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分枝杆菌计数方法的比较研究 被引量：8
1
作者 罗泰来 申亮亮 +1 位作者 柏银兰 薛莹 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第4期373-375,共3页
目的：建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法．方法：采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数，建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线．结果：建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标... 目的：建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法．方法：采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数，建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线．结果：建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标准曲线，通过准确度分析表明在细菌含量在每毫升10^5～10^8之间时，两标准曲线线性关系良好．结论：该方法可用于牡牛分枝杆菌的快速计数． 展开更多
关键词 紫外分光光度计法 湿重法 平板菌落计数法 标准曲线 牡牛分枝杆菌
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急性髓系白血病细胞端粒酶活性及端粒长度的同步分析 被引量：3
2
作者 刘利 孙秉中 +5 位作者 梁英民 郝淼旺 邓中荣 张传山 阎严 张方信 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期592-594,共3页
目的　探讨急性髓系白血病 (AML)患者端粒酶活性、端粒长度的变化及意义。方法　采用TRAP ELISA PAGE法测定端粒酶表达活性 ,Southernblot方法测定端粒长度。结果　AML患者端粒酶活性 [吸光度 (A)值为 2 .2 98± 1.0 5 9]较正常对照... 目的　探讨急性髓系白血病 (AML)患者端粒酶活性、端粒长度的变化及意义。方法　采用TRAP ELISA PAGE法测定端粒酶表达活性 ,Southernblot方法测定端粒长度。结果　AML患者端粒酶活性 [吸光度 (A)值为 2 .2 98± 1.0 5 9]较正常对照 (A值为 0 .3 87± 0 .5 98)显著增高 ,同时其平均端粒长度 [( 7.6± 2 .1)kb]较正常对照 [( 9.3± 1.9)kb]明显缩短。端粒长度的变化主要发生在端粒酶活性高表达的白血病细胞中。结论　AML细胞端粒酶活化可能与其端粒缩短有关。端粒的丢失可导致染色体的失稳 ,激活端粒酶依赖的端粒机制 ,在白血病的发生中起着重要作用。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 端粒酶活性 端粒长度
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结核分枝杆菌Rv1009结构域基因的克隆、表达及亲和层析纯化 被引量：3
3
作者 樊爱琳 苏明权 +7 位作者 师长宏 徐志凯 柏银兰 马静 刘家云 张建芳 程晓东 郝晓柯 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期557-560,共4页
目的:克隆结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,经序列测定正确后进行融合表达和纯化。方法:采用PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009结构域基因,用限制性内切酶消化后插入pUC-19克隆载体中,经测序正确后亚克隆到融合表达载体pPro-EXH... 目的:克隆结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,经序列测定正确后进行融合表达和纯化。方法:采用PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009结构域基因,用限制性内切酶消化后插入pUC-19克隆载体中,经测序正确后亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了N端带6个连续组氨酸残基的Rv1009结构域多肽,在变性条件下对目的蛋白进行纯化。结果:获得了结核分枝杆菌Rv1009结构域基因,得到融合6个组氨酸残基的Rv1009结构域多肽,纯化获得的蛋白纯度大于87%。结论:构建了结核分枝杆菌Rv1009结构域基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为后续深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 克隆 表达 纯化 西安710032
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胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库的构建 被引量：1
4
作者 章翔 蒋晓帆 +4 位作者 王彦刚 郭庆东 吴景文 刘先珍 阎岩 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2002年第1期40-43,共4页
目的 构建胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库。方法 从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞（PBL）中提取细胞总RNA,经逆转录后用套式多聚酶链反应（PCR）分别扩增抗体轻链VK和重链VH基因。先构建VK基因库,并使linker与VK基因连接,再将VH基因克... 目的 构建胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库。方法 从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞（PBL）中提取细胞总RNA,经逆转录后用套式多聚酶链反应（PCR）分别扩增抗体轻链VK和重链VH基因。先构建VK基因库,并使linker与VK基因连接,再将VH基因克隆人VK基因库,即构建成功单链抗体（ScFv）基因库。随机挑取菌落鉴定后测序。结果 从PBL中扩增出人源性VK和VH基因,并构建了库容量约为2×106的ScFv噬菌体抗体基因库。随机挑取克隆的测序结果表明,测定的VH基因与Kabat的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性,证明所克隆的基因属于人抗体可变区基因。结论 本实验构建成胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库,为进一步筛选入源性抗脑胶质瘤抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 胶质瘤 噬菌体 抗体 基因库
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藤黄微球菌Rpf结构域多肽诱导小鼠免疫应答的实验研究 被引量：1
5
作者 樊爱琳 简文 +5 位作者 师长宏 苏明权 柏银兰 马静 徐志凯 郝晓柯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期686-688,共3页
目的:研究藤黄微球菌Rpf结构域多肽的免疫学特性。方法:用原核表达的藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫BALB/c小鼠3次,每次间隔2周。用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法... 目的:研究藤黄微球菌Rpf结构域多肽的免疫学特性。方法:用原核表达的藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫BALB/c小鼠3次,每次间隔2周。用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增值指数。ELISA方法检测淋巴淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10和IL-12产生水平。另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后,计数脾脏细菌负荷数。结果:藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶128000,淋巴细胞增殖指数为(2.10±0.12),明显高于生理盐水对照组(0.90±0.21)。ELISA方法检测Rpf结构域多肽免疫组IFN-γ,IL-10和IL-12水平为(1126±36)ng/L,(368±13)ng/L和(289±14)ng/L,明显高于生理盐水对照组(P<0.01)。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.64±0.13)相比较,Rpf结构域多肽免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有明显作用(细菌负荷为5.03±0.11,P<0.05)。结论:藤黄微球菌Rpf结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分。 展开更多
关键词 藤黄微球菌 免疫学特性 Rpf结构域
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BMP_2-EGFP融合蛋白的构建及其生物活性 被引量：3
6
作者 张银刚 郭雄 +2 位作者 师常宏 邹爱民 许鹏 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期16-20,共5页
目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法: 用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS 7细 胞,用荧光显微镜检测和Westernblotting... 目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法: 用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS 7细 胞,用荧光显微镜检测和Westernblotting分析其在COS 7细胞表达,细胞活性实验和动物体内异位成骨实验进一 步检测融合蛋白的生物活性。结果:经酶切和PCR鉴定重组质粒BMP2/pLEGFP构建成功。转染COS 7细胞后, 荧光显微镜和Westernblotting检测均显示融合蛋白在细胞中表达;分泌的产物经细胞活性实验和动物体内异位成 骨实验证实具有BMP2和EGFP的双重蛋白活性。结论:基因重组技术成功构建BMP2/pLEGFP重组体,重组体表 达的融合蛋白具有GFP和BMP2的双重活性。 展开更多
关键词 BMP2 基因转染 真核表达 生物活性
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乙肝病毒前S1基因与截短C基因穿梭表达载体构建 被引量：3
7
作者 胡兴斌 徐志凯 +5 位作者 尹文 韦三华 雷迎锋 杨敬 吕欣 孙梦宁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期38-40,共3页
目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCP10序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗... 目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCP10序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选及PCR鉴定,阳性克隆热休克诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析。结果扩增到了预期长度的2个目的基因,构建了分泌型穿梭载体,SDS-PAGE分析可见相对分子质量约23000蛋白表达条带。结论已成功构建耻垢分枝杆菌分泌表达前S1基因和截短C基因的穿梭载体,为研究含前S基因和截短C基因的重组BCG疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒 穿梭载体 分枝杆菌 疫苗
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HL-60细胞端粒酶活性的调控因素
8
作者 刘利 孙秉中 +5 位作者 梁英民 郝淼旺 邓中荣 张传山 闫严 张方信 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第19期1748-1751,共4页
目的　探讨 HL - 6 0细胞端粒酶活性的调控因素 .方法　用脂质体介导法将 L XSN- wt- p5 3逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系 HL- 6 0中 ,用 c- myc,bcl- 2基因反义脱氧寡核苷酸作用 HL - 6 0细胞 ,用全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL- 6 ... 目的　探讨 HL - 6 0细胞端粒酶活性的调控因素 .方法　用脂质体介导法将 L XSN- wt- p5 3逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系 HL- 6 0中 ,用 c- myc,bcl- 2基因反义脱氧寡核苷酸作用 HL - 6 0细胞 ,用全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL- 6 0细胞分化后 ,采用 TRAP- EL ISA- PAGE法测定端粒酶活性 ,观察野生型 p5 3基因、c- myc,bcl- 2 ,全反式维甲酸(ATRA)对 HL- 6 0细胞端粒酶活性的影响 .结果　野生型p5 3基因不影响 HL- 6 0细胞的端粒酶活性 ;bcl- 2及 c- myc反义寡核苷酸可下调 HL - 6 0细胞的端粒酶活性 ;ATRA在诱导HL- 6 0细胞分化的同时 ,可使 HL- 6 0细胞的端粒酶活性降低 .结论　 HL - 6 0细胞端粒酶活性受到 c- myc,bcl- 2 ,全反式维甲酸 (ATRA) 展开更多
关键词 端粒酶 急性髓细胞白血病 HL-60细胞 调控因素
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空肠弯曲菌粘附蛋白PEB1原核表达、纯化及多克隆抗体制备
9
作者 简文 史皆然 +4 位作者 樊爱琳 薛莹 李圣青 柏银兰 戚好文 《武警医学院学报》 CAS 2010年第4期271-273,F0003,共4页
【目的】克隆、表达空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体。【方法】采用PCR方法从空肠弯曲菌Penner19标准株基因组中扩增出PEB1蛋白基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载... 【目的】克隆、表达空肠弯曲菌表面蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体。【方法】采用PCR方法从空肠弯曲菌Penner19标准株基因组中扩增出PEB1蛋白基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHTb中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的PEB1蛋白,并经Western-blotting证实。然后,在非变性条件下用Ni-NTA亲和色谱柱纯化目的蛋白。用纯化的PEB1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。【结果】在非变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化PEB1融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,得到抗PEB1抗体,效价达1:2×105。【结论】成功构建了空肠弯曲菌PEB1基因原核表达载体,并获得了高纯度的PEB1蛋白及其高效价多抗,对进一步制备肠粘膜高亲和力的过敏原重组BCG打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 粘附蛋白 原核表达 纯化 多克隆抗体
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单链抗体及重组白介素-2双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测 被引量：1
10
作者 史梦远 王海涛 张芳琳 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第2期134-137,共4页
目的利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,并探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。方法采用聚合酶链式反应(PCR)将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗成骨肉瘤单链抗体(scFv)基因5′端,其3′与白介素... 目的利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,并探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。方法采用聚合酶链式反应(PCR)将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗成骨肉瘤单链抗体(scFv)基因5′端,其3′与白介素-2(IL-2)基因连接构成分泌型单链双功能抗体scFv-IL-2基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(scFv-IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/scFv-IL-2,以PCR,RT-PCR以及Western blotting对scFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定。在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件DNAs-sist和蛋白质分析软件ANTHEPROTV5分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。结果经酶切、PCR及Western blotting分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(scFv-IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26,scFv-IL-2融合蛋白通过DNAssist和ANTHEPROTV5软件分析获得了融合蛋白的二级结构及其理化性质。结论利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。 展开更多
关键词 单链抗体 生物信息学资源 融合蛋白
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胸水诊断进展 被引量：1
11
作者 汪海丹 于淑湘 《临床荟萃》 CAS 1999年第1期27-28,共2页
结核和肿瘤是导致胸水的常见原因,两者的鉴别具有重要意义,脱落细胞学检测是常用方法,但阳性率并不很高,约为50％～70％。近年来采用放射免疫技术检测胸水中某些代谢物水平对两者鉴别有一定意义,脱落细胞学检测则是诊断恶性胸水的特别... 结核和肿瘤是导致胸水的常见原因,两者的鉴别具有重要意义,脱落细胞学检测是常用方法,但阳性率并不很高,约为50％～70％。近年来采用放射免疫技术检测胸水中某些代谢物水平对两者鉴别有一定意义,脱落细胞学检测则是诊断恶性胸水的特别重要的方法,但阳性率不很高,本文就如何准确地鉴别和诊断良恶性胸水这一问题加以探讨,总结了一些经验。 展开更多
关键词 水胸 诊断 鉴别诊断 恶性胸水 结核性胸水
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MAGE-A4重组蛋白的原核表达与纯化
12
作者 雕丽琼 薛莹 +3 位作者 石梅 柴广金 穆允凤 王丽梅 《解放军预防医学杂志》 CAS 2013年第2期109-112,共4页
目的构建MAGE-A4的原核表达质粒并表达纯化相应蛋白,为恶性肿瘤的早期诊断和基因治疗疫苗的研制奠定基础。方法根据目的基因序列合成目的基因并与原核表达载体连接,以构建原核表达质粒pET30a(+)/MAGE-A4,将酶切鉴定及测序正确的重组质... 目的构建MAGE-A4的原核表达质粒并表达纯化相应蛋白,为恶性肿瘤的早期诊断和基因治疗疫苗的研制奠定基础。方法根据目的基因序列合成目的基因并与原核表达载体连接,以构建原核表达质粒pET30a(+)/MAGE-A4,将酶切鉴定及测序正确的重组质粒转入E.coli BL21,经IPTG诱导表达并行可溶性分析,Western Blot鉴定重组蛋白特异性后,通过亲和层析法纯化重组蛋白。结果成功构建pET30a(+)/MAGE-A4原核表达质粒,诱导表达得到重组蛋白MAGE-A4,主要以可溶性形式表达,纯化后获得纯度较高的蛋白。结论成功构建pET30a(+)/MAGE-A4原核表达质粒并表达纯化出具有生物学活性的重组蛋白MAGE-A4。 展开更多
关键词 肿瘤睾丸抗原 MAGE-A4 原核表达 纯化
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HSV-2的生物信息学分析及其探针设计的探讨
13
作者 张建华 王海涛 张芳琳 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第7期582-584,共3页
目的利用生物信息学分析单纯疱疹病毒2型(HSV-2)基因序列的特点,设计HSV-2诊断芯片的Oligo探针。方法利用Matlab7.0和ANTHEPROTV5对HSV-2序列进行分析,并通过BLAST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件O... 目的利用生物信息学分析单纯疱疹病毒2型(HSV-2)基因序列的特点,设计HSV-2诊断芯片的Oligo探针。方法利用Matlab7.0和ANTHEPROTV5对HSV-2序列进行分析,并通过BLAST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件Oligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的Oligo探针。结果利用Matlab7.0和ANTHEPROTV5分析HSV-2二级结构的分布以及其理化性质,同时生物学软件Oligo6.0获得13条60-merOligo探针。结论通过生物信息学设计HSV-2诊断芯片的探针,可为后期打印成DNA芯片,用于HSV-2的检测打下基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 MATLAB7.0 BLAST Oligo探针
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应用生物信息学网络资源分析预测融合蛋白的二级结构及其理化性质 被引量：1
14
作者 史梦远 王海涛 张芳琳 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1685-1688,共4页
目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。方法:①将单链抗体基因(ScFv)与白细胞介素2基因亚克隆至反转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(ScFv-IL-2)SN在脂质体... 目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。方法:①将单链抗体基因(ScFv)与白细胞介素2基因亚克隆至反转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(ScFv-IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/ScFv-IL-2。②以PCR,RT-PCR以及Western blotting对ScFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定。在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。结果:①经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFv-IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26;Western blotting分析证明ScFv-IL-2基因融合蛋白的表达。②运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-IL-2DNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。结论:利用生物信息学网络资源可以分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。 展开更多
关键词 单链抗体 生物信息学资源 融合蛋白ScFv-IL-2基因 生物医学工程
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启发式教学法在医学微生物学教学中的应用 被引量：35
15
作者 黎志东 徐志凯 +1 位作者 李元 鲍向红 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2001年第4期312-313,共2页
医学微生物学教学中,运用启发式教学法可激发学生学习兴趣、强化学生对所学知识的记忆和培养学生的创新精神.在运用启发式教学法时,应注意有效地组织学生,有效地引导学生,选择适宜的题材和营造创新思维的气氛.
关键词 启发式教学法 医学微生物学 创新思维 题材
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启发式等三种教学方法在医学微生物学教学中的应用 被引量：35
16
作者 黎志东 徐志凯 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期218-222,共5页
医学微生物学具有内容多、重点多、知识点分散的特点。为提高课堂教学质量,综合运用启发式、案例式及PBL(Problem-based learning)三种教学方法,强化学生对基本知识、基本概念和重点内容的掌握,激发学生的学习兴趣和创新精神,提高学生... 医学微生物学具有内容多、重点多、知识点分散的特点。为提高课堂教学质量,综合运用启发式、案例式及PBL(Problem-based learning)三种教学方法,强化学生对基本知识、基本概念和重点内容的掌握,激发学生的学习兴趣和创新精神,提高学生发现问题、分析问题和解决问题的能力。 展开更多
关键词 微生物学 教学方法 教学质量
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HPLC法测定阿霉素毫微粒经肝动脉灌注后大鼠体内的早期动态分布 被引量：17
17
作者 陈江浩 王执民 +3 位作者 吴道澄 徐山淡 陈海微 文爱东 《第四军医大学学报》 2000年第1期89-91,共3页
目的　检测阿霉素毫微粒 (NADM)经肝动脉灌注后 ,在大鼠体内的药物分布 ,并与游离阿霉素 (FADM)相比较 .方法　以 α-聚氰基丙烯酸正丁酯为载体材料 ,制备NADM;SD纯系大鼠 2 4只 ,随机分为两组 ,每组 1 2只动物 ,经肝动脉分别注入 NADM... 目的　检测阿霉素毫微粒 (NADM)经肝动脉灌注后 ,在大鼠体内的药物分布 ,并与游离阿霉素 (FADM)相比较 .方法　以 α-聚氰基丙烯酸正丁酯为载体材料 ,制备NADM;SD纯系大鼠 2 4只 ,随机分为两组 ,每组 1 2只动物 ,经肝动脉分别注入 NADM与 FADM,药物剂量 2 mg·kg- 1 ,药物浓度 1 .0 g· L- 1 .每组于给药后 1 ,5 ,1 5 h各处死 4只大鼠 ,分别提取血浆、肝、心、脾、肺、肾样品 ,以反相高效液相色谱荧光检测法 (RP- HPL C)测定药物浓度 .结果　与FADM组相比 ,1 ,5 ,1 5 h时 NADM组大鼠肝、脾中阿霉素浓度显著增高 ,而血浆、肺、肾中阿霉素浓度降低 .心脏药物浓度给药后 1 h,5 h FADM组高于 NADM组 ,1 5 h时低于NADM组 .结论　 NADM肝动脉给药后改变了阿霉素的体内分布特征 ,对肝、脾表现出明显的靶向性 ,而血、心、肺、肾中的药物分布减少 . 展开更多
关键词 阿霉素 毫微粒 肝动脉灌注 药代动力学
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结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白基因免疫 被引量：22
18
作者 范雄林 徐志凯 +4 位作者 李元 薛莹 张芳琳 李别虎 白光春 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第14期1282-1286,共5页
目的　研究已构建的编码结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB) H37Ra株 Ag85 B成熟蛋白基因的真核表达质粒 p TB30 m的表达和免疫原性 .方法　以电穿孔法将 p TB30 m转染 CHO细胞 ,RT- PCR法检测转染细胞中 Ag85 B特异的 m RN... 目的　研究已构建的编码结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB) H37Ra株 Ag85 B成熟蛋白基因的真核表达质粒 p TB30 m的表达和免疫原性 .方法　以电穿孔法将 p TB30 m转染 CHO细胞 ,RT- PCR法检测转染细胞中 Ag85 B特异的 m RNA的表达 .将 p TB30 m质粒肌注免疫 BAL B/c和 C5 7BL /6小鼠 ,EL ISA法检测基因免疫的体液免疫应答效果 .分离免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,生物学方法检测 IFNγ产生水平和 MTT法检测淋巴细胞增殖 .结果　 RT- PCR检测证实 p TB30 m可在 CHO细胞中表达 .p TB30 m免疫小鼠可引起较高水平的 Ag85 B特异性的抗体应答 .免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,淋巴细胞增殖显著 ,BAL B/c和 C5 7BL/6小鼠 IFNγ的量分别达到 136 0 ng· L- 1 和 196 5 ng· L- 1 ,而生理盐水和空质粒对照组均低于 80 ng· L- 1 .结论　应进一步研究 p TB30 m作为TB的基因疫苗用于 TB的防治的效果 . 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 DNA疫苗 免疫原性 AG85B
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小鼠肺纤维化模型中基质金属蛋白酶-9及其抑制剂表达水平的变化 被引量：16
19
作者 李圣青 张艰 +2 位作者 黎志东 李焕章 戚好文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期723-726,共4页
目的 :研究小鼠博来霉素在肺纤维化模型中肺泡巨噬细胞(AM)分泌的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)的表达随着时间的变化 ,观察肺纤维化中MMP 9和TIMP 1的表达是否存在失衡。方法 :以博来霉素诱导建立小鼠肺... 目的 :研究小鼠博来霉素在肺纤维化模型中肺泡巨噬细胞(AM)分泌的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)的表达随着时间的变化 ,观察肺纤维化中MMP 9和TIMP 1的表达是否存在失衡。方法 :以博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化模型 ,采用HE染色观察肺部胶原沉积状况。选用抗CD6 8mAb ,采用微小免疫磁珠法分离纯化肺泡灌洗液中的AM ,用Hoechst 332 5 8染色AM ,在下光镜高倍视野计数法评估AM的纯度和活性 ,用EIA法检测AM上清液中MMP 9和TIMP 1的表达。结果 :肺组织切片HE染色显示小鼠肺部胶原沉积在 1、3、7、14、2 8d呈逐渐加重趋势。粗分离的AM纯度为 (82 .5± 2 .5 ) %。采用微小免疫磁珠法分离肺泡灌洗液中的AM纯度可达到 (99.3± 0 .7) % (P <0 .0 5 )。纯化后的细胞存活率为 (92 .5± 1.8) % ,与纯化前的 (92 .7± 2 .0 ) % ,相差不大 (P >0 .0 5 )。随着小鼠肺间质纤维化的进展 ,MMP 9的分泌量逐渐减少 ,而TIMP 1的表达量逐渐增加。结论 :在小鼠肺纤维化中AM分泌的MMP 9和TIMP 1之间存在失衡 。 展开更多
关键词 肺间质纤维化 肺泡巨噬细胞 免疫磁珠 MMP-9 TIMP-1
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HIV亚型分析基因芯片的制备及应用 被引量：14
20
作者 黎志东 徐志凯 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期164-166,共3页
目的　建立新的HIV亚型分析方法 ,并检测其特异性及敏感性。方法　HIV 111个亚型及HIV 2的env基因C2 V3区一段核苷酸序列 ,用芯片点样机点样于经预处理的玻片 ,制备成HIV亚型分析基因芯片 ,并用其对 15份HIV阳性样本进行亚型分析 ,所... 目的　建立新的HIV亚型分析方法 ,并检测其特异性及敏感性。方法　HIV 111个亚型及HIV 2的env基因C2 V3区一段核苷酸序列 ,用芯片点样机点样于经预处理的玻片 ,制备成HIV亚型分析基因芯片 ,并用其对 15份HIV阳性样本进行亚型分析 ,所得结果与目前常用HIV亚型分析方法 基因序列分析法所得结果进行比较。结果　制备的基因芯片对 15份HIV阳性样本检测结果为 :样本 0 1、0 2、0 3、0 5、0 8、0 9、11、12、13、15为HIV 1B亚型 ;0 6、0 7为HIV 1C亚型 ;0 4、10、14为HIV 1E亚型。结论　制备的基因芯片亚型分析结果与基因序列分析法所得结果完全符合 ,敏感性高、特异性好 ,并且具有操作简单、省时、价廉等特点 ,有望推广应用。 展开更多
关键词 HIV 基因芯片 制备 临床应用 特异性 敏感性 检测 亚型
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