期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到77篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性的影响 被引量：3
1
作者 李恩书 彭新荣 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第1期96-100,共5页
在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更... 在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更新能力和全能性的影响。结合使用极限稀释法培养KES细胞单克隆,统计不同培养体系下单克隆的形成率。结果显示:无血清条件下,单独使用LIF,不能维持小鼠胚胎干细胞的自我更新能力和全能性;使用含有3种小分子药物SU5402,PD184352和CHIR99021(3i)的无血清培养液可以维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,传代60代以上仍可保持全能性;添加LIF的3i培养系统显著提高了小鼠胚胎干细胞的单克隆形成率。表明在无血清条件下,LIF不能单独维持小鼠胚胎干细胞的多能性。3i培养体系可以维持胚胎干细胞的全能性而不需要LIF;3i条件下,LIF可以显著促进胚胎干细胞体外增殖和单克隆形成。 展开更多
关键词 无血清培养 小分子药物 LIF 胚胎干细胞
下载PDF
红色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系建立及体内成瘤的初步研究
2
作者 赵无恙 刘韬 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2015年第2期244-248,共5页
建立能够稳定表达红色荧光的小鼠胚胎干细胞系,并研究其在体内不同部位形成畸胎瘤的能力。构建含红色荧光蛋白(DsRed-Express)的表达质粒,并采用磷酸钙法包装成慢病毒转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)。筛选得到强阳性克隆,对其进行RT-PCR检... 建立能够稳定表达红色荧光的小鼠胚胎干细胞系,并研究其在体内不同部位形成畸胎瘤的能力。构建含红色荧光蛋白(DsRed-Express)的表达质粒,并采用磷酸钙法包装成慢病毒转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)。筛选得到强阳性克隆,对其进行RT-PCR检测和裸鼠、C57小鼠体内成瘤实验验证细胞特性,最后获得稳定表达红色荧光的胚胎干细胞(Red-ESCs)。Red-ESCs能够表达多能性基因,如Oct4,Sox2,Nanog等,也能在裸鼠体内成瘤。不同部位的畸胎瘤在基因表达上有差异,其中肝部形成的畸胎瘤表达肝特性基因。成功建立稳定表达红色荧光的小鼠胚胎干细胞系,其在体内形成的畸胎瘤性质受到体内环境的影响。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 红色荧光蛋白 畸胎瘤 肝特异性基因
下载PDF
腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究 被引量：16
3
作者 郭明高 姜明红 +5 位作者 杨琴 李月敏 崔贞福 李林芳 吴孟超 钱其军 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第14期1147-1151,共5页
目的　探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用。方法构建携带曲妥珠单抗 [Trastuzumab ,商品名 :赫赛汀 (Herceptin) ]全抗体基因的腺病毒载体 ,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad SG Her ,用Ad SG Her转染... 目的　探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用。方法构建携带曲妥珠单抗 [Trastuzumab ,商品名 :赫赛汀 (Herceptin) ]全抗体基因的腺病毒载体 ,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad SG Her ,用Ad SG Her转染人正常肝细胞株L 0 2 ,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体 ;将卵巢癌SK OV 3细胞接种于裸鼠皮下 ,3d后把 4 0只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和 1个对照组 ,每组各 10只。治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad SG Her :治疗A组注射 2× 10 9空斑形成单位 ( pfu) /只 ,B组注射 1× 10 9pfu/只 ,C组注射 5× 10 8pfu/只。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别在体外转染Ad SG Her后的第 3天和第 7天 ,以及裸鼠接受Ad SG Her治疗后的第 3、7、10、14、2 1、2 8、35天检测Herceptin的表达量 ;通过间接免疫荧光法 (IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK OV 3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性 ;同时观察不同滴度的Ad SG Her对荷SK OV 3实体瘤裸鼠的治疗作用。结果　构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad SG Her ,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin。Western印迹显示 展开更多
关键词 腺病毒 介导作用 全抗体基因 基因治疗 卵巢癌 肿瘤 HERCEPTIN 赫赛汀
原文传递
术后肝功能指标对肝内胆管癌根治性切除患者预后的影响 被引量：11
4
作者 余漪 周福平 +3 位作者 郭玲玲 操跃 张迁 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期627-633,共7页
目的探讨影响肝内胆管癌术后患者生存的危险因素。方法回顾性分析本院2009年3月至2014年3月收治的行根治性切除术的肝内胆管癌患者的临床资料,选择32种临床和实验室诊断检测相关指标,分析影响肝内胆管癌根治性切除患者术后生存危险因素... 目的探讨影响肝内胆管癌术后患者生存的危险因素。方法回顾性分析本院2009年3月至2014年3月收治的行根治性切除术的肝内胆管癌患者的临床资料,选择32种临床和实验室诊断检测相关指标,分析影响肝内胆管癌根治性切除患者术后生存危险因素,采用单因素、多因素Cox模型分析影响肝内胆管癌患者术后生存的危险因素。结果最终入选患者189例,多因素分析表明,肿瘤数目、肿瘤大小、淋巴结转移情况、术前CA19-9水平、术前γ-谷氨酰转移酶、术后第1天血总胆红素及术后第5天血丙氨酸转氨酶是肝内胆管癌根治性切除患者术后生存的独立危险因素(P<0.05)。结论术后第1天总胆红素及术后第5天丙氨酸转氨酶水平对肝内胆管癌根治性切除患者预后有指示作用;术前、术后积极保肝治疗,改善营养状况,术中尽量减少对肝脏的创伤,均有利于改善预后。 展开更多
关键词 胆管肿瘤 肝内胆管癌 根治性切除 预后 胆红素 丙氨酸转氨酶
下载PDF
靶向黏蛋白1嵌合抗原受体修饰的Jurkat T细胞特异杀伤肝癌细胞 被引量：10
5
作者 马宜冬 王真 +4 位作者 巩睿智 李林芳 吴红平 金华君 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1177-1182,共6页
目的探讨靶向黏蛋白1(mucin 1,MUC1)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞株(CAR-T)对MUC1高表达肝癌细胞的特异杀伤能力。方法分别构建第1代与第3代靶向MUC1的CAR基因表达框(MUC1-CAR与G3MUC1-CAR),并将其装入慢... 目的探讨靶向黏蛋白1(mucin 1,MUC1)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞株(CAR-T)对MUC1高表达肝癌细胞的特异杀伤能力。方法分别构建第1代与第3代靶向MUC1的CAR基因表达框(MUC1-CAR与G3MUC1-CAR),并将其装入慢病毒载体,利用获得的重组慢病毒感染Jurkat细胞,通过CCK-8法、ELISA法、乳酸脱氢酶释放实验,分别检测在MUC1抗原存在条件下,CAR-T细胞的增殖、IL-2分泌量、杀伤作用。结果成功构建2种靶向MUC1嵌合抗原受体表达框的重组慢病毒Jurkat CAR-T细胞株。两种Jurkat CAR-T细胞均能特异识别MUC1分子,杀伤MUC1高表达的肝癌细胞QGY-7701,而对MUC1低表达的正常肝细胞基本不杀伤;第3代CAR修饰的Jurkat T细胞接触MUC1分子后,其增殖速度、IL-2分泌量和杀伤效率均优于第1代MUC1修饰细胞(P<0.05或P<0.01)。结论靶向MUC1的Jurkat CAR-T细胞能特异杀伤MUC1高表达的肝癌细胞。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体 黏蛋白1 JURKAT细胞 肝细胞癌
下载PDF
晚期非小细胞肺癌患者DC-CIK治疗前的免疫状态与预后的关系 被引量：9
6
作者 蒋琦 徐增辉 +3 位作者 王颖 孙保木 金华君 钱其军 《实用肿瘤杂志》 CAS 2015年第2期122-126,共5页
目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cellcytokine induced killers,DC-CIK)治疗前外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(regulatory T cells,TRegs)、CD3+CD56+细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto... 目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cellcytokine induced killers,DC-CIK)治疗前外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(regulatory T cells,TRegs)、CD3+CD56+细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIKs)、CD4+/CD8+T细胞比值与预后的关系。方法采用流式细胞仪技术检测45例晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+和CD8+T细胞,并与患者临床特征进行相关分析;采用Cox回归模型分析治疗前CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+/CD8+T细胞比值对患者预后的影响。结果晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后比较,治疗后患者外周血CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+T细胞比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);原发病灶瘤体最长直径越大,患者治疗前外周血TRegs越多,CIKs越少(均P<0.05);生存分析显示,治疗前TRegs越多,患者预后越差,生存期越短,且TRegs>7×109/L影响患者的生存(P<0.05)。结论晚期NSCLC患者外周血TRegs是判断预后的独立预测指标。 展开更多
关键词 癌 非小细胞肺/治疗 免疫疗法/方法 树突细胞/免疫学 杀伤细胞 淋巴因子激活/免疫学 T淋巴细胞 调节性 治疗结果 预后
下载PDF
肿瘤靶向治疗的现状和展望 被引量：7
7
作者 钱其军 张琪 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第4期239-242,共4页
关键词 肿瘤 靶向治疗 基因治疗 病毒治疗 抗体治疗 信号转导
下载PDF
E2F转录因子与肿瘤基因治疗 被引量：4
8
作者 刘辰 钱其军 吴孟超 《国外医学（肿瘤学分册）》 2004年第7期499-502,共4页
E2F转录因子与细胞增殖、凋亡及癌变密切相关。各种与E2F转录因子相关的肿瘤基因治疗已在动物实验中取得良好效果。早期基因 1A区的 2保守区 (E1A CR2 )缺失和携带E2F1启动子的增殖型腺病毒载体 ,可选择性在多种肿瘤细胞中增殖 ,其增殖... E2F转录因子与细胞增殖、凋亡及癌变密切相关。各种与E2F转录因子相关的肿瘤基因治疗已在动物实验中取得良好效果。早期基因 1A区的 2保守区 (E1A CR2 )缺失和携带E2F1启动子的增殖型腺病毒载体 ,可选择性在多种肿瘤细胞中增殖 ,其增殖能力甚至超过了野生腺病毒 ,是非常有潜力的肿瘤基因治疗手段。现对E2F转录因子在细胞周期调控、凋亡、肿瘤发生及相关肿瘤基因治疗等方面的研究作一综述。 展开更多
关键词 转录因子 基因疗法 肿瘤 腺病毒载体
下载PDF
腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长 被引量：4
9
作者 张敬磊 金华君 +5 位作者 刘辉 吕赛群 杨远 傅思源 钱其军 周伟平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期267-271,共5页
目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表... 目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。 展开更多
关键词 miRNA-99a 5型腺病毒 肝细胞癌 靶向基因治疗
下载PDF
携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的腺病毒载体的构建及体外抗肿瘤活性的研究 被引量：3
10
作者 刘永靖 徐志飞 +5 位作者 苏长青 薛惠斌 崔贞福 李林芳 钱炎珍 钱其军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1452-1455,共4页
目的　构建携带人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)基因的腺病毒载体 ,评价TRAIL对人肺癌、肝癌细胞的基因治疗功效。方法　构建携带人TRAIL基因的腺病毒Ad hTRAIL ,感染人肺癌细胞株H 460、A5 49,人肝癌细胞株Hep3B、HepGII以... 目的　构建携带人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)基因的腺病毒载体 ,评价TRAIL对人肺癌、肝癌细胞的基因治疗功效。方法　构建携带人TRAIL基因的腺病毒Ad hTRAIL ,感染人肺癌细胞株H 460、A5 49,人肝癌细胞株Hep3B、HepGII以及人正常肝细胞株WRL 68,人正常成纤维细胞株MRC 5 ,通过酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测hTRAIL的表达 ,并进行四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能。结果　成功构建携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒载体Ad hTRAIL ,感染H 460、A5 49、Hep3B、HepGII、WRL 68细胞 ,72h后上清中TRAIL表达量分别为 3 2 .75、2 4.5 3、3 4.0 2、3 2 .89、17.0 8μg/L。在MOI =1时 ,Ad hTRAIL即可引起肿瘤细胞明显凋亡 ,而在MOI =10 0时对正常细胞WRL 68、MRC 5也没有明显杀伤作用。结论　腺病毒载体携带人TRAIL基因在肿瘤基因治疗方面有非常广阔的应用前景。 展开更多
关键词 携带 腺病毒载体 TRAIL基因 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 体外抗肿瘤活性 正常细胞 感染 表达量 细胞 构建
原文传递
人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率 被引量：4
11
作者 洪敬欣 张茜真 +3 位作者 韩俊领 刘辉 刘剑 邱录贵 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期42-47,共6页
背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质... 背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。 展开更多
关键词 培养体系 腺病毒 感染效率 脐带间充质干细胞 干细胞
下载PDF
TIL肿瘤过继细胞治疗研究进展 被引量：4
12
作者 陈晚华 刘辉 +1 位作者 汪毕 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期668-672,共5页
肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是从肿瘤组织中分离出的CD4+、CD8+T细胞,在体外经白介素2(interleukin-2,IL-2)的刺激、活化、扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)。为避免IL-2在... 肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是从肿瘤组织中分离出的CD4+、CD8+T细胞,在体外经白介素2(interleukin-2,IL-2)的刺激、活化、扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)。为避免IL-2在扩增中的大量使用使得TIL中CD4+CD25+Treg数量增加所产生的免疫耐受现象,现在研究集中于改进TIL的体外扩增方法;研究显示,"年轻"型TIL(young TIL)靶向肿瘤的特异性更高,故其是潜在的扩增对象。临床使用TIL过继治疗前需对肿瘤患者进行全身放疗处理;TIL过继治疗联合化疗药物(如环磷酰胺,氟达拉滨等)对自体淋巴清除(lymphodepletion)的肿瘤患者疗效显著,将成为以后肿瘤免疫治疗的主要方向;除化疗药物外,还可开发肿瘤疫苗、单克隆抗体等联合TIL过继治疗。本文主要介绍TIL培养体系、功能改进的研究以及TIL过继治疗联合化疗药物在临床恶性肿瘤治疗中的应用,讨论其可能存在的问题并展望未来的发展方向。 展开更多
关键词 TIL 体外扩增 过继治疗 化学免疫治疗
下载PDF
含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定 被引量：2
13
作者 徐学武 俞卫锋 +3 位作者 王星华 李泉 董刚 吴飞翔 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第4期6-8,共3页
目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细... 目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度。结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatII及NotI酶切结果正确。PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×1010PFUml。病毒感染细胞后第3d,细胞培养液内有高浓度的β-内啡呔。结论:成功构建了含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒,为进行下游相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-内啡呔 腺病毒 腺相关病毒 杂合病毒 构建 鉴定
下载PDF
携带人白细胞介素10和肝细胞生长因子双基因的重组腺病毒载体构建与鉴定 被引量：2
14
作者 邱红 朱月蓉 +4 位作者 邢继成 江淑芳 苏长青 曹祥荣 方琳 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期42-45,60,共5页
目的:构建携带人白细胞介素10(hIL-10)和人肝细胞生长因子(hHGF)双基因的重组腺病毒载体。方法:分别以pDC316-hIL10-EGFP和pCDNA3-hHGF重组质粒为模板,PCR扩增获得hIL-10和hHGF基因片段,与pIRES连接成为hIL10-IRES-hHGF,测序正确后酶切,... 目的:构建携带人白细胞介素10(hIL-10)和人肝细胞生长因子(hHGF)双基因的重组腺病毒载体。方法:分别以pDC316-hIL10-EGFP和pCDNA3-hHGF重组质粒为模板,PCR扩增获得hIL-10和hHGF基因片段,与pIRES连接成为hIL10-IRES-hHGF,测序正确后酶切,与pDC315连接,获得穿梭质粒pDC315-hIL10-IRES-hHGF,与腺病毒包装系统转染293细胞,包装产生重组腺病毒hIL10-hHGF,PCR鉴定后,扩增病毒,并测定病毒滴度。用重组腺病毒转染BEL-7402和WRL-68细胞,ELISA法检测上清液中hIL-10和hHGF的含量。结果:成功构建了重组腺病毒hIL10-hHGF,扩增纯化后测得重组腺病毒滴度为1×109pfu/ml,转染BEL-7402和WRL-68细胞72 h后,表达hIL-10的量分别为(6 271.7±5.2)pg/ml和(350.6±12.4)pg/ml,表达hHGF的量分别为(20 827.1±345.5)pg/ml和(201.6±10.1)pg/ml。结论:本实验为进一步研究Ad-hIL10-hHGF在动物体内抗肝炎、肝纤维化作用奠定了基础。 展开更多
关键词 白细胞介素10 肝细胞生长因子 腺病毒载体
下载PDF
化疗对CD133＋结肠癌细胞的作用效果 被引量：4
15
作者 周育宏 方国恩 +2 位作者 薛绪潮 钱其军 姜梨华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期30-31,共2页
目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^＋结肠癌细胞的数量变化，探讨化疗对CD133^＋结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620，采用80mg／L5-氟尿嘧啶（5．Fu）和25mg／L奥沙利铂（Oxaliplatin）分... 目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^＋结肠癌细胞的数量变化，探讨化疗对CD133^＋结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620，采用80mg／L5-氟尿嘧啶（5．Fu）和25mg／L奥沙利铂（Oxaliplatin）分别作用8h，并设对照组，利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测，观察化疗前后CD133^＋细胞的比例。结果流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为45．00％，与未处理组（32．80％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为55．30％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为47．10％，与未处理组（33．90％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133。肿瘤细胞为56．50％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。结论CD133^＋结肠癌细胞能明显抵抗化疗。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 化疗 CD133
原文传递
腺病毒CNHK200-hEndostatin质量控制方法的研究 被引量：3
16
作者 薛惠斌 施军霞 +2 位作者 朱文川 陈敏 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1011-1014,共4页
目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、... 目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测。结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量。结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求。结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法。应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求。 展开更多
关键词 腺病毒科 内皮抑素类 基因疗法 质量控制
下载PDF
降低亲和力提高HER2-CAR-T细胞治疗的安全性 被引量：3
17
作者 章浩 叶真龙 钱其军 《药学实践杂志》 CAS 2016年第3期261-266,共6页
目的探讨降低CAR-T细胞亲和力是否能有效提高其杀伤特异性,减少"脱靶效应"。方法构建靶向HER2的中等亲和力和高亲和力的La-G3HER2-CAR和Ha-G3HER2-CAR并电穿孔转染T细胞,采用Western Blot、FCM技术和xCELLigence RTCA DP进行... 目的探讨降低CAR-T细胞亲和力是否能有效提高其杀伤特异性,减少"脱靶效应"。方法构建靶向HER2的中等亲和力和高亲和力的La-G3HER2-CAR和Ha-G3HER2-CAR并电穿孔转染T细胞,采用Western Blot、FCM技术和xCELLigence RTCA DP进行CAR载体表达和杀伤功能检测。结果 La-G3HER2-CAR-T细胞和Ha-G3HER2-CAR-T细胞分别表达43 000和58 000的外源CAR载体片段,转染效率分别为58.1%和69.0%。高亲和力的Ha-G3HER2-CAR-T细胞对高、中、低水平表达HER2的6种靶细胞均有效杀伤,而低亲和力的La-G3HER2-CAR-T细胞高效杀伤HER2高表达的SK-OV-3和BT474细胞,对HER2中表达的MDA-MB-231和HCC-202的杀伤作用较弱,而对低水平表达HER2的MCF-7和293细胞不杀伤。进一步的机制研究发现,HER2中水平表达的MDA-MB-231细胞共培养对La-G3HER2-CAR-T细胞和Ha-G3HER2-CAR-T细胞激活和细胞因子分泌诱导水平不同(CD107a:8.2%vs 71.6%;IFN-γ:66.3%vs 83.4%;TNF-α:73.4%vs 94.1%)。结论中等亲和力La-G3HER2-CAR-T细胞比高亲和力的Ha-G3HER2-CAR-T细胞的杀伤作用特异性更强,降低CAR-T细胞的亲和力可以提高治疗的安全性。 展开更多
关键词 人表皮生长因子受体2 嵌合抗原受体 T细胞 细胞免疫治疗
下载PDF
人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性 被引量：2
18
作者 钱炎珍 黎江 +7 位作者 李林芳 刘辉 刘韬 姜梨华 施乐华 苏长青 吴孟超 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-87,共4页
目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子... 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。 展开更多
关键词 肝癌细胞系 原代培养 生物学特性
下载PDF
溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外胃肠道肿瘤杀伤实验 被引量：2
19
作者 彭林辉 周杰 +5 位作者 霍枫 詹世林 张琪 苏长青 钱其军 石英 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期2233-2236,共4页
目的研究携带鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ(简称CNHK300-Mγ)对胃肠道肿瘤细胞的体外杀伤作用和mIFN-γ的表达情况。方法采用CNHK300-Mγ、CNHK300、ONYX-015和AdEasy-mIFN-γ(简称AdEasy-Mγ)感染胃癌细胞株SGC-... 目的研究携带鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ(简称CNHK300-Mγ)对胃肠道肿瘤细胞的体外杀伤作用和mIFN-γ的表达情况。方法采用CNHK300-Mγ、CNHK300、ONYX-015和AdEasy-mIFN-γ(简称AdEasy-Mγ)感染胃癌细胞株SGC-7901、大肠癌细胞株HT-29和正常成纤维细胞株MRC-5,通过TCID50法、CPE和四唑盐比色试验(MTT)检测CNHK300-Mγ、CNHK300和ONYX-015在上述肿瘤细胞和正常细胞中的增殖能力和杀伤作用,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CNHK300-Mγ和AdEasy-Mγ在上述肿瘤细胞和正常细胞中不同时相的mIFN-γ表达量。结果 CNHK300-Mγ具有类似于CNHK300的肿瘤细胞选择增殖性特性,能在胃肠道肿瘤细胞中大量增殖并杀灭肿瘤细胞,均强于ONYX-015,而在正常细胞中增殖和杀伤作用均较弱,类似于ONYX-015。CNHK300-Mγ感染胃肠道肿瘤细胞后有大量的mIFN-γ表达,并随着感染时间延长表达量也相应上升,而AdEasy-Mγ感染后只有少量mIFN-γ的表达,而且感染的时间延长表达量变化也不大。结论 CNHK300-Mγ能选择性增殖、杀灭肿瘤细胞,同时大量表达具有抗肿瘤作用的治疗基因,发挥多重抗瘤作用,有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 端粒酶 基因治疗 肿瘤 干扰素-Γ
下载PDF
表达人IL-21的细胞因子诱导的杀伤细胞对裸鼠肝癌的治疗研究 被引量：3
20
作者 陈晚华 刘辉 +3 位作者 王延春 朱洋洋 曲平波 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1045-1050,共6页
目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性。方法构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞... 目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性。方法构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞,包装表达hIL-21、CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。分离培养CIK细胞并绘制生长曲线,将携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100、1 000)感染CIK细胞;将携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、20、50)感染SMMC-7721细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达;将携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100)感染CIK细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达。皮下注射SMMC-7721细胞致裸鼠成瘤,以表达hIL-21的CIK细胞治疗荷瘤裸鼠,评价疗效。结果成功构建出用于Ad5、Ad5F35病毒的质粒;构建的质粒与pAd5、pAd5F35脂质体共转染HEK293细胞,包装出表达hIL-21及CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒对CIK细胞的感染实验表明Ad5F35腺病毒感染率更高;携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒对SMMC-7721细胞的感染实验表明hIL-21表达量差异无统计学意义;携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以50MOI感染CIK细胞后hIL-21的表达量较高;动物实验统计分析说明表达hIL-21的CIK细胞对荷瘤裸鼠疗效较好。结论 hIL-21与CIK细胞在荷瘤小鼠体内联合发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 白介素21 细胞因子诱导的杀伤细胞 腺病毒 肝肿瘤
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部