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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的构建及鉴定 被引量：5
1
作者 曾韦锟 邹全明 井申荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期665-667,共3页
目的:克隆幽门螺杆菌HpureB基因,并构建其核酸疫苗。方法:以HpNCTC11637株基因组DNA为模板,用PCR扩增ureB基因,并亚克隆至pMD18-T载体中。将目的基因经SalI、BglⅡ酶切纯化后插入pTCAE中,转化E.coliDH5α。经SalI、XhoI酶切并测序鉴定... 目的:克隆幽门螺杆菌HpureB基因,并构建其核酸疫苗。方法:以HpNCTC11637株基因组DNA为模板,用PCR扩增ureB基因,并亚克隆至pMD18-T载体中。将目的基因经SalI、BglⅡ酶切纯化后插入pTCAE中,转化E.coliDH5α。经SalI、XhoI酶切并测序鉴定的阳性重组质粒命名为pT-ureB。以电穿孔法将pT-ureB转染CHO细胞,用Wes-tern blot检测UreB蛋白的表达。结果:克隆重组后得到pT-ureB。将pT-ureB以电穿孔法转染CHO细胞后,取其培养上清进行Western blot检测,在UreB的相对分子质量(Mr)为62000处出现特异性条带。结论:成功地构建了HpureB核酸疫苗。体外转染CHO细胞后,经Western blot检测证实有UreB蛋白的表达,为进一步的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 UREB DNA疫苗
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的发酵、纯化及鉴定
2
作者 曾韦锟 邹全明 朱永红 《消化外科》 CSCD 2005年第4期275-278,共4页
目的大规模发酵、纯化幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(ureB)基因疫苗,并对纯化后的疫苗进行鉴定。方法大规模发酵DH5α(pT ureB),收获的细菌经碱裂解后,用两步离子交换层析方法分离、纯化疫苗,通过紫外分光光度计、酶切、体外转染等对疫苗进... 目的大规模发酵、纯化幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(ureB)基因疫苗,并对纯化后的疫苗进行鉴定。方法大规模发酵DH5α(pT ureB),收获的细菌经碱裂解后,用两步离子交换层析方法分离、纯化疫苗,通过紫外分光光度计、酶切、体外转染等对疫苗进行鉴定。结果发酵幽门螺杆菌ureB核酸疫苗,并经离子交换层析方法纯化获得了高质量的疫苗。结论纯化的ureBDNA疫苗为进一步的免疫实验奠定了基础。 展开更多
关键词 HELICOBACTER PYLORI DNA疫苗 纯化
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