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人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：4
1
作者 蒋春华 高钰琪 +3 位作者 黄庆愿 黄缄 贺伟峰 段小军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期2040-2043,共4页
目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况。方法采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK... 目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况。方法采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体。 展开更多
关键词 腺病毒 HIF-1Α基因 同源重组
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骨关节炎软骨细胞的体外分离培养 被引量：14
2
作者 刘军 戴刚 杨柳 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第46期9045-9048,共4页
背景:由于体外分离培养骨关节炎患者软骨细胞存在难度,同时软骨组织中因富含大量的基质,且软骨细胞分布于其中的软骨陷窝中,因此与其他细胞相比,软骨细胞的分离更为困难。目的:从骨关节炎行人工膝关节置换者的关节软骨中分离软骨细胞,... 背景:由于体外分离培养骨关节炎患者软骨细胞存在难度,同时软骨组织中因富含大量的基质,且软骨细胞分布于其中的软骨陷窝中,因此与其他细胞相比,软骨细胞的分离更为困难。目的:从骨关节炎行人工膝关节置换者的关节软骨中分离软骨细胞,并改良其酶消化法分离软骨组织,观察软骨细胞的生物学特性。设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-04/2008-03在解放军第三军医大学烧伤研究所实验室完成。对象:标本取材于解放军第三军医大学西南医院关节外科中心同期收治的10例人工膝关节置换患者软骨组织(>3cm)。方法:切取原发性骨关节炎患者关节软骨,将软骨剪成1mm×1mm×1mm左右的碎块,以Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶消化分离关节软骨细胞,同期对比用Ⅱ型胶原酶加胰蛋白酶消化法消化软骨后的收获细胞数及细胞成活率,分离细胞进行原代和传代培养。主要观察指标:以倒置相差显微镜观察体外培养软骨细胞形态;以甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色进行软骨细胞鉴定;四甲基偶氮唑盐法测定骨关节炎细胞增殖情况。结果:改良的Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶法,对原代关节软骨细胞的分离取得了优良而稳定的效果,与传统的胰蛋白酶消化法相比,收获细胞数为3.72×106,细胞存活率为97.5%,二者相比有显著性差异(P<0.05)。体外培养观察软骨细胞贴壁和生长均较缓慢。原代和传代后细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学和甲苯胺蓝异染反应均较弱。软骨细胞增殖和生长缓慢。结论:Ⅱ型胶原酶顺序消化联合胰蛋白酶分离骨关节炎患者软骨细胞的技术简单且易操作,分离培养的软骨细胞符合骨关节炎时软骨退变的表现,可为骨关节炎的病因研究及软骨细胞移植治疗骨性关节炎提供实验基础。 展开更多
关键词 骨关节炎 软骨细胞 细胞分离 细胞培养 组织构建
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干细胞在骨性关节炎治疗中的理论与应用
3
作者 刘军 杨柳 戴刚 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第38期7555-7558,共4页
骨性关节炎与关节软骨组织代谢失衡有关,由于关节软骨的磨损和丢失,导致疾病的进一步发展。干细胞具有向中胚叶组织如软骨、骨、脂肪等组织分化的能力,最近的研究发现软骨中也有间充质干细胞的表达。文章综述了间充质干细胞的特性及功能... 骨性关节炎与关节软骨组织代谢失衡有关,由于关节软骨的磨损和丢失,导致疾病的进一步发展。干细胞具有向中胚叶组织如软骨、骨、脂肪等组织分化的能力,最近的研究发现软骨中也有间充质干细胞的表达。文章综述了间充质干细胞的特性及功能,以及应用干细胞治疗骨性关节炎的临床方法,应用局部激活、募集和输注合适的干细胞群落是研究关节软骨损伤修复和恢复关节动态平衡的新方法。运用干细胞技术合成组织工程化软骨用于疾病治疗,对关节软骨的缺损修复及骨关节病的治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 干细胞 骨性关节炎 综述文献
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