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高亲和力抗有机磷杀虫剂单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：11
1
作者 薛小平 张美顺 +2 位作者 李荣源 朴元哲 郑泰晚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第6期68-71,75,共5页
制备抗有机磷杀虫剂单克隆抗体。采用人工合成带有特殊功能基团的半抗原 ,将其与载体蛋白偶联 ,以半抗原偶联物为免疫原 ,免疫BALB c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,HAT选择、有限稀释法克隆化 ,建立分泌抗机磷杀虫剂... 制备抗有机磷杀虫剂单克隆抗体。采用人工合成带有特殊功能基团的半抗原 ,将其与载体蛋白偶联 ,以半抗原偶联物为免疫原 ,免疫BALB c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,HAT选择、有限稀释法克隆化 ,建立分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系。ELISA间接法和ELISA竞争抑制法检测抗体滴度 ,非竞争抑制法检测抗体亲和常数。结果获得 9株分泌抗机磷杀虫剂单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,其中 7株为型特异性 ,2株为组特异性 ;Ig亚型均为IgG1 ;亲和常数为 4 0 7× 1 0 8± 0 43M和 1 2 7× 1 0 9± 0 2 4M。结论为人工人工合成的、含特殊功能基团的半抗原 ,与载体蛋白偶联后 ,做免疫原 ,可用于制备高滴度的抗有机磷杀虫剂单克隆抗体 。 展开更多
关键词 亲和力 有机磷杀虫剂 单克隆抗体 制备 鉴定 免疫测定
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人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选 被引量：9
2
作者 杜桂鑫 于长明 +1 位作者 毛春生 王海涛 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期49-52,共4页
目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目... 目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为693×107的抗体库,滴度为8×1014PFU/ml,Fab基因重组率为40%。以单抗捕获的甲肝抗原淘洗3轮,出现特异性富集;阳性克隆经直接ELISA和竞争抑制性ELISA实验证实具有良好的抗甲肝抗原特异性,无交叉反应性。结论　成功构建了抗体组合文库,从中获得抗甲肝抗原的特异性人抗体。 展开更多
关键词 噬菌体 抗体库
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白藜芦醇诱导U87胶质瘤细胞凋亡及caspase-3的激活 被引量：8
3
作者 常洪波 章翔 +4 位作者 甄海宁 司瑞 费舟 高大宽 章薇 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期333-337,共5页
目的探讨白藜芦醇(Res)抑制体外脑胶质瘤细胞系U87生长并诱导其凋亡,激活 caspase-3的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制不同浓度Res作用6 h、24 h、48 h后的细胞生长曲线,流式细胞仪Annexin V—FITC和PI双染检测凋亡率,Hoechst 3334... 目的探讨白藜芦醇(Res)抑制体外脑胶质瘤细胞系U87生长并诱导其凋亡,激活 caspase-3的作用。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制不同浓度Res作用6 h、24 h、48 h后的细胞生长曲线,流式细胞仪Annexin V—FITC和PI双染检测凋亡率,Hoechst 33342荧光染色及透射电镜 (TEM)观察细胞增殖改变:Western-blot分析caspase-3酶原的变化,半定量RT—PCR检测caspase-3 mRNA水平的改变,比色法测定caspase-3的相对活性。结果 Res明显抑制U87细胞的增殖 (P<0．01),呈浓度及时问依赖性反应;Res可诱导U87胶质瘤细胞凋亡并呈浓度依赖关系。用不同浓度 Res处理U87细胞24 h,随药物浓度增加,caspase-3酶原的蛋白水平减少,caspase-3 mRNA水平增加 (P<0．01)。用200 μmol／L Res分别处理细胞0．5、2、6、12、24 h,caspase-3活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P<0．01);用不同浓度的Res处理细胞12 h,caspase-3活性呈浓度依赖性的升高(P<0．01)。结论 Res明显抑制U87细胞生长并诱导其发生凋亡,凋亡过程中有caspase-3的激活。 展开更多
关键词 白藜芦醇 神经胶质瘤 细胞凋亡 CASPASE-3
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引发医院感染表皮葡萄球菌生物被膜的检测 被引量：11
4
作者 贾宁 徐志凯 +1 位作者 索继江 邢玉斌 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期88-91,共4页
为了解引发医院感染的表皮葡萄球菌中ica操纵元的存在与生物被膜的产生的关系及其对抗生素敏感性的影响,收集了引发医院感染的表葡萄球菌106株,采用定量和定性法检测生物被膜的产生,PCR法检测ica操纵元基因的存在以及测量细菌对红霉素(E... 为了解引发医院感染的表皮葡萄球菌中ica操纵元的存在与生物被膜的产生的关系及其对抗生素敏感性的影响,收集了引发医院感染的表葡萄球菌106株,采用定量和定性法检测生物被膜的产生,PCR法检测ica操纵元基因的存在以及测量细菌对红霉素(ERY)、氨苄青霉素(AMP)、头孢西丁(FOX)、头孢曲松(CRO)、替考拉宁(TEC)、环丙沙星(CIP)、四环素(TCY)、复方新诺明(SXT)、万古霉素(VAN)的最小抑菌浓度(MIC);106株表皮葡萄球菌分离株中,有33株检测出icaABC(31．1％);ica+菌中产膜菌的检出率高于ica-菌(P=0．001);葡萄糖和NaCl可提高产膜菌的检出率;ica+浮游菌对红霉素,头孢西丁和头孢曲松的耐药率高于ica-浮游菌株,但对氨苄青霉素,环丙沙星,四环素和复方新诺明的耐药率与ica-菌相似;ica位点基因的存在与引发表葡菌医院感染密切相关,但生物被膜内菌耐药机制还需进一步研究。 展开更多
关键词 表皮葡萄球菌 生物被膜ica
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日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定 被引量：7
5
作者 张明杰 汪美先 +2 位作者 姜绍谆 马文煜 于碧云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期34-37,共4页
用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别... 用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别的抗原位点相同或接近,而其余单克隆抗体则识别不同的或相距较远的抗原位点。从50％最大结合的单克隆抗体浓度分析可知,6株单克隆抗体的相对亲和力为nG2>2H4>2D2>mG9>2F2>mC3,浓度范围约为0.01～1.50ng。本研究为JEV单克隆抗体在诊断学及其疫苗研究中的应用提供了必要的资料。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 单克隆抗体 抗原位占
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微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的研究 被引量：6
6
作者 郑联合 张伟 +2 位作者 韩涛 马保安 范清宇 《中国误诊学杂志》 CAS 2005年第8期1406-1408,共3页
目的:以人成骨肉瘤细胞系为研究对象,探讨微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间。方法:以微波不同作用剂量和时间,作用于人成骨肉瘤细胞。采用形态学观察,四唑兰显色法,软琼脂集落形成实验,FCM等方法观察微波诱导成骨肉... 目的:以人成骨肉瘤细胞系为研究对象,探讨微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间。方法:以微波不同作用剂量和时间,作用于人成骨肉瘤细胞。采用形态学观察,四唑兰显色法,软琼脂集落形成实验,FCM等方法观察微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡。结果:寻找到了微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的最佳作用剂量和时间,分别为100W/m2和1h。结论:微波辐射可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 微波 骨肉瘤/病理学 细胞凋亡
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汉滩病毒核蛋白的分段表达及抗原表位分析 被引量：6
7
作者 薛小平 徐志凯 +5 位作者 马文煜 尹文 张芳琳 闫岩 吴兴安 白文涛 《中国病毒学》 CSCD 2000年第3期220-225,共6页
在大肠杆菌中对汉滩病毒S基因 4种不同长度片段的重组表达质粒进行诱导表达。结果表明表达的 4种GST NP融合蛋白均以不溶性包含体形式存在于菌体细胞内 ,表达量分别占菌体蛋白总量的 2 9- 36 % ,分子量分别约为 72kD、6 6kD、54kD和 4 ... 在大肠杆菌中对汉滩病毒S基因 4种不同长度片段的重组表达质粒进行诱导表达。结果表明表达的 4种GST NP融合蛋白均以不溶性包含体形式存在于菌体细胞内 ,表达量分别占菌体蛋白总量的 2 9- 36 % ,分子量分别约为 72kD、6 6kD、54kD和 4 4kD。Westernblot显示 54kD和 72kD融合蛋白用酶标抗汉滩病毒NPMcAb 1A8和抗GSTMcAb 3C11染色呈阳性反应。 6 6kD和4 4kD融合蛋白仅与酶标 3C11呈阳性反应。用凝血酶切去GST ,获得 4种汉滩病毒重组核蛋白(rNP) ,分子量分别约为 4 4kD、4 0kD、2 6kD和 16kD。用 19株McAb对表达产物做抗原位点分析 ,结果完整的rNP可与 19株McAb中的 13株反应 ,McAb反应谱与天然NP相同 ;S1.1kb表达产物 (N 端 1 37和C端 4 0 2 4 2 9位aa缺失 )和S 0 .5kb表达产物 (N 端 1 2 74位aa缺失 )与 19株McAb均不发生反应 ;S0 .7kb表达产物 (C 端 2 75 4 2 9位aa缺失 )可与 5株组特异性McAb反应。表明汉坦病毒核蛋白上的抗原位点主要存在于N 端 1 37位aa区段内。 展开更多
关键词 汉滩病毒 抗原表位 核蛋白
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丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化 被引量：7
8
作者 韩冬梅 陈协群 +2 位作者 梁蓉 董宝侠 尹文 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期21-24,共4页
为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标... 为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 HL-60细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞分化
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治疗用乙型脑炎单克隆抗体注射液的研制 被引量：6
9
作者 过琴媛 张碧如 +10 位作者 邹林 寿伟华 李鸿斌 全昱东 万邦礼 李玲玲 黄文萱 王兵 宋爱京 马文煜 黄庆生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期16-20,共5页
用清洁级F1代小鼠制备日本脑炎病毒单克隆抗体腹水，经辛酸沉淀、硫酸铵盐析粗提后，再通过凝胶过滤柱层析纯化。每毫升腹水可得到单克隆抗体4～4．5mg，纯度大于95％，回收率为60％～70％，蚀斑中和法测定活性大于5×105，无鼠源... 用清洁级F1代小鼠制备日本脑炎病毒单克隆抗体腹水，经辛酸沉淀、硫酸铵盐析粗提后，再通过凝胶过滤柱层析纯化。每毫升腹水可得到单克隆抗体4～4．5mg，纯度大于95％，回收率为60％～70％，蚀斑中和法测定活性大于5×105，无鼠源病毒污染，经各项检测均符合人用鼠源性单克隆抗体的要求。按有关规程研制成治疗用乙型脑炎单克隆抗体注射液，经全面检定符合临床试验的标准。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 单克隆抗体 注射液 研制
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增强乙型肝炎疫苗免疫效果的研究进展 被引量：5
10
作者 胡兴斌 尹文 徐志凯 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第S2期127-130,共4页
乙肝疫苗对于控制乙型肝炎病毒感染十分重要.近年人们仍在根据免疫学理论和生物工程技术进展不断研发更加科学有效的新型乙肝疫苗.就新型乙肝疫苗设计的免疫机制和提高免疫效果的关键因素作出综述.
关键词 乙型肝炎 病毒 疫苗
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MMP-1在人牙周膜成纤维细胞中的表达 被引量：3
11
作者 刘馨蔚 曹军 +4 位作者 黎志东 王媛 刘琦 张子川 徐静 《中国美容医学》 CAS 2010年第3期372-373,共2页
目的:在基因和蛋白水平检测体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)金属基质蛋白酶-1(MMP-1)的表达情况。方法:①收集4～6代体外培养的人PDL细胞,使用PCR方法检测细胞内MMP-1的基因表达;②取细胞外液用Westernblot方法检测MMP-1蛋白表达。结... 目的:在基因和蛋白水平检测体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)金属基质蛋白酶-1(MMP-1)的表达情况。方法:①收集4～6代体外培养的人PDL细胞,使用PCR方法检测细胞内MMP-1的基因表达;②取细胞外液用Westernblot方法检测MMP-1蛋白表达。结果:PCR结果显示MMP-1在PDL中基因水平上有表达,而Westernblot结果在蛋白水平上也证明了MMP-1在PDL中有表达,结论:体外培养的PDL具有MMP-1的功能。 展开更多
关键词 人牙周膜成纤维细胞 MMP-1 WESTERN BLOT PCR
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TGF-β_1影响人牙周膜成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1的初步研究 被引量：3
12
作者 刘琦 曹军 +4 位作者 黎志东 解涵 刘馨蔚 徐静 李新平 《中国美容医学》 CAS 2010年第2期245-249,共5页
目的:研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外对人牙周膜成纤维细胞(human peri-odontal ligament fibroblasts,HPDLFs)分泌基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)的影响,进而探讨TGF-β1对H... 目的:研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外对人牙周膜成纤维细胞(human peri-odontal ligament fibroblasts,HPDLFs)分泌基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)的影响,进而探讨TGF-β1对HPDLFs分泌MMP-1的调控作用,以期为通过生物学途径建立防治正畸过程中牙根吸收的有效方法提供理论依据。方法:原代培养HPDLFs,取传代至第5代HPDLFs实验。设立TGF-β1工作浓度梯度:0.03ng/ml、0.05ng/ml、0.07ng/ml、0.09ng/ml;0ng/mlTGF-β1为空白对照组;选取4h、8h、12h、24h、48h5个时间点收获上清液。双抗体夹心酶联免疫吸附实验(enzyme-linked-immunosorbent serologic assay,ELISA)法检测各样本中MMP-1含量。采用多元线性回归方法分析实验结果。结果:MMP-1分泌量与TGF-β1作用时间总体上存在时间依赖性,具有统计学差异,P<0.05。但各作用时间下MMP-1分泌量与TGF-β1工作浓度并没有表现出一致的剂量依赖关系;4h时各实验组MMP-1分泌量随TGF-β1浓度的递增而下降;8h、12h、24h时,各实验组MMP-1分泌量与TGF-β1工作浓度基本呈正相关;48h时各组MMP-1含量变化较大没有明显趋势。结论:MMP-1分泌量与TGF-β1作用时间存在显著时间依赖性,TGF-β1可通过促进MMP-1分泌参与正畸过程中牙根吸收的发生和发展。 展开更多
关键词 牙根吸收 转化生长因子Β1 基质金属蛋白酶-1 牙周膜成纤维细胞
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人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库的构建 被引量：1
13
作者 王彦刚 章翔 +5 位作者 阎岩 付洛安 刘卫平 吴景文 郭庆东 刘先珍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期795-797,共3页
为构建人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞 (PBL)中提取细胞总RNA ,经逆转录后用套式PCR分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因。先构建Vκ基因库 ,并使连接Vκ和VH基因的linker与Vκ基因连接 ,再将VH基因克隆入Vκ... 为构建人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞 (PBL)中提取细胞总RNA ,经逆转录后用套式PCR分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因。先构建Vκ基因库 ,并使连接Vκ和VH基因的linker与Vκ基因连接 ,再将VH基因克隆入Vκ基因库 ,即构建成功单链抗体 (ScFv)库。随机挑取菌落鉴定 ,测序表明从PBL中扩增出人源性Vκ和VH基因 ,并构建了库容量约为 2× 10 6的ScFv噬菌体抗体库。随机挑取克隆的测序表明 ,测定的VH基因与Kabat的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性 ,证明所克隆的基因属人抗体可变区基因。结果表明实验构建成人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 噬菌体抗体库 单链抗体 免疫治疗 脑肿瘤 PBL 外周血淋巴细胞
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次声的研究进展 被引量：1
14
作者 曹鹏冲 尹文 《中国康复》 2004年第5期311-312,共2页
关键词 次声 生物共振 次声诊断及治疗 次声内环境平衡
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乙肝病毒preS1基因与截短C基因真核表达载体构建及表达 被引量：2
15
作者 胡兴斌 尹文 +5 位作者 韦三华 雷迎峰 吕欣 杨敬 孙梦宁 徐志凯 《实用预防医学》 CAS 2005年第5期1025-1028,共4页
目的建立乙型肝炎病毒(HCV)preS1基因与截短C基因真核表达载体,并在CHO细胞中瞬时表达。方法PCR方法扩增HBV核心区羧基端部分缺失的基因片段和preS1全基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染CHO细胞。结果... 目的建立乙型肝炎病毒(HCV)preS1基因与截短C基因真核表达载体,并在CHO细胞中瞬时表达。方法PCR方法扩增HBV核心区羧基端部分缺失的基因片段和preS1全基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染CHO细胞。结果构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-Ct-preS1,成功转染CHO细胞,间接免疫荧光和RT-PCR证实pcDNA3.1(-)-Ct-preS1在CHO中表达截短的核心基因和preS1基因融合蛋白。结论成功构建preS1基因与截短C基因真核表达载体,可在CHO细胞中瞬时表达,为深入研究HBV基因免疫奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因免疫 转染 真核表达
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从蛋白质的演化看生物进化 被引量：2
16
作者 李元 马文煜 《医学与哲学》 1997年第10期529-530,共2页
从蛋白质的演化看生物进化第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜在生物学史上，拉马克、达尔文在其创立的生物进化论中强调了由生存竞争、自然选择引起的物种演化的渐进性与连续性，却忽视了某些物种演化形式的突变... 从蛋白质的演化看生物进化第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜在生物学史上，拉马克、达尔文在其创立的生物进化论中强调了由生存竞争、自然选择引起的物种演化的渐进性与连续性，却忽视了某些物种演化形式的突变性与间断性。而生物突变论则只看到一... 展开更多
关键词 蛋白质 演化 生物进化
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人源抗-HAV全分子抗体在CHO细胞中的表达 被引量：1
17
作者 于长明 徐静 +4 位作者 童贻刚 陈薇 刘国奇 徐志凯 王海涛 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第3期176-178,共3页
目的 :构建人源抗_HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系。方法 :将抗_HAV抗体轻链全分子 (信号肽与VL_CL)基因克隆至表达载体pCI_neo中 ;将重链信号肽、重链 (γ)VH_CH1 和Fc基因进行重组形成重链全分子基因 ,再将其克隆到真核表达载体pCdh... 目的 :构建人源抗_HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系。方法 :将抗_HAV抗体轻链全分子 (信号肽与VL_CL)基因克隆至表达载体pCI_neo中 ;将重链信号肽、重链 (γ)VH_CH1 和Fc基因进行重组形成重链全分子基因 ,再将其克隆到真核表达载体pCdhfr1中。将轻、重链全分子表达载体共转染CHO dhfr_细胞 ,用G_4 18和甲氨蝶呤(MTX)筛选细胞克隆 ,ELISA法检测细胞培养上清中的抗_HAV活性 ,增加MTX浓度进行加压筛选。用蛋白L亲和层析柱从培养上清中纯化重组抗体。结果 :构建的真核表达载体可实现抗_HAV全分子抗体在CHO细胞中的分泌表达 ,纯化的重组抗体在还原SDS_PAGE中表现为相对分子质量约 2 5 0 0 0、5 0 0 0 0两条带 ;Western印迹表明 ,重组抗体全分子和重链分子均可和羊抗人Fc抗体发生特异性免疫反应。结论 :抗_HAV全分子抗体在CHO细胞中表达 。 展开更多
关键词 基因工程抗体 甲型肝炎病毒 哺乳动物细胞 真核表达
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藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响
18
作者 樊爱琳 简文 +6 位作者 郑善銮 师长宏 马越云 杨麦贵 柏银兰 徐志凯 郝晓柯 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期503-506,共4页
目的表达纯化藤黄微球菌（Micrococcus luteus）复活促进因子（Rpf）及结构域（domain）蛋白，研究其对结核分枝杆菌生长的影响。方法诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT—Rpf和pPro—EXHT-Rpf domain，... 目的表达纯化藤黄微球菌（Micrococcus luteus）复活促进因子（Rpf）及结构域（domain）蛋白，研究其对结核分枝杆菌生长的影响。方法诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT—Rpf和pPro—EXHT-Rpf domain，在变性条件下对目的蛋白进行纯化。用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长。结果获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95％和93％，相对分子质量（Mr）大小分别为30×10^3和12×10^3，蛋白质含量分别为471mg／L和337ms／L。Western blot证实，获得的蛋白为我们所需要的目的蛋白。所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长，而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长。结论表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长，而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性。 展开更多
关键词 藤黄微球菌 结核分枝杆菌 复活促进因子 结构域
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人中性粒细胞多肽HNP_(1,3)体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用 被引量：1
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作者 刘娟 孙永涛 +3 位作者 王少扬 史孟元 庄严 翟嵩 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期366-369,共4页
体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的... 体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用。MTT法检测各药物对细胞的毒性作用。结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(EC50)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC50为0.68μg/mL。MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性。以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成。 展开更多
关键词 中性粒细胞多肽1 3(HNP1 3) 阿昔洛韦(ACV) 单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV—1)
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高迁移率族蛋白1在大肠埃希菌中的高效表达以及纯化 被引量：1
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作者 姜南艳 张伟 +3 位作者 任君萍 顾炳权 沈建军 张惠中 《现代检验医学杂志》 CAS 2007年第3期26-28,共3页
目的克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)。方法从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下... 目的克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)。方法从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化后用Western-Blot证实。结果DNA测序证明,获得了HMGB1基因,其序列与Gen Bank中报道序列完全一致;SDS-PAGE分析表明,HMGB1蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的32%;诱导表达产物主要以包涵体形式存在,6 His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-Blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性。结论成功表达和纯化了HMGB1基因。 展开更多
关键词 HMGB1 逆转录 聚合酶链反应 基因表达
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