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缺氧诱导因子-1——肿瘤治疗的新靶点 被引量:7
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作者 张琪 钱其军 吴孟超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第4期298-300,共3页
肿瘤细胞的失控生长容易产生肿瘤内缺氧微环境,进而诱导缺氧诱导因子1(HIF-1)的形成。HIF-1为一异源二聚体转录因子,在多种肿瘤中广泛存在,且受多种因素调节。它与一系列缺氧反应靶基因上的特定结合位点缺氧反应元件(HRE)结合,从而启动... 肿瘤细胞的失控生长容易产生肿瘤内缺氧微环境,进而诱导缺氧诱导因子1(HIF-1)的形成。HIF-1为一异源二聚体转录因子,在多种肿瘤中广泛存在,且受多种因素调节。它与一系列缺氧反应靶基因上的特定结合位点缺氧反应元件(HRE)结合,从而启动靶基因的转录表达,同肿瘤的增殖、转移密切相关。以HIF-1为靶点可能为肿瘤治疗提供一新的策略。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子1 缺氧反应元件 肿瘤 治疗
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腺病毒载体携带人TRAIL基因治疗H446小细胞肺癌的体外实验研究 被引量:9
2
作者 刘永靖 陈飞虎 +3 位作者 于奇 韩继彪 苏长青 钱其军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期755-759,共5页
目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)... 目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能,流式细胞术(FCM)检测Ad-hTRAIL对细胞早期凋亡的影响,并进行RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL mRNA和TRAIL蛋白的表达量。结果携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒Ad-hTRAIL对H446细胞的感染效率较高;感染72h后H446、WRL-68、MRC-5细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为32.02、17.08、16.89μg.L-1,在MOI=1.0时,Ad-hTRAIL即可引起H446细胞明显凋亡;而在MOI=100时对正常细胞WRL-68、MRC-5也没有明显杀伤作用。结论Ad-hTRAIL能够强烈诱导小细胞肺癌细胞H446凋亡而对正常肝细胞及成纤维细胞无明显抑制作用,Ad-hTRAIL在小细胞肺癌的基因治疗方面有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 基因治疗 腺病毒 TRAIL 凋亡
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新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ对肝癌细胞的杀伤作用 被引量:4
3
作者 孙立臣 张柏和 +5 位作者 张琪 苏长青 李根丛 吴红平 吴孟超 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期635-640,共6页
目的:探讨一种新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ[腺病毒E1A、E1B基因分别由人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子和缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)启动子双重调控的、并携带hIFN-γ的重组腺... 目的:探讨一种新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ[腺病毒E1A、E1B基因分别由人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子和缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)启动子双重调控的、并携带hIFN-γ的重组腺病毒]对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:TCID_(50)法和MTF检测增殖型腺病毒CNHK500-hγ在两种端粒酶阳性肝癌细胞株HepG2和Hep3B以及一株端粒酶阴性的成纤维细胞株BJ中的扩增能力和对细胞的杀伤作用。用携带绿色荧光蛋白的CNHK500-GFP感染BJ、Hep3B和HepG2细胞,观察其扩增情况。Western blotting和ELISA法检测CNHK500-hγ感染后细胞和细胞上清中hIFN-γ的表达。结果:CNHK500-hγ感染HepG2、Hep3B和BJ细胞48 h后,CNHK500-hγ在HepG2和Hep3B细胞中的扩增是BJ细胞中的16003和2116倍,对BJ细胞杀伤的ED_(50)值分别是杀伤HepG2和Hep3B细胞的500和10 000倍(P<0.01),且明显优于阳性对照增殖型腺病毒ONYX-015。CNHK500-hγ感染后HepG2及Hep3B细胞中hIFN-γ的表达显著高于非增殖型腺病毒Ad-hγ感染后细胞中hIFN-γ的表达(P<0.01)。结论:增殖型腺病毒CNHK500-hγ可在肝癌细胞内特异性扩殖,高效表达hIFN-γ基因,是一种具备治疗肝癌潜力的新型腺病毒。 展开更多
关键词 肝癌 CNHK500-hγ 病毒治疗 基因治疗 端粒酶 人干扰素-γ
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非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究
4
作者 刘永靖 陈飞虎 +4 位作者 黄学应 苏长青 王星华 钱炎珍 钱其军 《肝胆外科杂志》 2009年第2期136-140,共5页
目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒(CNHK500-hTRAIL)和非增殖型腺病毒(Ad-hTRAIL)对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估... 目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒(CNHK500-hTRAIL)和非增殖型腺病毒(Ad-hTRAIL)对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力。采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况。以及通过流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响。结果CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MO I值(MO I=0.1)即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤。CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL。结论靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。 展开更多
关键词 增殖型腺病毒 TRAIL 基因治疗 凋亡 肝细胞癌
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携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的腺病毒载体的构建及体外抗肿瘤活性的研究 被引量:3
5
作者 刘永靖 徐志飞 +5 位作者 苏长青 薛惠斌 崔贞福 李林芳 钱炎珍 钱其军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1452-1455,共4页
目的 构建携带人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)基因的腺病毒载体 ,评价TRAIL对人肺癌、肝癌细胞的基因治疗功效。方法 构建携带人TRAIL基因的腺病毒Ad hTRAIL ,感染人肺癌细胞株H 460、A5 49,人肝癌细胞株Hep3B、HepGII以... 目的 构建携带人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)基因的腺病毒载体 ,评价TRAIL对人肺癌、肝癌细胞的基因治疗功效。方法 构建携带人TRAIL基因的腺病毒Ad hTRAIL ,感染人肺癌细胞株H 460、A5 49,人肝癌细胞株Hep3B、HepGII以及人正常肝细胞株WRL 68,人正常成纤维细胞株MRC 5 ,通过酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测hTRAIL的表达 ,并进行四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能。结果 成功构建携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒载体Ad hTRAIL ,感染H 460、A5 49、Hep3B、HepGII、WRL 68细胞 ,72h后上清中TRAIL表达量分别为 3 2 .75、2 4.5 3、3 4.0 2、3 2 .89、17.0 8μg/L。在MOI =1时 ,Ad hTRAIL即可引起肿瘤细胞明显凋亡 ,而在MOI =10 0时对正常细胞WRL 68、MRC 5也没有明显杀伤作用。结论 腺病毒载体携带人TRAIL基因在肿瘤基因治疗方面有非常广阔的应用前景。 展开更多
关键词 携带 腺病毒载体 TRAIL基因 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 体外抗肿瘤活性 正常细胞 感染 表达量 细胞 构建
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含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定 被引量:2
6
作者 徐学武 俞卫锋 +3 位作者 王星华 李泉 董刚 吴飞翔 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第4期6-8,共3页
目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细... 目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度。结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatII及NotI酶切结果正确。PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×1010PFUml。病毒感染细胞后第3d,细胞培养液内有高浓度的β-内啡呔。结论:成功构建了含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒,为进行下游相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-内啡呔 腺病毒 腺相关病毒 杂合病毒 构建 鉴定
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人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率 被引量:4
7
作者 洪敬欣 张茜真 +3 位作者 韩俊领 刘辉 刘剑 邱录贵 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期42-47,共6页
背景:目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的:观察人脐带来源的间充质... 背景:目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的:观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法:采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论:使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。 展开更多
关键词 培养体系 腺病毒 感染效率 脐带间充质干细胞 干细胞
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化疗对CD133+结肠癌细胞的作用效果 被引量:4
8
作者 周育宏 方国恩 +2 位作者 薛绪潮 钱其军 姜梨华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期30-31,共2页
目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^+结肠癌细胞的数量变化,探讨化疗对CD133^+结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620,采用80mg/L5-氟尿嘧啶(5.Fu)和25mg/L奥沙利铂(Oxaliplatin)分... 目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^+结肠癌细胞的数量变化,探讨化疗对CD133^+结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620,采用80mg/L5-氟尿嘧啶(5.Fu)和25mg/L奥沙利铂(Oxaliplatin)分别作用8h,并设对照组,利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测,观察化疗前后CD133^+细胞的比例。结果流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29,80mg/L5-Fu处理8h组中CD133^+肿瘤细胞为45.00%,与未处理组(32.80%)比较结果差异有统计学意义(P〈0.01);25mg/L奥沙利铂处理8h组中CD133^+肿瘤细胞为55.30%,与未处理组和80mg/L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义(P〈0.01)。流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620,80mg/L5-Fu处理8h组中CD133^+肿瘤细胞为47.10%,与未处理组(33.90%)比较结果差异有统计学意义(P〈0.01);25mg/L奥沙利铂处理8h组中CD133。肿瘤细胞为56.50%,与未处理组和80mg/L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义(P〈0.01)。结论CD133^+结肠癌细胞能明显抵抗化疗。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 化疗 CD133
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降低亲和力提高HER2-CAR-T细胞治疗的安全性 被引量:3
9
作者 章浩 叶真龙 钱其军 《药学实践杂志》 CAS 2016年第3期261-266,共6页
目的探讨降低CAR-T细胞亲和力是否能有效提高其杀伤特异性,减少"脱靶效应"。方法构建靶向HER2的中等亲和力和高亲和力的La-G3HER2-CAR和Ha-G3HER2-CAR并电穿孔转染T细胞,采用Western Blot、FCM技术和xCELLigence RTCA DP进行... 目的探讨降低CAR-T细胞亲和力是否能有效提高其杀伤特异性,减少"脱靶效应"。方法构建靶向HER2的中等亲和力和高亲和力的La-G3HER2-CAR和Ha-G3HER2-CAR并电穿孔转染T细胞,采用Western Blot、FCM技术和xCELLigence RTCA DP进行CAR载体表达和杀伤功能检测。结果 La-G3HER2-CAR-T细胞和Ha-G3HER2-CAR-T细胞分别表达43 000和58 000的外源CAR载体片段,转染效率分别为58.1%和69.0%。高亲和力的Ha-G3HER2-CAR-T细胞对高、中、低水平表达HER2的6种靶细胞均有效杀伤,而低亲和力的La-G3HER2-CAR-T细胞高效杀伤HER2高表达的SK-OV-3和BT474细胞,对HER2中表达的MDA-MB-231和HCC-202的杀伤作用较弱,而对低水平表达HER2的MCF-7和293细胞不杀伤。进一步的机制研究发现,HER2中水平表达的MDA-MB-231细胞共培养对La-G3HER2-CAR-T细胞和Ha-G3HER2-CAR-T细胞激活和细胞因子分泌诱导水平不同(CD107a:8.2%vs 71.6%;IFN-γ:66.3%vs 83.4%;TNF-α:73.4%vs 94.1%)。结论中等亲和力La-G3HER2-CAR-T细胞比高亲和力的Ha-G3HER2-CAR-T细胞的杀伤作用特异性更强,降低CAR-T细胞的亲和力可以提高治疗的安全性。 展开更多
关键词 人表皮生长因子受体2 嵌合抗原受体 T细胞 细胞免疫治疗
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人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性 被引量:2
10
作者 钱炎珍 黎江 +7 位作者 李林芳 刘辉 刘韬 姜梨华 施乐华 苏长青 吴孟超 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-87,共4页
目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子... 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。 展开更多
关键词 肝癌细胞系 原代培养 生物学特性
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携带IL-24的溶瘤腺病毒作用于乳腺癌的体外实验研究 被引量:2
11
作者 朱玮 秦新裕 +3 位作者 张宏伟 陈君雪 吴红平 钱其军 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-31,共6页
目的构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧... 目的构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧光显微镜观测及病毒体外增殖实验测评病毒在乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常成纤维细胞MRC-5中的增殖情况;MTT法检测不同MOI值的病毒对两种细胞的抑制效应;ELISA法检测病毒感染细胞后上清液中IL-24的含量;Western blot法检测细胞内的IL-24蛋白;流式细胞检测细胞的凋亡情况。结果 CNHK600-IL-24经测序及PCR鉴定,病毒滴度为1.9×1010pfu/mL。CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后表现出强大的增殖、复制能力,而在MRC-5细胞内增殖并不明显;CNHK600-IL-24在很低的浓度就能对MDA-MB-231细胞产生明显的杀伤效应,而对MRC-5细胞的杀伤作用明显减弱;CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后,IL-24蛋白的表达明显增多,而感染MRC-5细胞后产生的IL-24维持在很低的水平。流式细胞检测发现,病毒引起的MDA-MB-231细胞明显凋亡而MRC-5细胞的凋亡率很低。结论本研究成功构建高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24,该病毒具有在乳腺癌细胞中特异性增殖并杀伤肿瘤细胞的能力。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 IL-24 乳腺癌 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 正常成纤维细胞株MRC-5
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基于RU486调控系统的重组腺病毒Ad-NRF2的构建及其体外分析 被引量:2
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作者 蔡旗旗 洪广亮 +5 位作者 邱俏檬 李林芳 卢中秋 吴红平 王端明 梁欢 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期198-202,共5页
目的 构建RU486调控系统介导的重组腺病毒Ad-NRF2,并在H460细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否可调控及表达效率.方法 在腺病毒载体的基础上,引入携带RU486(米非司酮)诱导调控系统的Nrf2基因;用LUC基因及Dsred基因对RU486调控系统... 目的 构建RU486调控系统介导的重组腺病毒Ad-NRF2,并在H460细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否可调控及表达效率.方法 在腺病毒载体的基础上,引入携带RU486(米非司酮)诱导调控系统的Nrf2基因;用LUC基因及Dsred基因对RU486调控系统进行验证,并通过免疫印迹和RT-PCR技术检测Nrf2的表达情况.结果 LUC和Dsred的表达都随RU486呈剂量依赖性增加;Ad-RUNrf2腺病毒感染H460细胞后,通过RT-PCR及免疫印迹结果显示Nrf2的表达量随着RU486剂量的增加而增加,去除RU486后,Nrf2的表达也随之减弱.结论 携带RU486可调控式Nrf2基因腺病毒构建成功,并且在细胞内RU486能够调节Nrf2因子的表达. 展开更多
关键词 氧化性应激 腺病毒科 基因表达调控
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癌症治疗新思路:靶向肿瘤干细胞 被引量:2
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作者 刘佳 马蕾娜 +2 位作者 王毅刚 刘新垣 钱其军 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1003-1009,共7页
肿瘤干细胞(cancer stem cell/tumor-initiating cell,CSC/TIC)是肿瘤组织中具有很强增殖能力、表现部分干细胞特性的细胞亚群,在肿瘤对放化疗抗性的产生和癌症的复发中起关键作用.目前用于靶向肿瘤干细胞的药物多为小分子抑制剂和融合... 肿瘤干细胞(cancer stem cell/tumor-initiating cell,CSC/TIC)是肿瘤组织中具有很强增殖能力、表现部分干细胞特性的细胞亚群,在肿瘤对放化疗抗性的产生和癌症的复发中起关键作用.目前用于靶向肿瘤干细胞的药物多为小分子抑制剂和融合蛋白.以溶瘤腺病毒为载体携带外源基因表达的新型治疗策略-病毒基因疗法,在各种抗癌方案中展现出明显的优势,对实体瘤表现出很好的疗效,将其应用于靶向肿瘤干细胞的治疗具有良好的发展前景.根据肿瘤干细胞维持自身功能所依赖的分子机制,人们制定了一系列行之有效的针对性治疗策略.本文就目前针对肿瘤干细胞的靶向性治疗的研究进展作一评述. 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 靶向 溶瘤腺病毒 策略
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特定条件下化疗诱导结肠癌细胞凋亡的研究 被引量:2
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作者 李小秋 周育宏 +1 位作者 姜梨华 李蓉 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2008年第3期222-225,共4页
目的:研究结肠癌化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)分别诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的作用。方法:用80μg/ml5-FU和25μg/mlOXA分别作用HT-29细胞8h,并应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞... 目的:研究结肠癌化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)分别诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的作用。方法:用80μg/ml5-FU和25μg/mlOXA分别作用HT-29细胞8h,并应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。结果:80μg/ml5-FU处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约9.2%(P<0.01);25μg/mlOXA处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21.1%(P<0.01)。25μg/mlOXA处理8h组与80μg/ml5-FU处理8h组比较,凋亡细胞比例约高于11.9%(P<0.01)。结论:在特定条件下,5-FU和OXA均能明显诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡;OXA对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-FU。 展开更多
关键词 结肠癌 氟尿嘧啶 奥沙利铂 细胞凋亡 流式细胞术
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表达人内啡肽的腺病毒腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析 被引量:1
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作者 徐学武 俞卫锋 +5 位作者 崔贞福 王星华 李泉 吴飞翔 董刚 姜梨华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期856-859,共4页
应用分子生物学方法将人β_内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312_AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒腺相关杂合病毒AdAAV_EE。用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染... 应用分子生物学方法将人β_内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312_AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒腺相关杂合病毒AdAAV_EE。用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达,ELISA法测定培养液中表达产物浓度。PCR法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1.29×1010PFUmL。结果表明转基因从第1天到第14天的表达水平呈上升趋势,第14天达到3141pgmL。 展开更多
关键词 Β-内啡肽 腺病毒 腺相关病毒 杂合病毒 构建 表达
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地塞米松浓度与脐带间充质干细胞的成骨分化 被引量:2
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作者 洪敬欣 刘剑 +1 位作者 李琳芳 韩俊领 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第23期4204-4211,共8页
背景:在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。目的:探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程... 背景:在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。目的:探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中地塞米松的优选浓度。方法:采用植块法从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞。取第3代细胞进行日常细胞培养和诱导分化实验。流式细胞术检测所获细胞的表面标记表达情况,成脂、成骨诱导分化鉴定人脐带间充质干细胞。倒置相差显微镜观察成骨分化过程中细胞形态的变化。以含1×10-8mol/L,5×10-8mol/L,1×10-7mol/L3种浓度地塞米松的成骨诱导液对人脐带间充质干细胞进行成骨诱导。盐酸四环素荧光及Von Kossa染色法对比观察钙结节形成。反转录-聚合酶链反应法对比检测细胞骨桥蛋白基因表达。结果与结论:植块法分离的人脐带间充质干细胞形态均一,多为梭形,平行排列生长或旋涡状生长。流式细胞术检测CD29,CD73和CD90呈阳性表达,CD31,CD34和HLA-DR呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性。盐酸四环素荧光结果和Von Kossa染色结果显示,所形成的钙结节大小及数量,均随着地塞米松浓度的增加而增强、增多。反转录-聚合酶链反应检测结果显示,3种浓度地塞米松组的骨桥蛋白基因均有表达,且表达强度随着地塞米松浓度的增加而增强。提示成骨诱导液中地塞米松浓度为1×10-7mol/L时,能更有效地诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 地塞米松 优选浓度{成骨分化 成脂分化 钙结节 骨桥蛋白 细胞培养 细胞鉴定 细胞形态 干细胞图片文章
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骨形态发生蛋白-4基因重组腺病毒载体的构建 被引量:1
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作者 张裕东 赵剑 +1 位作者 吴红平 李林芳 《中国交通医学杂志》 2005年第6期568-570,共3页
目的:通过Cre/LoxP位点特异性重组系统构建携带人骨形态发生蛋白-4基因的重组腺病毒载体(Ad.BMP4)。方法:根据GenBank获得BMP4的基因序列合成引物,经PCR扩增获得长度为1230bp的BMP4基因片断,经酶切、测序鉴定后,与腺病毒穿梭质粒pSuCMV... 目的:通过Cre/LoxP位点特异性重组系统构建携带人骨形态发生蛋白-4基因的重组腺病毒载体(Ad.BMP4)。方法:根据GenBank获得BMP4的基因序列合成引物,经PCR扩增获得长度为1230bp的BMP4基因片断,经酶切、测序鉴定后,与腺病毒穿梭质粒pSuCMV连接,随后与5'缺陷型腺病毒右臂的质粒pBGHloxPΔE1E3通过脂质体Lipofectamine2000共转染至293细胞,获得重组腺病毒Ad.BMP4,并予以扩增、纯化、鉴定。结果:经酶切电泳和测序证明获得的BMP4基因片断序列、大小和方向正确,目的基因插入的位置、方向正确,经重组、扩增和纯化后获得病毒滴度为2.9×109pfu/ml的重组腺病毒Ad.BMP4,以PCR扩增和测序的方法证实了所构建病毒含有目的基因的片断,安全性检测证明所构建的腺病毒无野生性腺病毒的存在。结论:通过Cre/LoxP位点特异性重组系统构建了腺病毒Ad.BMP4。采用的腺病毒载体点特异性重组的方法极大地提高了包装成功率,且包装成功的病毒颗粒均为含有目的基因的重组病毒,从而保证了重组过程的快速和高效。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-4 重组腺病毒 基因 构建
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增殖型腺病毒载体介导mIL-12基因对胃癌细胞的杀伤作用(英文) 被引量:1
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作者 薛绪潮 方国恩 +4 位作者 张琪 薛惠斌 毕建威 曹贵松 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-79,共5页
目的 :观察增殖型腺病毒载体介导的 m IL - 1 2基因对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :利用携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1 ,通过病毒增殖实验、细胞病理效应、酶链免疫反应等分别观察病毒复制能力、病毒对胃... 目的 :观察增殖型腺病毒载体介导的 m IL - 1 2基因对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :利用携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1 ,通过病毒增殖实验、细胞病理效应、酶链免疫反应等分别观察病毒复制能力、病毒对胃癌细胞的杀伤作用及 m IL - 1 2表达水平。结果 :携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1具有肿瘤增殖型腺病毒 ONYX- 0 1 5的相似作用 ,可在肿瘤细胞内复制、增殖并杀死肿瘤细胞 ,而并不能在正常细胞内复制及增殖。该病毒在肿瘤细胞内的增殖能力是传统载体的近千倍。该载体携带的 m IL - 1 2基因的表达量明显高于传统基因治疗的腺病毒载体体系 ,是传统基因治疗表达量的百倍。 结论 :CNHK2 0 0 - m IL - 1 2能在胃癌细胞中增殖并杀死胃癌细胞 ,并提高目的基因的表达水平 。 展开更多
关键词 增殖型腺病毒载体 MIL-12 胃癌 癌细胞 杀伤作用 基因疗法 白细胞介素12
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增殖性腺病毒CNHK600-p53的构建及对胰腺癌细胞抑制的体外实验研究
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作者 段纪成 岳海燕 +5 位作者 钱其军 黄耀 刘凯 王燕玲 杨家和 吴孟超 《胰腺病学》 2007年第6期398-401,共4页
目的探讨携带p53基因的新型增殖性腺病毒CNHK600-p53的导入能否增加胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察化疗药物5-FU、丝裂霉素(MMC)和表阿霉素(epirubicin,EPI)单独应用及与CNHK600-p53... 目的探讨携带p53基因的新型增殖性腺病毒CNHK600-p53的导入能否增加胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察化疗药物5-FU、丝裂霉素(MMC)和表阿霉素(epirubicin,EPI)单独应用及与CNHK600-p53联合应用对胰腺癌细胞株PANC1的杀伤效应。结果PANC1在5-FU浓度为400μg/ml时细胞抑制率为(65±4.2)%,MMC浓度为1μg/ml时细胞抑制率为(41±1.9)%,EPI浓度为10μg/ml时细胞抑制率为(65±1.8)%。转入CNHK600-p53(MOI=0.625)后再使用上述浓度的化疗药物,PANC1的细胞抑制率分别为(89±5.3)%、(60±2.3)%和(75±1.5)%。当MOI值为0.3125、0.625、1.25时,CNHK600-p53组和Ad-p53组的细胞抑制率分别为(27±2.5)%、(30±3.7)%、(61±4.3)%和(4±2.7)%、(5±3.5)%、(16±4.5)%。结论单用CNHK600-p53效果优于Ad-p53,携带p53基因的CNHK600-p53能提高胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 基因 P53 抗药性 基因疗法
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携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究 被引量:1
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作者 刘辉 王春红 +5 位作者 陈亚龙 李林芳 吴红平 钱炎珍 姜梨华 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期178-182,共5页
目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒... 目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RGD-4C HI环 腺病毒载体 肝细胞癌
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