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胃癌耐药细胞特异性结合小肽对多药耐药的影响 被引量：2
1
作者 王鹏 丁杰 +8 位作者 林涛 韩霜 曹珊珊 葛伏林 安广群 李荣 雷婷 白飞虎 樊代明 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期258-261,共4页
目的 研究环九肽（SY1）与胃癌耐药细胞（SGC7901／VCR）的结合特性及其对胃癌耐药性的逆转作用。方法 将细胞分为SGC7901和SGC7901／VCR2组培养。以无关噬菌体、阴性噬菌体为对照组，用免疫荧光技术检测含有SY1的阳性噬菌体与SGC7901／... 目的 研究环九肽（SY1）与胃癌耐药细胞（SGC7901／VCR）的结合特性及其对胃癌耐药性的逆转作用。方法 将细胞分为SGC7901和SGC7901／VCR2组培养。以无关噬菌体、阴性噬菌体为对照组，用免疫荧光技术检测含有SY1的阳性噬菌体与SGC7901／VCR的结合特性；通过体外药敏试验（MTT）分析含有SY1的阳性噬菌体和化学合成的SY1对SGC7901／VCR耐药性的改变；应用流式细胞仪检测在SY1作用下SGC7901／VCR细胞内阿霉素（ADM）的蓄积和储留。结果 （1）免疫荧光分析的结果显示，含有SY1的阳性噬菌体能够结合于SGC7901／VCR的膜表面，而不与亲本细胞SGC7901结合，无关噬菌体和阴性噬菌体均不与SGC7901／VCR结合，表明SY1可与SGC7901／VCR特异性结合。（2）MTT试验结果显示，在含有SY1的阳性噬菌体及化学合成的SY1的作用下，SGC7901／VCR的存活率显著降低（P〈0．05），其对长春新碱的耐药性降低。（3）在化学合成的SY1作用下，SGC7901／VCR细胞内ADM的储留蓄积高于对照组（P〈0．05）。结论 利用环七肽库差减筛选得到的环九肽SY1不仅能与SGC7901／VCR特异性结合，而且可部分逆转其对长春新碱的耐药性。这可能为胃癌多药耐药的逆转提供新思路。 展开更多
关键词 胃肿瘤 SGC7901/VCR细胞 逆转耐药 短肽
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分化抑制因子1在环氧合酶2介导的胃癌血管生成中的作用及机制研究 被引量：12
2
作者 雷婷 韩霜 +6 位作者 郭雪艳 丁锐 李颖 谢华红 白飞虎 吴开春 丁杰 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第22期1570-1575,共6页
目的验证分化抑制因子1(Id-1)在环氧合酶2(COX-2)介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达 COX-2和表达 COX-2特异性 siRNA 的胃癌 SGC7901细胞,通过Western 印迹和逆转录 PCR 方法检测两种亚细胞系中 Id1的表达,ELISA 方法... 目的验证分化抑制因子1(Id-1)在环氧合酶2(COX-2)介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达 COX-2和表达 COX-2特异性 siRNA 的胃癌 SGC7901细胞,通过Western 印迹和逆转录 PCR 方法检测两种亚细胞系中 Id1的表达,ELISA 方法分析两种细胞上清中血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异。通过四唑盐比色(MTY)实验分析两种细胞亚系的上清对体外脐静脉内皮细胞(HU-LT)增殖的影响,并在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后观察培养上清中 VEGF 的变化以及对脐静脉内皮细胞(HU-LT)增殖的影响。裸鼠成瘤实验观察转染细胞的成瘤性及肿瘤新生微血管密度(MVD)。结果成功建立高表达 COX-2以及表达特异性 COX-2小干扰 RNA(siRNA)的稳定克隆,并鉴定了不同克隆的转染效率。高表达 COX-2的胃癌 SGC7901细胞中 Id1的蛋白及mRNA 表达水平增高,而转染 COX-2-siRNA 的 SGC7901细胞中 Id1的表达则均低于对照组。COX-2高表达的 SGC7901/COX-2细胞上清中 VEGF 的蛋白含量高于对照组(2060±42 vs 1248±28,P=0.000),而 SGC7901/COX-2-siRNA 细胞上清中 VEGF 的蛋白含量低于对照组(1024±20,2033±27 vsP=0.000)。在 SGC7901/COX-2细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组快;在 SGC7901/COX-2-SiRNA 细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组缓。在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后,培养上清中 VEGF 的含量增加以及对 HU-LT 促进增殖的作用均被逆转。裸鼠成瘤试验显示抑制 Id1后SGC7901/COX-2细胞成瘤性降低[(353±12)mg vs(1020±91)mg,P=0.038],MVD 降低(8.8±1.6vs 20±1.7,P=0.001)。结论 COX-2可以上调 SGC7901细胞中 Id1的表达,并通过此途径影响内皮细胞的体外增殖能力。因此在胃癌发生发展中 Id1参与了 COX-2所介导的促血管生成过程,有可能成为胃癌抗血管治疗的新靶标。 展开更多
关键词 胃肿瘤 环氧化合物 血管生成
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与胃癌腹膜高转移细胞表面受体特异性结合的多肽片段的研究 被引量：4
3
作者 白飞虎 王钧 +5 位作者 赵澎涛 曹姗姗 雷婷 李颖 吴开春 樊代明 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期659-663,共5页
目的利用噬菌体随机肽库筛选与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽,为肿瘤细胞的靶向性治疗筛选药物和载体。方法利用噬菌体随机十二肽库对人胃癌细胞系GC9811和其腹膜高转移亚系GC9811P进行3轮差异筛选、富集,获得与胃癌腹膜高转移细... 目的利用噬菌体随机肽库筛选与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽,为肿瘤细胞的靶向性治疗筛选药物和载体。方法利用噬菌体随机十二肽库对人胃癌细胞系GC9811和其腹膜高转移亚系GC9811P进行3轮差异筛选、富集,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的噬菌体克隆。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其与GC9811P和GC9811细胞的亲和力,提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定,获得与胃癌腹膜高转移细胞亲和的多肽序列并予合成。利用荧光染色和流式细胞仪鉴定噬菌体克隆和合成肽与胃癌腹膜高转移细胞的体内外的结合特异性。结果筛选及ELISA结果显示得到与GC9811P细胞特异性结合并内化入癌细胞的噬菌体克隆,测序结果示45%的被检噬菌体展示相同的多肽序列SMSIASPYIALE,推测SMSI是胃癌腹膜高转移细胞特异性结合肽的基序。合成的多肽与细胞共孵育48h或多肽药物浓度达5μmol/L时,显示出明显的结合能力。平均荧光强度分别为17.19±0.42和16.89±0.31(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.33±0.53)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。合成的多肽与细胞共孵育72h或多肽药物浓度达10μmol/L时细胞的平均荧光强度为23.58±0.71和24.95±0.15(每组实验为3个样本均值),与对照组无关肽PC的平均荧光强度(4.16±0.24)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠体内试验说明合成的多肽可与GC9811P细胞成瘤的组织结合而不与GC9811及其他细胞成瘤的组织结合。结论筛选噬菌体随机肽库获得能与胃癌腹膜高转移细胞特异性结合的多肽序列SMSIASPYIALE;合成的多肽与胃癌腹膜高转移细胞有特异亲和力,为进一步临床胃癌早期腹膜转移诊断和治疗提供高度特异性和敏感性的理想标志物和靶向载体。 展开更多
关键词 胃肿瘤 噬菌体 肽库 肿瘤细胞 培养的
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PI3K/Akt途径在朊蛋白介导胃癌耐药中的作用研究 被引量：3
4
作者 葛伏林 吴本俨 +2 位作者 张燕齐 韩霜 丁杰 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第11期2051-2054,共4页
目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用。方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系。Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药... 目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用。方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系。Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药物的敏感性。流式细胞仪检测单独或联用LY294002时转染细胞内阿霉素蓄积和潴留。结果:将PrPc正义载体pcDNA-PrP转入SGC7901,成功建立PrPc高表达胃癌细胞亚系并命名为PS;空载体转染细胞命名为BS。Western-Blot显示磷酸化Akt在PS中的表达较BS及SGC7901增高,而三者的总Akt则无差别。未经LY294002处理时,在阿霉素或长春新碱的作用下,PS的存活率分别为91.4%±3.4%和89.4%±3.8%,较BS(79.2%±4.3%和75.9%±2.1%)明显增高(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量分别为4.4±0.3和4.2±0.4,明显低于BS(8.2±0.5和8.0±0.3)(均);当联合LY294002处理后,PS在两种药物作用下的存活率均随着LY294002浓度的增加逐渐降低,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量逐渐增高,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均)。结论:PrPc介导的胃癌耐药与PI3K/Akt途径活性密切相关,抑制PI3K/Akt途径活性可逆转PrPc介导的胃癌耐药。 展开更多
关键词 朊蛋白 PI3K/AKT 耐药 胃癌
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重组小鼠MIG趋化因子的高效真核表达及免疫活性测定 被引量：1
5
作者 张德新 王钧 +2 位作者 杨静华 Reuven Rabinovici 樊代明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期325-329,共5页
目的克隆小鼠CXC趋化因子干扰素-γ诱生单核因子(MIG)并在杆状病毒表达系统中进行高效表达,进而对MIG蛋白进行纯化和活性鉴定。方法从小鼠脑组织中用RT-PCR的方法扩增出小鼠MIG基因的全长cDNA,在克隆入Bac-to-Bac杆状病毒表达载体后在Hi... 目的克隆小鼠CXC趋化因子干扰素-γ诱生单核因子(MIG)并在杆状病毒表达系统中进行高效表达,进而对MIG蛋白进行纯化和活性鉴定。方法从小鼠脑组织中用RT-PCR的方法扩增出小鼠MIG基因的全长cDNA,在克隆入Bac-to-Bac杆状病毒表达载体后在High-Five昆虫细胞中进行分泌型表达;表达产物经S-Sepharose进行了纯化并进行了生化鉴定;最后对纯化的重组小鼠MIG蛋白进行了钙离子内流诱发试验和淋巴细胞趋化测定以鉴定其免疫活性。结果成功克隆了小鼠MIG基因并在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中进行了高效表达,其表达蛋白主体相对分子质量约为15 000;经过单步S-Sepha-rose纯化法就可获得纯度为85%以上的重组小鼠MIG蛋白,产量为10 mg/L;该蛋白该纯化蛋白在体外具有诱导小鼠T淋巴细胞钙离子内流和吸引、趋化小鼠脾细胞的活性。结论小鼠MIG蛋白可在杆状病毒表达系统中高产量分泌表达并可用S-Sepharose纯化法直接纯化;小鼠重组MIG蛋白具有激活、趋化淋巴细胞的生物活性;rmMIG纯化蛋白的大量制备为进一步研究小鼠MIG蛋白在炎症、免疫器官的成熟和其它疾病中的功能和作用提供了有利的工具。 展开更多
关键词 MIG CXC趋化因子 杆状病毒 重组蛋白 趋化
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人胃癌腹膜高转移潜能细胞系的基因表达分析 被引量：1
6
作者 白飞虎 杨力 +4 位作者 王钧 惠亮亮 苗雨 吴开春 樊代明 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2010年第5期321-325,344,共6页
目的:比较人胃癌细胞系与其腹膜高转移潜能细胞系的基因表达谱,寻找与胃癌腹膜转移相关的基因表达改变。方法:采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系GC9811和GC9811-P,分析其基因表达谱的差异。选取部分基因... 目的:比较人胃癌细胞系与其腹膜高转移潜能细胞系的基因表达谱,寻找与胃癌腹膜转移相关的基因表达改变。方法:采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系GC9811和GC9811-P,分析其基因表达谱的差异。选取部分基因行RT-PCR进一步验证基因芯片的准确性。结果:在11901个候选基因中,筛选出248个(2.1%)差异表达基因。GC9811-P与GC9811相比,表达上调的基因有218个,下调的有30个,包括DNA合成和错配修复基因如H3F3A、细胞增生基因、蛋白合成与修饰基因、信号传导基因和离子通道与运输蛋白相关基因等。半定量RT-PCR对PTEN、S100A4和ZNRD1基因检测结果验证了基因芯片数据的可靠性。结论:胃癌腹膜转移是多基因作用的综合结果,筛选的基因对预测胃癌腹膜转移和抗转移干预措施可能有指导意义。 展开更多
关键词 细胞系 胃肿瘤 腹膜转移 差异表达基因 基因芯片
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多肽PⅢ术中与术后腹腔注射抑制胃癌腹膜转移的研究 被引量：1
7
作者 白飞虎 杨力 +7 位作者 吉清 张燕齐 刘震雄 王治忠 阎丽 王敬博 靳海峰 李婷婷 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第46期3260-3263,共4页
目的评价多肽PⅢ术中及术后早期腹腔内应用对胃癌腹膜转移的作用。方法48只裸鼠经完整组织块裸鼠胃壁原位种植,建立类似于临床的胃癌腹膜转移模型。每组16只,随机分为①对照组;②术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组(关腹前立即用60ml、43... 目的评价多肽PⅢ术中及术后早期腹腔内应用对胃癌腹膜转移的作用。方法48只裸鼠经完整组织块裸鼠胃壁原位种植,建立类似于临床的胃癌腹膜转移模型。每组16只,随机分为①对照组;②术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组(关腹前立即用60ml、43℃生理盐水溶解多肽PⅢ200μg冲洗腹腔2次);③术后多肽治疗组。术后1周开始治疗,对照组每只裸鼠与第8、10、12、14、16、18、20、22天腹腔各0·2ml生理盐水腹腔注射;②组和③组与对照组相同的时间分别给予多肽PⅢ2mg/kg腹腔注射,移植后第23天各取6只裸鼠脱颈处死,测定原位肿瘤重量,观察腹膜转移情况。其余裸鼠用于生存率试验。结果对照组、术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组和术后多肽治疗组的裸鼠原位肿瘤重量分别为(1·93±0·22)g、(1·81±0·36)g、(1·95±0·45)g,各组间比较,差异无统计学意义;对照组、术后多肽治疗组和术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组的裸鼠腹膜转移的瘤结节数分别为(126·3±9·6)个、(64·2±8·3)个、(9·2±1·3)个;其中大于2mm的裸鼠平均腹膜转移结节数分别为(51·2±3·6)个、(21·7±4·9)个、(1·6±0·2)个,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0·01)。裸鼠生存试验显示术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组裸鼠生存时间明显长于对照组及术后多肽治疗组的裸鼠生存时间。结论多肽PⅢ术中及术后腹腔内用药可明显降低裸鼠胃癌腹膜转移的发生,显著延长了裸鼠的生存期,有望成为临床上治疗胃癌腹膜转移的药物。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤移植 肽类 小鼠 裸 腹膜转移
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MDR1启动子/荧光素酶质粒的构建及其在朊蛋白高表达胃癌细胞中的活性检测 被引量：1
8
作者 葛伏林 王婧 +4 位作者 周毅 梁洁 张燕齐 郭雪艳 丁杰 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第5期601-603,共3页
目的：构建含MDR1基因启动子的荧光素酶报告基因质粒,并检测其在朊蛋白高表达胃癌细胞系中的活性表达。方法：PCR克隆人MDR1基因启动子片段,通过亚克隆将启动子分别插入到pMD18-T载体和荧光素酶报告基因pGL3-Enhancer载体中,建立含MDR1... 目的：构建含MDR1基因启动子的荧光素酶报告基因质粒,并检测其在朊蛋白高表达胃癌细胞系中的活性表达。方法：PCR克隆人MDR1基因启动子片段,通过亚克隆将启动子分别插入到pMD18-T载体和荧光素酶报告基因pGL3-Enhancer载体中,建立含MDR1启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL-MDR1,并经测序及酶切确定扩增序列;脂质体基因转染法将pGL-MDR1转染入朊蛋白高表达胃癌细胞系SGC7901-PrP,并测定其荧光素酶活性。结果：PCR克隆出MDR1启动子经DNA测序证实序列正确,pGL-MDR1转染入朊蛋白高表达胃癌细胞系的荧光素酶活性,较转染入pcDNA3.1空载体细胞系相比升高3-5倍。结论：成功构建含MDR1启动子的荧光素酶报告基因质粒;上调朊蛋白表达可激活MDR1的转录活性。 展开更多
关键词 多药耐药基因1 启动子 朊蛋白 胃肿瘤 荧光素酶报告基因
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哺乳动物细胞小干扰RNA库的建立和应用
9
作者 赵丽娜 刘志国 +4 位作者 李婷婷 潘阳林 靳海峰 宁寒冰 樊代明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期278-281,共4页
双链小干扰RNA(siRNA)在多种类型细胞中介导特异性的基因沉默,这一现象的发现为深入研究单个基因的功能提供了重要的方法学基础,从而得到了广泛的应用.最近的文献报道了全基因组siRNA库的建立,为高通量基因功能分析和研究提供了新的方法... 双链小干扰RNA(siRNA)在多种类型细胞中介导特异性的基因沉默,这一现象的发现为深入研究单个基因的功能提供了重要的方法学基础,从而得到了广泛的应用.最近的文献报道了全基因组siRNA库的建立,为高通量基因功能分析和研究提供了新的方法,成为新的研究热点.小干扰RNA库可以用来筛选和研究介导细胞复杂表型和生物学过程的关键基因,通过建立一系列具有目的表型的细胞系,有可能对特定细胞信号调节通路进行更为全面的解析.本文综述了目前在siRNA建库方法方面的进展,并探讨了建立小干扰RNA库中的关键问题. 展开更多
关键词 小干扰RNA 基因沉默 小干扰RNA库 哺乳动物细胞
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