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卵清白蛋白特异性T辅助细胞1/T辅助细胞2细胞系的建立 被引量：3
1
作者 修清玉 王桂芳 +3 位作者 杨丹榕 施柯 黎怀星 孙树汉 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1000-1003,共4页
目的体外建立可长期培养的抗原特异性的T辅助细胞(Th)1/Th2克隆及细胞系,并分析其对抗原的反应情况及其产生细胞因子的情况。方法采用卵清白蛋白(OVA)免疫BALB/c小鼠,取淋巴结细胞在体外用同系脾细胞和OVA反复刺激,然后分别用白介素(IL... 目的体外建立可长期培养的抗原特异性的T辅助细胞(Th)1/Th2克隆及细胞系,并分析其对抗原的反应情况及其产生细胞因子的情况。方法采用卵清白蛋白(OVA)免疫BALB/c小鼠,取淋巴结细胞在体外用同系脾细胞和OVA反复刺激,然后分别用白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)及IL-2I、L-4共同培养,并同时加入同系脾细胞和OVA,进行Th1和Th2克隆的诱导,然后通过有限稀释法进行克隆化培养。对克隆化的细胞用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞仪分别检测其分泌细胞因子的情况及细胞的表面标志。结果各获得2株Th1/Th2细胞系,它们分泌的细胞因子分别为IL-2、IFN-γ和IL-4I、L-5I、L-10等。结论成功建立抗原特异性Th1/Th2细胞系。 展开更多
关键词 Th1/Th2细胞系 克隆化培养 卵蛋白
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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应 被引量：32
2
作者 吴丹 郭瀛军 +1 位作者 林懿 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期508-510,共3页
目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水... 目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 免疫保护 保护性抗原CC1-cDNA
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核酸疫苗及其在疾病免疫防治中的应用 被引量：15
3
作者 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期519-521,共3页
自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病... 自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病以及肿瘤等预防和治疗的研究。本文就核酸疫苗的免疫机制、优越性、安全性 ,以及目前的研究进展状况作一综述。 展开更多
关键词 核酸类疫苗 免疫机制 免疫疗法
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DNA疫苗海藻酸钠微球的制备及体外释药 被引量：13
4
作者 刘善奎 高申 +2 位作者 钟延强 张洪英 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期58-60,共3页
目的 :研制 DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以海藻酸钠为载体 ,采用 W/ O乳化 -离子交联法制备 DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及影响因素。 结果 :... 目的 :研制 DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以海藻酸钠为载体 ,采用 W/ O乳化 -离子交联法制备 DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及影响因素。 结果 :微球球形圆整 ,分散性好 ,平均粒径为 (1 2 .0 3± 6 .9) μm,载药量可达 5 % ,包封率为 5 6 .0 % ;微球的体外释放速率与载药量呈正相关 ,与壳聚糖的交联固化度呈负相关。结论 :海藻酸钠可以作为 DNA疫苗微球的可生物降解辅料 ;乳化离子交联法的制备工艺简便 ,有利于 DNA疫苗结构和功能的稳定性 ;海藻酸钠微球是 展开更多
关键词 DNA疫苗 海藻酸钠 微球 制备 体外释药
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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答 被引量：15
5
作者 吴丹 王庆敏 +3 位作者 陈蕊雯 朱维佳 陈祖欢 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期34-36,共3页
目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。 方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。 方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。 结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 抗原 cC1 DNA疫苗 蛋白质疫苗 小鼠 免疫应答
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肿瘤坏死因子α的单核苷酸多态性与中国汉族人强直性脊柱炎的关联分析 被引量：16
6
作者 陈蕊雯 段世伟 +7 位作者 蔡青 杨波 林懿 陈琦 冯国鄞 韩星海 贺林 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期120-124,共5页
目的 :在中国汉族强直性脊柱炎 (AS)患者中 ,检测 TNF- α基因中的单核苷酸多态性 (SNPs)。 方法 :在 1 0 7例 AS患者和 1 1 6名正常对照中 ,用直接测序法和实时动态荧光 PCR结合等位基因特异扩增 ,对 TNF- α基因中的 3个启动子上的 SN... 目的 :在中国汉族强直性脊柱炎 (AS)患者中 ,检测 TNF- α基因中的单核苷酸多态性 (SNPs)。 方法 :在 1 0 7例 AS患者和 1 1 6名正常对照中 ,用直接测序法和实时动态荧光 PCR结合等位基因特异扩增 ,对 TNF- α基因中的 3个启动子上的 SNPs(- 1 0 31 T/ C,- 86 3C/ A,- 85 7C/ T)和 2个内含子上的 SNPs(内含子 1的 +1 2 3C/ T和内含子 3的 +5 1 A/ G)进行基因分型 ,分析单个位点的等位基因和基因型频率是否与 AS相关。用单倍型推测软件计算上述位点单倍体型频率的分布 ,分析这些单倍体型是否与 AS的发病有关。 结果 :在 AS患者中 ,TNF- α的 - 85 7T和 - 86 3A的等位基因频率及它们的基因型频率显著性地超过健康对照组 ,经 Bonferroni校正后仍为阳性。对启动子上 3个 SNPs位点的两两和 3个位点组合的单倍体型频率分析表明 ,其在 AS患者和对照组中也均存在极其显著的差异 (P<0 .0 1 )。在 3个位点推测的单倍体型中 ,AS患者增加最显著的是TNF- 1 0 31 T/- 86 3C/- 857T单倍体型。 结论 :TNF-α基因上 2个 SNPs及单倍体型与中国汉族 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 单核苷酸多态性 中国 汉族人 强直性脊柱炎 基因 单倍体型
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猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究 被引量：11
7
作者 王庆敏 陈蕊雯 +1 位作者 郭瀛军 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期504-507,共4页
目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。 方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,... 目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。 方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,体外培养小鼠脾细胞 ,用刀豆蛋白 A (Con A)和特异性抗原刺激 ,EL ISA试剂盒检测细胞因子 IL - 2和 IL - 4的水平 ,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外 ,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪 ,进行攻击实验 ,计算相对保护率。结果 :注射疫苗后的第 3周起 ,Ig G即为阳性 ,持续升高至第 8周 ;从第 2周起 ,小鼠血清 Ig G2 a为阳性 ,第 4周达到高峰。细胞因子检测表明 ,IL- 2水平远远高于空载体对照组 ,而 IL- 4含量却与空载体对照组无显著差异 ;实验组刺激指数明显高于空载体对照组。副肌球蛋白核酸疫苗对仔猪的相对保护率为 80 %。 结论 :猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗在小鼠动物实验中引发了以 Th1型免疫应答占优势的全面免疫应答。pc DNA3- Ag B核酸疫苗对仔猪具有较好的免疫保护性。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 副肌球蛋白 核酸类 疫苗 TH1免疫应答
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新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究 被引量：10
8
作者 魏林 戴建新 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期515-518,共4页
目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模... 目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模型 ,检测其抗肿瘤作用。结果 :成功地克隆了 NDV HN c DNA,所构建的 pc DNA3- HN有良好的表达 ,动物实验显示 ,pc DNA3- HN有增强荷瘤小鼠 CTL ,NK杀伤活性的作用。结论 :NDV HN的真核表达质粒具有增强荷瘤小鼠抗肿瘤CTL ,NK细胞反应的作用。 展开更多
关键词 新城疫病毒 抗肿瘤作用 HN基因 真核表达质粒
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Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白 被引量：8
9
作者 张毅 郭瀛军 +3 位作者 王芳 高远舰 颜宏利 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期333-334,共2页
目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。 方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC... 目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。 方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。 结果 :FITC标记的AnnexinB1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合 ,使凋亡细胞呈阳性着色 ,能有效检测细胞凋亡。 结论 :开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白AnnexinB1,为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 AnnexinB1 细胞凋亡 检测用蛋白
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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用 被引量：10
10
作者 吴丹 郭瀛军 +1 位作者 王庆敏 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1192-1194,共3页
目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 基因克隆 囊尾蚴 DNA疫苗 佐剂作用
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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量：11
11
作者 杨湘越 孙树汉 +2 位作者 陈蕊雯 郭瀛军 颜宏利 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期31-33,67,共4页
目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论　在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。 展开更多
关键词 cC1cDNA 克隆表达 巴斯德毕赤酵母 囊虫病 猪囊尾蚴
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肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎的易感性和临床表现型的影响 被引量：11
12
作者 杨波 陈蕊雯 +4 位作者 段世伟 韩星海 蔡青 林懿 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期125-128,共4页
目的 :探讨 TNF- α基因启动子 - 2 38和 - 30 8位点多态性对强直性脊柱炎 (AS)易感性和临床表现型的影响。方法 :采用 DNA直接测序法 ,对 1 0 8例 AS患者和 1 0 0名正常对照者 TNF- α- 2 38和 - 30 8位点进行基因分型 ,并分析基因型... 目的 :探讨 TNF- α基因启动子 - 2 38和 - 30 8位点多态性对强直性脊柱炎 (AS)易感性和临床表现型的影响。方法 :采用 DNA直接测序法 ,对 1 0 8例 AS患者和 1 0 0名正常对照者 TNF- α- 2 38和 - 30 8位点进行基因分型 ,并分析基因型与疾病临床表现之间的关系。结果 :AS组 TNF-α - 2 38G/ G基因型有 1 0 6例 (98.1 % ) ,- 2 38G/ A基因型有 2例 (1 .9% ) ,正常对照组两种基因型分别有 95例 (95 .0 % )和 5例 (5 .0 % ) ,两组间比较无显著性差异 ;AS组 TNF-α - 30 8.1 .1 (G/ G)基因型有 89例 (82 .4 % ) ,- 30 8.1 .2 (G/ A)基因型有 1 9例 (1 7.6 % ) ,正常对照组中 - 30 8.1 .1 (G/ G)有 85例 (85 .0 % ) ,- 30 8.1 .2 (G/ A)有 1 4例 (1 4 .0 % ) ,- 30 8.2 .2 (A/ A)有 1例 (1 .0 % ) ,两组比较亦无显著性差异。 AS患者根据 X线判定的疾病严重程度在TNF-α - 30 8位点 G/ G、G/ A基因型之间有显著的不同 ,- 30 8.1 .2 (G/ A)基因型发病较轻 (P<0 .0 5 )。 结论 :在所研究的人群中未发现 TNF-α基因启动子 - 2 38和 - 30 8位点多态性与 AS的易感性相关 ,但 TNF-α基因启动子 - 30 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 基因多态性 强直性脊柱炎 临床表现型 疾病易感性
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口蹄疫DNA疫苗海藻酸钠微球的制备及体外释放的研究 被引量：6
13
作者 刘善奎 钟延强 +2 位作者 王芳 孙树汉 高申 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2004年第2期107-110,共4页
目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥 离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其... 目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥 离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其影响因素。 结果 :微球球形圆整 ,分散性好 ,平均粒径为 11.9μm ,载药量为 5 % ,产率为 5 3.2 %。微球的体外释放速率受载药量影响较小 ,而壳聚糖的交联固化度增高 ,微球的体外释放速率变慢。 结论 :以生物降解材料海藻酸钠、壳聚糖 ,用喷雾干燥法制备DNA疫苗微球 ,不需要超声和有机溶剂 ,因而有利于DNA疫苗结构和功能的稳定性 ;工艺简便 ,易于工业化生产。 展开更多
关键词 口蹄疫 DNA疫苗 海藻酸钠 微球 喷雾干燥 体外释药
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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用 被引量：7
14
作者 孙树汉 郭瀛军 +1 位作者 陈蕊雯 杨桦 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1090-1091,I002,共3页
目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。 结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象 。 展开更多
关键词 核酸疫苗 囊尾蚴 细胞凋亡 pcDNA3-γcC1
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高密度培养大肠杆菌生产重组钩端螺旋体DNA疫苗 被引量：5
15
作者 林懿 陈祖欢 +1 位作者 郭瀛军 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期828-829,共2页
目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。 方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒... 目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。 方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒拷贝数。 结果 :重组菌 E.coli DH5α/ pc DNA 3- fla B发酵液光密度 (D6 0 0 )达到 4 5。经纯化后最终质粒 DNA得率为 5 0 m g/ L。质粒没有发生丢失现象。 结论 :本实验为钩端螺旋体 DNA疫苗的大规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 DNA疫苗 大肠杆菌
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一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白——Annexin32对血凝及血栓形成的影响 被引量：11
16
作者 张毅 陈蕊雯 孙树汉 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2002年第2期172-176,共5页
通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成... 通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成和大鼠体内血栓形成的变化.结果显示,按1mg/kg静脉注射Annexin32后,KPTT明显延长（P<0.01）,但小于肝素延长幅度,体外血栓形成仪测定显示血栓长度、重量均明显减少（P<0.01）,大鼠体内血栓重量明显降低（P<0.01）,提示Annexin32具有抗血栓形成的功能,并有对凝血系统影响小的特征. 展开更多
关键词 钙依赖性磷脂结合蛋白 Annexin32 血凝时间 血栓形成 药效学 生理功能 凝血指标 溶栓药物
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结核杆菌保护性抗原-遍在蛋白质系统的建立 被引量：10
17
作者 王庆敏 胡振林 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期61-63,共3页
目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过... 目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过柔性接头将遍在蛋白质与 4种抗原的基因分别融合在一起 ,并插入到 p VAX质粒中。结果 :扩增出来的 4种抗原基因大小分别约为 0 .3、0 .7、1.0、1.6 5 kb,遍在蛋白质 PCR产物约为 0 .2 kb,均与 Gen Bank中登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果显示融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序显示抗原基因和遍在蛋白质基因均为所需基因 ,柔性接头序列也完全正确。 结论 :成功地构建了中国株结核杆菌的 4种保护性抗原基因 -遍在蛋白质融合系统 。 展开更多
关键词 结核杆菌 遍在蛋白质 DNA疫苗 结核病
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应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白 被引量：8
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作者 胡振林 孙树汉 +1 位作者 戴建新 周凤娟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期542-545,T002,共5页
目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。 方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性... 目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。 方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。 结论 :HBs Ab可与 展开更多
关键词 CpG免疫激活序列 酶母单杂交系统 免疫球蛋白 特异性结合蛋白
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SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫 被引量：3
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作者 黄力 郭瀛军 +4 位作者 张术 王开宇 陈祖欢 朱维佳 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期710-712,共3页
目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免... 目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。 结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。 结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。 展开更多
关键词 SARS 冠状病毒M基因片段 克隆 DNA疫苗 体液免疫 严重急性呼吸综合征
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中国人HNPCC家系中hMSH2基因新突变及其功能分析 被引量：6
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作者 金黑鹰 颜宏利 +3 位作者 宋立华 崔龙 丁义江 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期888-891,共4页
目的:报道1个在中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中发现的基因突变,并对其功能进行分析。方法:抽提1组符合Amsterdam标准的HNPCC家系先证者和其他家系成员的基因组DNA,PCR扩增先证者hMLH119个外显子和hMSH216个外显子,利用变... 目的:报道1个在中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中发现的基因突变,并对其功能进行分析。方法:抽提1组符合Amsterdam标准的HNPCC家系先证者和其他家系成员的基因组DNA,PCR扩增先证者hMLH119个外显子和hMSH216个外显子,利用变性高效液相技术(dHPLC)筛查,对异常峰型利用DNA测序方法检测基因突变。发现先证者hMSH2基因存在错义突变后,对家系中其他成员和50名散发性大肠癌患者和100名正常成年人进行相同位点的检测,以判定是单核苷酸多态性位点(SNP)还是突变。利用5对微卫星标记对该家系中的2例肿瘤进行微卫星不稳定分析,免疫组化检测蛋白表达,利用同源建模方法对发现的突变位点进行功能分析,以研究突变的病理意义。结果:在该家系的2例结肠癌患者中均发现hMSH2基因第13外显子2108位出现CA的错义突变,导致703位Ser变异为Tyr,即C.2108C>A(p.Ser703Tyr),微卫星结果显示2例肿瘤均为微卫星高度不稳定(MSIH),肿瘤免疫组化结果显示hMSH1基因表达正常而hMSH2基因不表达。同源建模发现该位点与目前报道的hMSH2基因突变不同,突变位于第Ⅳ结构域,Ser突变为Tyr后空间位阻增大,影响了蛋白的正常折叠和功能。结论:Ser703Tyr是中国人HNPCC的一个新的病理性突变。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 遗传性非息内性 HMSH2 突变
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