产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及病毒滴度影响因素 被引量：5

1

作者 张惠中 范清宇 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第4期313-315,共3页

目的　探讨产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及其病毒滴度 (以 cfu表示 )的影响因素 .方法　用逆转录病毒载体 p SL XCMV,以磷酸钙共沉淀法转染 PA317包装细胞 ,挑选抗性集落 (PA317/ p SL XCMV)扩大培养后 ,进行 PA317/p SL XCMV细胞... 目的　探讨产生重组逆转录病毒包装细胞系建立及其病毒滴度 (以 cfu表示 )的影响因素 .方法　用逆转录病毒载体 p SL XCMV,以磷酸钙共沉淀法转染 PA317包装细胞 ,挑选抗性集落 (PA317/ p SL XCMV)扩大培养后 ,进行 PA317/p SL XCMV细胞接种密度、培养温度 (37℃ ,32℃ )、纯化方法等对其培养上清中重组病毒 cfu影响的比较性研究 .结果　包装细胞的密度是影响 cfu滴度的关键因素 ;降低培养温度需延长培养时间方可提高 cfu滴度 ;对比离心纯化与过滤纯化 ,并未发现两者之间的差异 .结论　该实验结果为应用逆转录病毒载体进行的 ex 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 包装细胞 集落形成单位 病毒滴度 基因治疗

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ShRNA抑制gankyrin基因在肝癌细胞中表达的研究 被引量：1

2

作者 杨诏旭 窦科峰 +1 位作者 路凡 卢兹凡 《中国医师杂志》 CAS 2005年第10期1297-1299,共3页

目的构建靶向癌基因gankyrin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2中对gankyrin基因表达的抑制作用。方法设计、合成三对针对gankyrin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pGenesil-1中,构建重组质粒pGenesil-1-Gankyr... 目的构建靶向癌基因gankyrin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2中对gankyrin基因表达的抑制作用。方法设计、合成三对针对gankyrin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pGenesil-1中,构建重组质粒pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3,稳定转染HepG2细胞,采用RT-PCR及W estern b lot检测对gankyrin表达的抑制效果。结果酶切分析和测序证实pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3构建成功;其中pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3对gankyrin的表达有明显的抑制作用。结论构建的pGenesil-1-Gankyrin重组质粒能有效抑制gankyrin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。 展开更多

关键词 Gankyrin RNA干涉 短发夹状RNA 肝细胞癌 肝癌细胞株HEPG2 N基因 表达的研究 SHRNA HepG2细胞 Western

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抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性 被引量：1

3

作者 程虹 刘彦仿 +2 位作者 张惠中 沈万安 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第24期2244-2248,共5页

目的　用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(sFv TNF α)的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv TNF α融合蛋白 ,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用 .方法　用感染性重组病毒产... 目的　用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(sFv TNF α)的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv TNF α融合蛋白 ,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用 .方法　用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA317/PST)产生的病毒上清转导人T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,采用PCR、RT PCR、细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法 ,对转导的Hut 78细胞进行DNA、mRNA及蛋白水平的分析 .转导的Hut 78细胞分别与SMMC 772 1、HHCC共培养 ,MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用 .结果　PCR、RT PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带 .neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号 ,其阳性率约为 95 % .鼠抗人TNF α多克隆抗体免疫组织化学染色 ,转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号 .MTT法检测结果 ,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为 15 .4 %和2 6 .5 % .结论　分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达 ,其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性 ,并且具有一定的体外杀伤作用 . 展开更多

关键词 肝细胞癌 基因表达 抗肝癌单链双功能抗体 Hut-78 细胞系 体外杀伤活性

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p16基因对前列腺癌细胞的体外作用研究 被引量：1

4

作者 邵晨 秦卫军 +2 位作者 金明 温伟红 邵国兴 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期347-348,共2页

目的　研究可控性表达的 p16基因对前列腺癌细胞的生长抑制作用。 方法　通过可诱导的真核表达载体 pMDNA 3 p16将外源野生型 p16基因转染至该基因表达功能丧失的人前列腺癌细胞PC3中 ,使用ZnSO4 作为诱导物 ,观察 p16基因的可控表达及... 目的　研究可控性表达的 p16基因对前列腺癌细胞的生长抑制作用。 方法　通过可诱导的真核表达载体 pMDNA 3 p16将外源野生型 p16基因转染至该基因表达功能丧失的人前列腺癌细胞PC3中 ,使用ZnSO4 作为诱导物 ,观察 p16基因的可控表达及其对前列腺癌细胞生物学特性的影响。结果　转染了野生型p16基因的人膀胱癌细胞PC3 pMDNA3 p16经ZnSO4 诱导后 ,开放了 p16基因的转录和翻译 ,p16蛋白得到高水平表达 ,细胞生长速度及集落形成率均有了部分抑制 ,细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。结论　p16基因与前列腺癌的发生、发展有关 ,为用p16基因进行前列腺癌的基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 P16基因 前列腺癌 体外作用 抑癌基因 基因治疗

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白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

5

作者 朱秀丽 吴军正 +1 位作者 温德升 吴元明 《临床口腔医学杂志》 2005年第1期5-7,共3页

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LI... 目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。 展开更多

关键词 白血病抑制因子受体 涎腺腺样囊性癌 肿瘤转移

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Gankyrin在肝癌细胞系中的表达

6

作者 杨诏旭 窦科峰 +1 位作者 路凡 赵忠良 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期3580-3582,共3页

目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblotting检测。结果Gankyrin基因在... 目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达,HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞,进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。 展开更多

关键词 肝癌细胞系 Gankyrin 逆转录聚合酶链反应 WESTERN blotting检测

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抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响 被引量：3

7

作者 杨诏旭 窦科峰 +2 位作者 路凡 卢兹凡 赵忠良 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第8期988-992,共5页

目的:探索通过RNA干涉技术抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖及细胞周期的影响.方法:建立稳定表达靶向gankyrin的shRNA的HepG2细胞系.通过Westernblotting验证基因表达的抑制效果.采用细胞计数及MTT法检测细胞的增殖能力.流式细... 目的:探索通过RNA干涉技术抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖及细胞周期的影响.方法:建立稳定表达靶向gankyrin的shRNA的HepG2细胞系.通过Westernblotting验证基因表达的抑制效果.采用细胞计数及MTT法检测细胞的增殖能力.流式细胞仪分析细胞周期.结果:抑制gankyrin基因的表达显著抑制了HepG2细胞的生长,与转染阴性对照shRNA质粒细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低(d6:24.4×103±5.2×103vs123.3×103±2.8×103,P<0.05),MTT分析显示细胞增殖率明显下降(144h:7.53±0.50vs16.30±0.38,P<0.05),流式细胞分析示细胞周期阻滞在G1期(G1:71.63±3.60%vs52.57±2.82%,P<0.05).结论:在HepG2细胞中抑制gankyrin的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞.利用RNA干涉技术抑制gankyrin的表达可能会成为一种有效的肝癌基因治疗手段. 展开更多

关键词 HEPG2增殖 gankyrin 表达 肝细胞癌 癌细胞

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变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段的纯化及葡聚糖结合功能实验 被引量：7

8

作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 卫克文 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第7期358-360,共3页

目的 :纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。 方法 :蛋白质技术 :金属螯合亲和层析 ,葡聚糖结合实验。结果 :通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析 ,纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α - 1,6键葡聚糖结合。结论 :通过基因重组... 目的 :纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。 方法 :蛋白质技术 :金属螯合亲和层析 ,葡聚糖结合实验。结果 :通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析 ,纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α - 1,6键葡聚糖结合。结论 :通过基因重组技术成功纯化出变形链球菌 展开更多

关键词 变形链球菌 gbpA 蛋白质纯化 葡聚糖结合 龋齿 疾病预防

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稳定转染NDRG2基因对人肝癌细胞HepG2的作用 被引量：6

9

作者 吴国强 李开宗 +2 位作者 窦科峰 药立波 刘新平 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2127-2130,共4页

目的观察NDRG2基因（N—myc downstream regulated gene2）对肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响。方法采用脂质体法将正义及反义NDRG2基因稳定转染HepG2及QZG细胞，采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学及Western blot法进... 目的观察NDRG2基因（N—myc downstream regulated gene2）对肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响。方法采用脂质体法将正义及反义NDRG2基因稳定转染HepG2及QZG细胞，采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学及Western blot法进行鉴定；比较观察其生物学特性的变化。结果NDRG2基因在NDRG2-HepG2细胞中得到了稳定表达；NDRG2-HepG2与HepG2细胞在细胞计数（1、2、3、4、5、6、7d分别为3×10^5／6×10^5、4×10^5／12×10^5、5×10^5／13×10^5、6．0×10^5／13．5×10^5、6．5×10^5／15．0×10^5、6．8×10^5／16．5×10^5、7×10^5／17×10^5）、细胞集落形成（32．4±4．7／56．5±5．6）及成瘤重量（0．0462g／0．2120g）差异有统计学意义（P〈0．05）；而Anti—QZG与QZG细胞的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NDRG2基因可抑制肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 NDRG2 转染

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bcr-abl融合基因特异性siRNA对K562细胞生物学特性的影响 被引量：3

10

作者 王莎 柴玉波 +7 位作者 刘飞 张孝勇 贾卫 谢鑫 于文强 尚振川 金伯泉 孙秉中 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期198-202,共5页

目的应用特异性siRNA(小干涉RNA)抑制慢性粒细胞白血病bcrabl融合基因表达,观察其对K562细胞生物学特性的影响。方法以慢性粒细胞白血病细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcrabl融合基因融合位点的21ntsiRNA,应用Westernblo... 目的应用特异性siRNA(小干涉RNA)抑制慢性粒细胞白血病bcrabl融合基因表达,观察其对K562细胞生物学特性的影响。方法以慢性粒细胞白血病细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcrabl融合基因融合位点的21ntsiRNA,应用Westernblot法检测bcrabl融合基因的表达;3HTdR掺入法检测K562细胞的增殖活性;AnnexinⅤFITC/PI染色法检测K562细胞的存活状况;流式细胞仪法检测K562细胞周期变化以及联苯胺染色法检测K562细胞的分化状况;应用Westernblot法检测凋亡相关蛋白BclxL/Bax的表达。结果(1)RNA干涉组K562细胞bcrabl融合基因的表达水平明显下降;(2)RNA干涉组的CPM值(每分钟脉冲数)在siRNA转染K562细胞第24h,48h,72h和96h均明显低于对照组(下降率依次为3306%,5225%,5764%,7087%),(3)RNA干涉组转染48h时有432%的K562细胞发生凋亡;(4)RNA干涉组K562细胞凋亡相关蛋白BclxL的表达水平下调,但Bax的表达无明显变化;(5)RNA干涉组K562细胞联苯胺染色阳性比例增加,部分K562细胞向红系分化;(6)RNA干涉组K562细胞出现明显的G1期阻滞。结论特异性siRNA分子可以显著抑制bcrabl融合基因的表达,影响K562细胞的基本生物学特性,最终导致K562细胞分化或凋亡。 展开更多

关键词 K562细胞 BCR-ABL融合基因 表达 特异性 Bcl-xL BLOT法 慢性粒细胞白血病 RNA干涉 小干涉RNA RNA分子

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NDRG2基因在原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中的表达研究 被引量：5

11

作者 吴国强 张健 +2 位作者 李开宗 窦科峰 刘新平 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2012年第3期266-270,共5页

目的探讨NDRG2基因在人原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法收集原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本,采用免疫组化ABC法、Western blot法及Real-time PCR法检测原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本中NDRG2蛋白和mRNA... 目的探讨NDRG2基因在人原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法收集原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本,采用免疫组化ABC法、Western blot法及Real-time PCR法检测原发性肝细胞肝癌及正常肝组织标本中NDRG2蛋白和mRNA的表达情况,并结合图像分析,比较两者表达的差异。结果 NDRG2蛋白在肝癌组织及正常肝组织中的表达阳性率分别为16.67%(5/30)和100%(30/30),2组差异有统计学意义(P<0.05),且阳性表达呈现在细胞质中,细胞核中未见有表达。图像分析结果显示,NDRG2蛋白在肝癌组织中表达的相对含量为0.029 0±0.005 9,在正常肝组织中为0.109 2±0.002 8,前者低于后者,其差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测结果与免疫组化染色结果相一致,在肝癌组织及正常肝组织中均检测到NDRG2蛋白,肝癌组织中NDRG2蛋白相对表达量为1.13±0.15,低于正常肝组织的1.57±0.18(P<0.05)。Real-time PCR分析结果显示肝癌组织中NDRG2 mRNA表达量为0.89±0.15,低于正常肝组织的1.48±0.17(P<0.05),但肝癌Edmondson-Steiner分级的各级肝癌组织之间NDRG2 mRNA表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NDRG2基因在原发性肝细胞肝癌及正常肝组织中可能存在差异性表达,提示该基因可能参与了肝细胞肝癌的发生和发展,但其具体作用及调控机理有待进一步研究。 展开更多

关键词 NDRG2基因 原发性肝细胞肝癌 免疫组化 蛋白印迹 实时定量PCR

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sFv-TNF-α基因修饰的PBMCs对人肝癌细胞系HHCC的体外杀伤活性研究

12

作者 程虹 刘彦仿 +3 位作者 张惠中 沈万安 杨安钢 马福成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第14期1272-1274,共3页

目的　观察分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因 (sFv TNF α)的重组逆转录病毒转导的PBMCs对体外培养人肝癌细胞 (HHCC)的杀伤作用。方法　用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA3 17 PST)产生的病毒上清转导人PBMCs ,采用PCR、RT PCR方法对转... 目的　观察分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因 (sFv TNF α)的重组逆转录病毒转导的PBMCs对体外培养人肝癌细胞 (HHCC)的杀伤作用。方法　用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA3 17 PST)产生的病毒上清转导人PBMCs ,采用PCR、RT PCR方法对转导的PBMCs进行DNA和mRNA水平的分析。转导的PBMCs(PBMCs PST)与HHCC共培养 ,MTT法检测PBMCs PST表达产物对肝癌细胞的体外杀伤活性。结果　PCR、RT PCR结果显示PBMCs PST中扩增出外源目的基因对应的电泳条带。MTT法检测结果 ,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养肝癌细胞HHCC的杀伤率为 ( 3 1.4± 4.1) %。结论　分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在PBMCs中整合并稳定表达 ,其分泌的表达产物对HHCC具有一定的体外杀伤作用。 展开更多

关键词 肝细胞癌 单链抗体 外周血单个核细胞 体外培养

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suc2基因的克隆及在酵母基因组中的定位突变 被引量：2

13

作者 孙强 王冀姝 +4 位作者 陈萍 柳天平 牛利国 韩骅 苏成芝 《第四军医大学学报》 2000年第12期1447-1450,共4页

目的　克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因 (suc2 ) ,并定位突变酵母基因组中的 suc2基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系 .方法　用 PCR法从酵母 Y190基因组中扩增出suc2的成熟肽基因片段 ,克隆后测序 .将色氨酸合成酶 (TRP)基因片段插入 ... 目的　克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因 (suc2 ) ,并定位突变酵母基因组中的 suc2基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系 .方法　用 PCR法从酵母 Y190基因组中扩增出suc2的成熟肽基因片段 ,克隆后测序 .将色氨酸合成酶 (TRP)基因片段插入 suc2基因中 ,构建成用于同源重组的 suc2基因定位突变载体 .导入酵母 Y190 ,用营养缺陷筛选出 suc2基因突变的克隆 .用 PCR扩增并克隆突变后的 suc2基因 ,用序列分析确定同源重组的发生 .结果　用 PCR从酵母基因组DNA中扩增出大小约 1.5 kb的 suc2基因片段 ,序列测定表明除 5 85位有一点突变 (AAC变为 AAT)外 ,所得 suc2基因与文献报道相同 ;构建的定位突变载体导入酵母细胞后 ,得到4株营养型符合的突变体 ;PCR表明这些突变体中均有 suc2基因的同源重组 ;取其中 1株的 PCR产物进行序列测定证实了同源重组的发生 .结论　克隆了正确的编码蔗糖转换酶成熟肽的 suc2基因片段 ;用同源重组方法在酵母 Y190的基因组中定位突变了 展开更多

关键词 蔗糖转换酶 同源重组 suc2基因 克隆 定位突变

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变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

14

作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 卫克文 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第4期197-200,共4页

目的 :克隆变形链球菌 gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段 ,并使其在大肠杆菌中获得表达。方法 :PCR技术克隆GBD片段及蛋白重组融合表达技术获得其在大肠杆菌中的表达。结果 :成功克隆变形链球菌 gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段 ,并在... 目的 :克隆变形链球菌 gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段 ,并使其在大肠杆菌中获得表达。方法 :PCR技术克隆GBD片段及蛋白重组融合表达技术获得其在大肠杆菌中的表达。结果 :成功克隆变形链球菌 gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段 ,并在大肠杆菌中得到表达。 结论 展开更多

关键词 变形链球菌 gbpA 葡聚糖结合区 大肠杆菌 分子克隆蛋白表达 龋病

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1

15

作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 陆群 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-12,共3页

目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化... 目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化SABC法检测其在COS_7细胞的表达。结果　pcDAN3 1 GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色 ,胞核无着色 ,pcDAN3 1空载体转染的细胞质及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论　质粒pcDAN3 1 GBD转染COS_7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于细胞质中 ,可与抗GbpA抗体特异性结合 ,具有抗原性 。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白A GbpA 真核表达 质粒 哺乳动物 基因表达

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远源链球菌可能与细胞分裂相关的新基因ftsK的克隆与序列分析

16

作者 苏凌云 吴补领 +2 位作者 李福洋 张文红 范继红 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期379-382,共4页

目的　克隆并分析远源链球菌(S .sobrinus)可能与细胞分裂相关的新基因ftsK。方法采用“genomewalkingsystem(基因组步移系统)”克隆远源链球菌可能与细胞分裂相关的新基因ftsK ,与GenBank进行同源性分析,并用蛋白质分析软件分析ftsK的... 目的　克隆并分析远源链球菌(S .sobrinus)可能与细胞分裂相关的新基因ftsK。方法采用“genomewalkingsystem(基因组步移系统)”克隆远源链球菌可能与细胞分裂相关的新基因ftsK ,与GenBank进行同源性分析,并用蛋白质分析软件分析ftsK的氨基酸序列。结果　所克隆的新基因由2 10 0个碱基组成,编码6 99个氨基酸。用GOR4软件对S .sobrinusftsK的二级结构预测,显示其主要由α螺旋和无规卷曲组成,另有小部分伸展线,但无β折叠,在其N末端有一跨膜区。对氨基酸序列进行保守区分析,氨基酸335～5 30序列具有ftsK SpoⅢE保守序列,同源性分析,除N末端2 2 6个氨基酸外,其余氨基酸序列与大肠杆菌细胞分裂蛋白FtsK的C末端2 3序列同源,2 17～6 35氨基酸与枯草杆菌SpoⅢE的C末端同源。结论　通过“基因组步移系统”克隆出的新基因可能与远源链球菌细胞分裂蛋白FtsK相关。 展开更多

关键词 远源链球菌 细胞分裂 ftsK基因 克隆 序列分析

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