电转化条件对大肠杆菌XL1-Blue菌株转化效率的影响 被引量：17

1

作者 韦晓明 苏明权 +3 位作者 杨安钢 赵晶 温伟红 郝晓柯 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期566-568,共3页

探讨XL1-Blue菌株电转化的最优条件。通过改变电压、质粒DNA浓度、细菌生长周期等影响电转化的重要条件,做出转化率的变化曲线,从中探索电转化的最优条件。实验结果得出在电容25μF、电阻200 Ω、电压2.5 kV、D600nm为0.3～0.4、0.2 cm... 探讨XL1-Blue菌株电转化的最优条件。通过改变电压、质粒DNA浓度、细菌生长周期等影响电转化的重要条件,做出转化率的变化曲线,从中探索电转化的最优条件。实验结果得出在电容25μF、电阻200 Ω、电压2.5 kV、D600nm为0.3～0.4、0.2 cm电转化杯、DNA终浓度0.1μg/ml、感受态细胞终浓度2.5×1012、氨苄青霉素浓度50μg/ml的条件下,电转化效率最高,可达到7.64×108。电转化实验转化效率高,重复性好,为成功的建立抗体库提供了保证。 展开更多

关键词 电穿孔 转化 转化效率 电转化 大肠杆菌

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淋病奈瑟氏菌中国流行株gyrA和parC基因与喹诺酮类耐药性的相关性 被引量：3

2

作者 王胜春 刘玉峰 +1 位作者 苏明权 王强 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第24期2257-2261,共5页

目的　调查中国地区淋病奈瑟氏菌 (NG)对喹诺酮类的耐药性状况 ,探讨高水平耐药的基因突变株对喹诺酮类耐药机制的作用 .方法　对 9a来临床分离保存淋球菌流行株进行了体外环丙沙星 (CIP)药敏实验 .筛选出 76株高水平CIP耐药株 ,通过 PC... 目的　调查中国地区淋病奈瑟氏菌 (NG)对喹诺酮类的耐药性状况 ,探讨高水平耐药的基因突变株对喹诺酮类耐药机制的作用 .方法　对 9a来临床分离保存淋球菌流行株进行了体外环丙沙星 (CIP)药敏实验 .筛选出 76株高水平CIP耐药株 ,通过 PCR扩增了其中的 1 8株 NG的 gyr A和par C喹诺酮耐药决定区基因 ,并对扩增子直接测序 .通过N he I酶切、脉冲电场凝胶电泳 (PFEG)分析了这些菌株的遗传关系 .结果　环丙沙星的耐药检出率有逐年增高的趋势 ,MIC≥ 1 .0 mg· L- 1的菌株由 1 993年的 5 .1 %上升到 2 0 0 1年的 2 1 .4% .对照组中的 1 8株敏感菌只有两株发生了 gyr A的单一突变 ,未发现 par C变异 ;而耐药组中 89% (1 6 )菌株的gyr A发生了 Ser- 91向 Phe的单一突变株或 (和 ) par C的双突变 .88.9% (1 5 )的菌株的 gyr A发生了 Ser- 91向 Phe和 Asp-95向 Gly的突变 .在发生 par C突变中 72 %属于 Asp- 86向Asn突变 .PFEG分析发现 1 0株具有完全一致的 gyr A和par C突变模式 .同时也发现来自不同地区的菌株的 PFEG指纹图是不同的 .结论　研究表明 ,在中国 NG流行株对喹诺酮类耐药率呈增长趋势 ;NG流行株对喹诺酮产生耐药性与gyr A和 par 展开更多

关键词 奈瑟氏球菌 淋病 药物耐受性 GYRA PARC 喹诺酮

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转染bcl-2基因对心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响 被引量：2

3

作者 李俊峡 贾国良 +2 位作者 金明 马越云 苏明权 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第9期780-782,共3页

目的 :研究转染抗凋亡基因bcl 2对心肌细胞凋亡的影响 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血 /再灌注模型 ;提取含有人bcl 2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR SB质粒 ,用脂质体介导的基因转染法将pDOR SB质粒转染... 目的 :研究转染抗凋亡基因bcl 2对心肌细胞凋亡的影响 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血 /再灌注模型 ;提取含有人bcl 2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR SB质粒 ,用脂质体介导的基因转染法将pDOR SB质粒转染心肌细胞 .实验分 3组 :正常对照组、模拟缺血 /再灌注组和基因转染组 ;计算台盼蓝摄取率 ,测定肌酸磷酸肌酶活性 ,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况 .结果 :在正常对照组未发现细胞凋亡 ,而在缺血再灌注组细胞凋亡明显增多 ,台盼蓝摄取率和肌酸磷酸肌酶活性明显增加 (P <0 .0 1 ) ,转染bcl 2基因组心肌细胞凋亡明显减少 .结论 :细胞凋亡参与了心肌缺血 /再灌注损伤 ,转染bcl 2基因可减少缺血 展开更多

关键词 基因 BCL-2 心肌细胞 缺氧 复氧 逆转录病毒载体 细胞凋亡

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HBV与HCV的融合与联合基因免疫效果的研究 被引量：2

4

作者 尹文 徐志凯 +3 位作者 薛小平 马越云 付莉 吕欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期473-474,共2页

目的对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合注射的免疫效果。方法大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150μg,按0、2和4wk,共免疫3次。免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测... 目的对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合注射的免疫效果。方法大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150μg,按0、2和4wk,共免疫3次。免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测免疫小鼠脾细胞CTL的杀伤功能。结果无论从抗HBs和抗HCV抗体出现的时间、阳转率和应答强度,还是CTL水平,CSpcDNA3.1融合重组质粒都优于CpcD-NA3.1+SpcDNA3.1联合基因的免疫。结论融合DNA疫苗,有望成为慢性病毒性肝炎预防和治疗的制剂。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 融合DNA疫苗

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羧肽酶A1全酶及其活性中心基因的克隆及原核表达 被引量：1

5

作者 岳乔红 苏明权 +3 位作者 郝晓柯 程晓东 杨柳 于文彬 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期554-556,共3页

通过RT-PCR方法扩增出CPA1全酶及活性中心基因,分别克隆入载体pGEM-T easy,测序分析。将两段目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列插入正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组蛋白。结果表明,成功克隆了人CPA1全酶及其... 通过RT-PCR方法扩增出CPA1全酶及活性中心基因,分别克隆入载体pGEM-T easy,测序分析。将两段目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列插入正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组蛋白。结果表明,成功克隆了人CPA1全酶及其活性中心基因并得到了原核表达产物,为进一步分析比较CPA1全酶及其活性中心的特性、了解CPA1结构与功能的关系并最终得到CPA1最小活性结构域奠定基础。 展开更多

关键词 羧肽酶A1 活性中心 基因克隆 原核表达

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结核分枝杆菌Rv1009的生物信息学分析及克隆、表达 被引量：10

6

作者 苏明权 李立文 +1 位作者 张彩莲 郝晓柯 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期557-559,共3页

以往在对藤黄微球菌的研究中发现了促进复活因子(RPF),该因子可以有效促进休眠期的多种革兰氏阳性细菌复活和生长。生物信息学分析表明在多种革兰氏阳性细菌的基因组中均存在编码RPF样蛋白的基因。从GeneBank中获得了结核分枝杆菌、麻... 以往在对藤黄微球菌的研究中发现了促进复活因子(RPF),该因子可以有效促进休眠期的多种革兰氏阳性细菌复活和生长。生物信息学分析表明在多种革兰氏阳性细菌的基因组中均存在编码RPF样蛋白的基因。从GeneBank中获得了结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、谷氨酸棒杆菌和微链霉菌等革兰氏阳性细菌的多种RPF样蛋白相关信息,通过同源性分析发现这些蛋白均含有一个由75个氨基酸残基构成的高度保守序列,即RPF作用域。进一步对结核分枝杆菌H37Rv株的Rv1009进行了分析,并用PCR法克隆了其编码基因全长,定向克隆至pGEX 4T-2,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了Rv1009-GST融合蛋白的高效表达,为深入探讨其生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 促进复活因子 克隆 表达

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Survivin反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡并增加吉西他滨的化疗敏感性 被引量：7

7

作者 刘江伟 李开宗 +3 位作者 窦科峰 苏明权 于文彬 张福琴 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期401-403,共3页

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸转染对胰腺癌BxPC 3细胞系SurvivinmRNA的表达及细胞增殖、凋亡和对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用脂质体瞬时转染法介导Survivin反义硫代磷酸寡核苷酸处理胰腺癌BxPC 3细胞后用RT PCR检测S... 目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸转染对胰腺癌BxPC 3细胞系SurvivinmRNA的表达及细胞增殖、凋亡和对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法用脂质体瞬时转染法介导Survivin反义硫代磷酸寡核苷酸处理胰腺癌BxPC 3细胞后用RT PCR检测SurvivinmRNA的表达 ,四唑氮蓝法检测细胞的相对存活率 ,用流式细胞仪和透射电镜检测其对BxPC 3细胞的凋亡诱导作用。结果Survivin反义寡核苷酸作用于BxPC 3细胞后 ,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性 ,其中 2 4h的IC50 值为 4 0 0nmol/L ,在此浓度和时间下 ,Survivin反义寡核苷酸可明显降低SurvivinmR NA的表达 ,细胞凋亡率为 (2 5± 3) %。在透射电镜下BxPC 3细胞可呈凋亡的早期改变。Survivin反义寡核苷酸和吉西他滨的联合实验组与单独应用吉西他滨组相比 ,在 4 8h和 72h可使细胞的存活率分别降低 2 76和 4 5 8倍。结论Survivin反义寡核苷酸可诱导胰腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖并增强吉西他滨的化疗敏感性。 展开更多

关键词 Survivin 反义寡核苷酸 胰腺癌 细胞凋亡 吉西他滨 化疗敏感性 癌细胞 细胞增殖

原文传递

结核分枝杆菌临床分离株耐药特点分析 被引量：9

8

作者 张建芳 段艳 苏明权 《西北国防医学杂志》 CAS 2004年第3期195-196,共2页

目的 :分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法 :用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核菌的耐药情况。结果 :结核菌总耐药率 83.2 % ,耐多药率为 6 6 .4 %。其中初始耐药率 6 8.4 % ,初始耐多药率 36 .8% ,复治耐药率92 .... 目的 :分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法 :用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核菌的耐药情况。结果 :结核菌总耐药率 83.2 % ,耐多药率为 6 6 .4 %。其中初始耐药率 6 8.4 % ,初始耐多药率 36 .8% ,复治耐药率92 .4 % ,复治耐多药率 84 .7%。结论 :耐药及耐多药结核菌感染是临床治疗结核病的一个严重问题。临床分离结核杆菌耐药率和耐多药率高。分析临床分离株耐药特点 ,对控制结核病传染及指导临床合理用药具有重要意义。 展开更多

关键词 结核病 耐药性 耐多药结核杆菌

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IgG Fab-BPI融合蛋白真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量：7

9

作者 马越云 马文煜 +3 位作者 于文彬 尹文 苏明权 丁振若 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期470-472,共3页

目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段... 目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段长16个氨基酸的linker连接于上述Fab表达载体中Fd基因的下游,构建成Fab-BPI融合蛋白FB真核表达载体。将pcDNA3-LC质粒中包括hCMV启动子、LC和BGHpolyA等序列在内的片段,插入到pcDNA3-Fd中hCMV启动子上游,从而构建成单质粒的Fab-BPI表达载体pcD-NA3-FB,转染真核细胞。结果序列测定表明,重组质粒构建正确。pcDNA3-FB转染CHO细胞后,经ELISA、免疫荧光和mR-NA鉴定表达成功,免疫印迹试验显示,与抗κ轻链和抗BPI抗体反应的蛋白区带的Mr均为60000左右。交叉反应试验证明,Fab和FB与多种革兰氏阴性菌的LPS有交叉反应性。结论成功地在CHO细胞中表达出了抗LPSFab-BPIFB融合蛋白。FB作为融合蛋白,集广泛交叉反应性和强大中和活性于一身,有可能成为更适于临床应用的新的抗LPS免疫制剂。 展开更多

关键词 LPS FAB 杀菌通透性增强蛋白 真核表达 IGG

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人高迁移率族蛋白1基因的克隆和表达 被引量：5

10

作者 别良峰 于文彬 +2 位作者 程晓东 苏明权 刘家云 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第3期232-234,共3页

目的 :克隆人高迁移率族蛋白 1(HMG 1)编码基因 ,构建重组表达载体并对其诱导表达 .方法 :通过RT PCR方法扩增出人外周血单个核细胞中HMG 1的编码基因 ,克隆于载体pGEM Teasy,测序分析后亚克隆于表达载体 pGEX 4T 2 ,测序证实序列正确... 目的 :克隆人高迁移率族蛋白 1(HMG 1)编码基因 ,构建重组表达载体并对其诱导表达 .方法 :通过RT PCR方法扩增出人外周血单个核细胞中HMG 1的编码基因 ,克隆于载体pGEM Teasy,测序分析后亚克隆于表达载体 pGEX 4T 2 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导 4h后可表达Mr 约 5 6 0 0 0的融合蛋白GST HMG1.结果 :克隆了人HMG 1的编码基因 ,构建了融合蛋白的重组表达质粒 pGEX HMG1,表达的融合蛋白产物经凝胶薄层扫描检测 ,占全菌总蛋白的 0 .2 3.结论 :获得了人HMG 1编码基因及其原核表达产物 ,对研究人HMG 展开更多

关键词 人高迁移率族蛋白1 基因克隆 基因表达 编码基因 RT-PCR法

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大鼠心肌成纤维细胞组织金属蛋白酶抑制剂mRNA水平检测(英文) 被引量：8

11

作者 杨学东 赵连友 +3 位作者 王士雯 李立文 田建伟 苏明权 《中国临床康复》 CSCD 2003年第15期2154-2155,共2页

目的通过建立多重反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,旨在测定大鼠心肌成纤维细胞组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的mRNA水平。方法采用胶原酶-胰蛋白酶消化法培养成年雌性SD大鼠的心肌成纤维细胞,提取... 目的通过建立多重反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,旨在测定大鼠心肌成纤维细胞组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的mRNA水平。方法采用胶原酶-胰蛋白酶消化法培养成年雌性SD大鼠的心肌成纤维细胞,提取细胞总RNA并进行反转录反应。自行设计大鼠TIMP-1,TIMP-2和内参照GAPDH的PCR引物序列,进行多重PCR反应,PCR产物经20g/L琼脂糖凝胶电泳分析目的基因片段。结果20g/L琼脂糖凝胶电泳在同一条泳道显示TIMP-1,TIMP-2和GAPDH3条目的DNA条带,表明成功地同时扩增了TIMP-1,TIMP-2和GAPDH基因。结论采用多重RT-PCR方法,测定了大鼠心肌成纤维细胞TIMP-1,TIMP-2mRNA水平,此方法为研究高血压病心肌纤维化提供了可靠手段。 展开更多

关键词 大鼠 心肌成纤维细胞 mRNA 反转录聚合酶链反应 组织金属蛋白酶抑制剂-1 组织金属蛋白酶抑制剂-2 高血压 心肌纤维化

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survivin短发夹状RNA真核表达载体的构建及其对宫颈癌细胞survivin表达的影响 被引量：6

12

作者 宋晖 辛晓燕 +3 位作者 肖锋 王德堂 岳乔红 郭会玲 《医学研究生学报》 CAS 2008年第8期795-799,I0001,共6页

目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin表达的抑制作用。方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1... 目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin表达的抑制作用。方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1-U6 neo,酶切、鉴定测序后,经脂质体转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达,Western blot检测survivin蛋白表达。结果:成功构建了survivin shRNA真核表达载体pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2,G418筛选24 d后出现阳性克隆,转染pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2的HeLa细胞中,survivin表达呈现不同程度下调,pSilencer2.1-s2的干涉效果较好。结论:成功构建并筛选出干涉效果较好的survivin shRNA真核表达载体,为进一步研究其对宫颈癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。 展开更多

关键词 SURVIVIN 短发夹状RNA 真核表达载体 宫颈肿瘤

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树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用 被引量：4

13

作者 张建芳 于文彬 +4 位作者 徐修礼 苏明权 马越云 刘家云 丁振若 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第19期1777-1780,共4页

目的　建立体外培养扩增树突状细胞 (DC)的方法 ,并观察其诱导的抗肿瘤免疫作用 .方法　分离外周血单个核细胞 ,应用 GM- CSF 及 IL- 4诱导 DC产生 ,用 TNF- α和PGE2 促进其成熟 ,并用肺癌细胞系 GL C- 82可溶性抗原致敏 .将成熟 DC与... 目的　建立体外培养扩增树突状细胞 (DC)的方法 ,并观察其诱导的抗肿瘤免疫作用 .方法　分离外周血单个核细胞 ,应用 GM- CSF 及 IL- 4诱导 DC产生 ,用 TNF- α和PGE2 促进其成熟 ,并用肺癌细胞系 GL C- 82可溶性抗原致敏 .将成熟 DC与自体 L AK细胞混合培养 (DC- L AK) ,用MTT法检测 DC- L AK细胞及 L AK细胞对多种肿瘤细胞系的杀伤作用 .结果　经 GM- CSF,IL - 4,TNF-α,PGE2 作用后 ,细胞表达 CD1 a阳性率为 71.0 % ,CD83 5 0 .0 % ,CD1 4 阳性率低于 10 .0 % ,高表达 HL A- ,HL A- 和 CD45,为典型的 DC表型特征 .DC- L AK和 L AK细胞对 4种肿瘤细胞 (GL C- 82 ,A5 49,m oser和 MCF- 7)的杀伤率 ,前者为 84.7% ,6 6 .9% ,49.3%和 5 6 .0 % ,后者为 43.5 % ,31.3% ,45 .0 %和 32 .4% .结论　成功的诱导出具有典型形态特征及增强 L AK细胞杀伤活性的 DC. 展开更多

关键词 树突状细胞 LAK细胞 免疫治疗 肿瘤

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免疫荧光法与p53单链构象多态性分析检测胸水肿瘤细胞的结果分析 被引量：3

14

作者 苏明权 丁振若 +6 位作者 于文彬 戚好文 马越云 孙怡群 张建芳 彭道荣 王宗义 《第四军医大学学报》 2000年第8期1005-1007,共3页

目的探讨免疫荧光法与 p5 3单链构象多态性分析检测胸水肿瘤细胞 ,在良、恶性胸水鉴别诊断中的价值 .方法　采用免疫荧光法、血卟啉荧光法、吖啶橙荧光法检测胸水肿瘤细胞 ;p5 3单链构象多态性分析技术检测 p5 3基因突变 .结果　应用免... 目的探讨免疫荧光法与 p5 3单链构象多态性分析检测胸水肿瘤细胞 ,在良、恶性胸水鉴别诊断中的价值 .方法　采用免疫荧光法、血卟啉荧光法、吖啶橙荧光法检测胸水肿瘤细胞 ;p5 3单链构象多态性分析技术检测 p5 3基因突变 .结果　应用免疫荧光法、血卟啉荧光法、吖啶橙荧光法 ,通过对 81例恶性胸水患者胸水肿瘤细胞的检测 ,其阳性检出率分别为 :88.9% ,91.4%和 86 .2 % ;对 183例良性胸水患者胸水肿瘤细胞的检测 ,其阳性检出率分别为 :0 .2 2 % ,0 .39%和 0 .79% .结论　吖啶橙荧光法针对的是肿瘤细胞中的核酸物质 ,在荧光显微镜下极易识别 ,色彩鲜艳并具有恶性肿瘤细胞形态的特征 .血卟啉荧光方法 ,比较稳定 ,形态完整 ,红细胞及白细胞不显示荧光 ,荧光清晰 ,易于鉴别 .免疫荧光法 ,针对的是细胞膜抗原 ,当抗原抗体结合后 ,在细胞膜上形成一种荧光环 ,加上肿瘤细胞的特殊形态 ,即可与正常细胞区别 ,从而对胸水中的肿瘤细胞作出精确的诊断 .用 p5 3单链构象多态性分析 ,检测胸水细胞 p5 3基因突变已成为可能 ,对良、恶性胸水的鉴别诊断具有重要的意义 ,并具有较好的应用前景 . 展开更多

关键词 恶性胸水 胸水肿瘤细胞 检测 免疫荧光法

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长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究 被引量：1

15

作者 王臻 杨旻 +2 位作者 李立文 苏明权 于文彬 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期427-430,共4页

目的通过构建能产生长双链RNA的质粒载体,探讨长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的可行性。方法以无毒性、完全外源性基因绿色荧光蛋白EGFP基因为RNA模板,使用2个启动子同时从正反向引导DNA序列产生正义和反义链RNA,构建产生长双链... 目的通过构建能产生长双链RNA的质粒载体,探讨长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的可行性。方法以无毒性、完全外源性基因绿色荧光蛋白EGFP基因为RNA模板,使用2个启动子同时从正反向引导DNA序列产生正义和反义链RNA,构建产生长双链RNA的质粒载体。转染人骨肉瘤细胞系MG63,48h后对细胞进行凋亡荧光染色、流式细胞仪及MTT法测定,对数据进行统计学处理。结果成功获得能产生长双链RNA的质粒载体pCI-neo-dsEGFP,MTT法测定显示随着pCI-neo-dsEGFP质粒剂量的增加(0.05μg,0.10μg,0.15μg,0.20μg,0.25μg,0.30μg),细胞的吸光度逐渐减小。转入pCI-neo-dsEGFP组的MG63细胞经凋亡荧光染色呈现大量绿色不规则荧光,出现凋亡现象,而对照组没有出现。流式细胞仪检测结果显示阴性对照组MG63细胞凋亡率为0.028±0.006;pCI-neo-dsEGFP质粒剂量1.0μg时MG63凋亡率为0.175±0.021;2.0μg时凋亡率为0.348±0.032;3.0μg时凋亡率为0.381±0.027;阳性对照组MG63细胞凋亡率为0.386±0.029。随着dsRNA剂量的增加,骨肉瘤细胞生长的抑制效应逐渐增加。当pCI-neo-dsEGFP质粒剂量为3.0μg时,对MG63细胞产生的凋亡效应与100 μl的5-FU(50μg/ml)产生的凋亡效应差异无显著性。结论长双链RNA能非特异性诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡, 展开更多

关键词 骨肉瘤 程序细胞死亡 基因表达调控 质粒载体

原文传递

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变 被引量：2

16

作者 岳乔红 杨柳 +2 位作者 苏明权 马越云 郝晓柯 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第6期112-114,共3页

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率,CD4+与CD8+细胞百分率,CD4+/CD8+比值及CD19+和CD19+CD23+的表达水平,以探讨婴幼儿急性上呼吸... 目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率,CD4+与CD8+细胞百分率,CD4+/CD8+比值及CD19+和CD19+CD23+的表达水平,以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1,Th2的细胞百分率(13.15±6.23及4.57±3.10)均显著高于对照组(7.14±5.09及2.03±0.95),患儿组CD4+细胞百分率亦较对照组为高(P<0.05);CD8+,CD4+/CD8+比值均与正常对照组之间无统计学差异(P>0.05),CD19+与CD19+CD23+的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群,表现为Th1和Th2细胞百分率均增加,Th1和Th2细胞免疫反应增强,而B淋巴细胞状况无明显改变。 展开更多

关键词 上呼吸道感染 婴幼儿 淋巴细胞亚群 流式细胞仪

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肺癌胸水细胞端粒酶活性的表达 被引量：1

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作者 曾佑平 杨秀芝 苏明权 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2002年第10期921-922,927,共3页

采用 PCR- TRAP方法检测肺癌胸水细胞标本中的端粒酶活性 ,并与细胞学诊断进行比较 ,结果 :36例肺癌胸水标本中 ,2 4例细胞学阳性胸水有 2 3例端粒酶表达阳性 ,3例细胞学可疑胸水有 2例端粒酶阳性 ,6例细胞学阴性胸水中有 2例端粒酶阳... 采用 PCR- TRAP方法检测肺癌胸水细胞标本中的端粒酶活性 ,并与细胞学诊断进行比较 ,结果 :36例肺癌胸水标本中 ,2 4例细胞学阳性胸水有 2 3例端粒酶表达阳性 ,3例细胞学可疑胸水有 2例端粒酶阳性 ,6例细胞学阴性胸水中有 2例端粒酶阳性。细胞学诊断和端粒酶检测阳性率分别为 66.7% ( 2 4 /36)和 75 .0 % ( 2 7/36)。提示 :端粒酶活性检测可能在肺癌胸水诊断和鉴别诊断方面有重要价值。 展开更多

关键词 胸水细胞 端粒酶活性 肺肿瘤 病理学

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铜绿假单胞菌中Ambler A和D类酶流行状况与药物敏感性研究 被引量：1

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作者 张建芳 樊新 +7 位作者 苏明权 王静 刘家云 程晓东 岳乔红 徐修礼 孙怡群 郝晓柯 《寄生虫病与感染性疾病》 CAS 2008年第2期59-63,共5页

目的了解Ambler A和D类β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌(PA)的流行状况及其与药物敏感性的关系。方法用琼脂稀释法检测101株铜绿假单胞菌对8种常用抗菌药物的最低抑菌浓度,并PCR测序法鉴定101株铜绿假单胞菌中Ambler A和D类β-内酰胺酶流行... 目的了解Ambler A和D类β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌(PA)的流行状况及其与药物敏感性的关系。方法用琼脂稀释法检测101株铜绿假单胞菌对8种常用抗菌药物的最低抑菌浓度,并PCR测序法鉴定101株铜绿假单胞菌中Ambler A和D类β-内酰胺酶流行状况。结果101株铜绿假单胞菌对8种常用药物的MIC50的范围为232μg/ml。最有效的药物是美罗培南,但也仅能抑制80·2%的菌株。1种或1种以上β-内酰胺酶基因阳性的有27株,其中tem-1型是最常见的亚型,共有14株菌阳性;有10株菌oxa-10基因阳性;菌株PA36的oxa-Ⅰ群酶基因在基因库中无完全同源序列,将其暂命名为oxa-56like,并已提交基因库,序列号为EF437948。结论铜绿假单胞菌对β-内酰胺类耐药现象非常普遍,产酶株有对广谱抗菌药物广泛耐药的趋势。因此,早期及时地检出产酶菌株对临床治疗中抗菌药物的选择和控制感染的播散都是非常重要的。 展开更多

关键词 Β-内酰胺酶 铜绿假单胞菌 耐药性

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TTV核酸模板快速制备方法 被引量：1

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作者 苏明权 冯继红 +5 位作者 于文彬 徐光华 马越云 张建芳 张林 刘家云 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第19期1781-1783,共3页

目的　寻求建立适合大批量临床标本检测 TT病毒(TTV)核酸快速制备方法 ,直接用于 PCR扩增 .方法　应用蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法 ,分别制备TTV核酸做 PCR模板 ,用于 TTV的聚合酶链反应的快速检测 .结果　在 30例非甲～... 目的　寻求建立适合大批量临床标本检测 TT病毒(TTV)核酸快速制备方法 ,直接用于 PCR扩增 .方法　应用蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法 ,分别制备TTV核酸做 PCR模板 ,用于 TTV的聚合酶链反应的快速检测 .结果　在 30例非甲～非庚型肝炎血清和 5 0例慢性乙型肝炎患者血清 ,应用经典的蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法 ,分别制备 TTV核酸模板 ,在相同条件下进行PCR扩增 ,结果两种制备方法的符合率为 89% .结论　 TTV是一种新发现的肝炎病毒 ,目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据 ,建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中 TTV核酸制备方法 ,对 TTV肝炎的快速诊断 。 展开更多

关键词 TT病毒 聚合酶链反应 核酸制备 诊断 肝炎病毒

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放疗前后宫颈癌组织端粒酶活性的表达

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作者 曾佑平 石梅 +1 位作者 苏明权 余良宽 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期7-9,共3页

目的：研究端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用、放疗前后端粒酶活 性的检测对于放疗疗效的判定及预后评估的意义。方法：采用 ＰＣＲ－ＴＲＡＰ方法检测 ２４例 放疗前后子宫颈癌组织标本的端粒酶活性。结果：２４例宫颈癌组织... 目的：研究端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用、放疗前后端粒酶活 性的检测对于放疗疗效的判定及预后评估的意义。方法：采用 ＰＣＲ－ＴＲＡＰ方法检测 ２４例 放疗前后子宫颈癌组织标本的端粒酶活性。结果：２４例宫颈癌组织中，放疗前有２３例端粒 酶检测阳性，阳性率 ９５． ８％，放疗后有 １５例端粒酶检测阳性，阳性率 ６２． ５％。结论：端粒酶 活性表达在子宫颈癌的发生发展中起重要的作用，放疗前后端粒酶活性的测定，对于放疗效果及结局的早期预测可能是一种有用的监测手段。 展开更多

关键词 宫颈癌 放射疗法 端粒酶活性 病理学

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