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焦磷酸测序检测RARβ2基因启动子甲基化方法的建立 被引量：4
1
作者 李宏伟 李慎 +8 位作者 梁平 赵锦荣 黄启超 郭晏海 雷小英 刘永兰 隋文君 张菊 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第14期1285-1288,共4页
目的:建立基因启动子甲基化的焦磷酸测序检测方法,为基因启动子甲基化标志物的检测奠定基础.方法:从正常人全血中提取基因组DNA.采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因,克隆构建对照标准品质粒.使用甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2基因... 目的:建立基因启动子甲基化的焦磷酸测序检测方法,为基因启动子甲基化标志物的检测奠定基础.方法:从正常人全血中提取基因组DNA.采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因,克隆构建对照标准品质粒.使用甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2基因启动子CpG岛的5个甲基化位点,双脱氧测序验证.将阳性和阴性对照标准品质粒PCR扩增产物按不同比例混合后进行焦磷酸测序,检测每个点的甲基化程度,制作校正曲线.结果:构建了甲基化特异性焦磷酸测序阴性对照和阳性对照标准品.经焦磷酸测序检测后,阴性对照标准品甲基化程度为0%,阳性对照标准品甲基化程度为100%,与双脱氧测序结果一致.经对混合样品检测,甲基化频率符合线性关系,线性相关性大于0.99,斜率约为1,并且所有位点的标准偏差约为1%.结论:成功构建了甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2启动子区域甲基化阳性对照和阴性对照标准品质粒.建立了甲基化特异性焦磷酸测序检测基因启动子甲基化的方法. 展开更多
关键词 RARβ2 启动区(遗传学) 甲基化 焦磷酸测序
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应用焦磷酸测序法检测肝癌中4种基因甲基化的研究 被引量：3
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作者 牟瑛 宋添添 +2 位作者 宫雪 李宏伟 欧阳晶 《中国热带医学》 CAS 2015年第6期664-667,共4页
目的使用焦磷酸测序技术检测GSTP1、E-cadherin、RARβ、P16基因启动子区域在肝癌组织中的甲基化状态,为临床早期诊断肝癌奠定基础。方法取肝癌组织及肝硬化组织石蜡切片标本,使用焦磷酸测序仪检测GSTP1、E-cadherin、RARβ、P16基因启... 目的使用焦磷酸测序技术检测GSTP1、E-cadherin、RARβ、P16基因启动子区域在肝癌组织中的甲基化状态,为临床早期诊断肝癌奠定基础。方法取肝癌组织及肝硬化组织石蜡切片标本,使用焦磷酸测序仪检测GSTP1、E-cadherin、RARβ、P16基因启动子甲基化状态。结果肝癌与肝硬化组织相比较GSTP1基因超甲基化率为20%(4/20),E-cadherin基因超甲基化率为40%(8/20),RARβ基因超甲基化率为55%(11/20),P16基因超甲基化率为75%(15/20)。其中E-cadherin、RARβ、P16基因有统计学差异(P<0.05)。结论 E-cadherin、RARβ、P16基因在肝细胞癌患者血清中的异常甲基化表达程度,可作为肝癌早期辅助诊断的分子标志物,焦磷酸测序技术检测技术为实现临床早期诊断、早期肝癌治疗奠定了试验基础。 展开更多
关键词 焦磷酸测序 启动子甲基化 肝癌
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