10 0、30和 10 μmol L时 ,Ber无论对ConA或PDB +Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖 ,都具有明显的抑制作用 (P <0 0 5 )。以WST 1分析细胞增殖情况 ,也获得相似的结果。对细胞周期分析表明 ,随着小檗碱浓度的增加 ,处于亚二倍体峰的细胞数增加 ,处于S和G2 M期的细胞数则减少 ,而G0 G1 期的细胞数基本不变。Annexin V染色法结果表明 ,30 μmol LBer组Annexin V单阳性区域的百分率为 ( 7 13± 1 0 8) % ,与PDB +Ion阴性组的百分率 ( 2 4 9± 0 2 5 ) %比较有显著的差异 (P <0 0 1)。结论 :小檗碱对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用 ,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期 ,这种抑制作用表现出明显的周期特异性。同时 ,Ber可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 小檗碱 淋巴细胞 细胞周期 细胞凋亡
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