冲击伤复合缺氧后大鼠血清TNF-α与IL-8含量的变化 被引量：3

1

作者 韦溦 周继红 +2 位作者 徐建洪 刘大维 李晓焱 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期2233-2235,共3页

目的探讨大鼠冲击伤、冲击伤复合缺氧后血清TNF-α、IL-8的含量变化特点及其对伤情的判断意义。方法80只大鼠按随机数字表法分为3组,即正常对照组(NG,n=8)、单纯冲击伤组(BG,n=36)和冲击伤复合缺氧组(BHG,n=36)。致伤组动物用BST-Ⅰ型... 目的探讨大鼠冲击伤、冲击伤复合缺氧后血清TNF-α、IL-8的含量变化特点及其对伤情的判断意义。方法80只大鼠按随机数字表法分为3组,即正常对照组(NG,n=8)、单纯冲击伤组(BG,n=36)和冲击伤复合缺氧组(BHG,n=36)。致伤组动物用BST-Ⅰ型生物激波管致冲击伤,BHG组大鼠再置入体积分数为12.5%的低氧舱,于伤后1、3、6h处死大鼠,采用大体、光镜和电镜方法观察伤后肺病理学变化和肺含水率,并用ELISA法监测血清TNF-α和IL-8含量变化。结果受伤动物可见明显的肺出血、肺水肿,BG和BHG组动物肺含水率及血清TNF-α和IL-8含量均明显高于NG组(P<0.01),其中BHG组血清TNF-α和IL-8含量在伤后6h又显著高于BG组(P<0.05)。结论冲击伤复合缺氧能明显增加血清TNF-α和IL-8含量,其水平变化可能与肺损伤程度密切相关。 展开更多

关键词 冲击伤 冲击伤复合缺氧 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-8

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小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选 被引量：2

2

作者 钟河江 蒋建新 +5 位作者 王海燕 杨策 张冲 严军 刘庆 黄苏娜 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第8期1401-1404,共4页

目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退... 目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-timePCR鉴定干扰效率。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml。Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上。结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 XBP1 慢病毒

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锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究 被引量：7

3

作者 吴丽娟 张雪莹 +2 位作者 陈伟 蒋建新 朱佩芳 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第3期232-233,240,I0001,共4页

目的探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用。方法以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-αI、L-1β水平以及肝脏病理损伤的保护。结果A20组LPS注... 目的探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用。方法以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-αI、L-1β水平以及肝脏病理损伤的保护。结果A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均<0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义。病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻。结论A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤。 展开更多

关键词 锌指蛋白A20 内毒素 炎症 基因治疗

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细菌脂多糖、脂蛋白和DNA对小鼠肺泡巨噬细胞体外激活的协同作用 被引量：6

4

作者 黄宏 蒋建新 +3 位作者 朱佩芳 王正国 张道杰 杨程 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第21期1468-1472,共5页

目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制。方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpGODN组、BLP组、LPS+CpGODN组、LPS+BLP组、L... 目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制。方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpGODN组、BLP组、LPS+CpGODN组、LPS+BLP组、LPS+CpGODN+BLP组和培养基对照组。刺激6h后,收集上清和细胞,上清用于TNFα检测,细胞用于提取总RNA,通过RTPCR检测主要模式识别受体(PRRs)CD14、SR、TLR2、TLR4、TLR9的表达。结果LPS、BLP和CpGODN不仅体外能协同增加肺泡巨噬细胞释放TNFα等细胞因子,而且具有协同增强效应细胞表面模式识别受体的表达,以三者同时存在时,协同作用最强。结论细菌内毒素、细菌脂蛋白和细菌DNA在体外不仅能上调相互的模式识别受体,而且具有协同增强其他细菌结构成分对相应受体的刺激作用。 展开更多

关键词 肺泡巨噬细胞 协同作用 脂蛋白 细菌脂多糖 体外激活 小鼠 CPG-ODN 模式识别受体 脂多糖(LPS) RT-PCR检测 细菌DNA TNF-α 协同增强效应 细菌内毒素 体外实验 受体水平 可能机制 刺激效应 分离培养 总RNA TLR4 TLR9 细胞因子

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腹腔感染脓毒症时肺内主要模式识别受体表达变化及其与肺损伤的关系

5

作者 黄宏 蒋建新 +2 位作者 朱佩芳 王正国 张道杰 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期613-617,共5页

目的观察腹腔感染脓毒症时肺组织内病原菌相关模式分子(内毒素、脂蛋白、DNA)的主要模式识别受体的表达变化及其意义。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)术建立30只昆明种小鼠腹腔感染脓毒症模型,将模型小鼠随机分为CLP组和假手术组,每组各15只... 目的观察腹腔感染脓毒症时肺组织内病原菌相关模式分子(内毒素、脂蛋白、DNA)的主要模式识别受体的表达变化及其意义。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)术建立30只昆明种小鼠腹腔感染脓毒症模型,将模型小鼠随机分为CLP组和假手术组,每组各15只鼠,分别于术后8,12和24h取5只鼠处死取右肺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法检测肺组织内毒素受体[清道夫受体(SR)、白细胞分化抗原14(CD14)、TLR4]及细菌脂蛋白受体(TLR2)、细菌DNA受体(TLR9)mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测肺组织内肿瘤坏死因子α(TNFα)含量,采用分光光度计法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与假手术组比较,术后8hCLP组肺组织内CD14mRNA(1.143±0.139,t=0.022,P<0.05),TLR2mRNA(0.418±0.102,t=0.021,P<0.05),TLR4mRNA(0.595±0.052,t=0.0001,P<0.01)和TLR9mRNA(0.743±0.178,t=0.0023,P<0.01)表达上调,其中TLR9mRNA呈持续上调变化,SRmRNA(0.659±0.159,t=0.029,P<0.05)呈持续下调改变;肺组织CD14、TLR4、SR、TLR2和TLR9mRNA的表达变化分别与MPO和TNFα变化呈明显的相关关系(P<0.05或P<0.01)。结论脓毒症发病过程中,肺组织内主要模式识别受体表达变化与肺损伤相关,除LPS外,其他细菌成分也可能参与了肺损伤过程。 展开更多

关键词 脓毒症 肺 受体 免疫 过氧化物酶 肿瘤坏死因子

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人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定 被引量：1

6

作者 黄钢 王海燕 +2 位作者 王凯 蒋建新 白云 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期246-250,254,共6页

目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体p... 目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序鉴定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强。腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性。结论成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155。 展开更多

关键词 MIR-155 重组腺病毒 免疫调控

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重组人A20蛋白在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达

7

作者 吴丽娟 蒋建新 +1 位作者 朱佩芳 康格非 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期201-204,共4页

目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。... 目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。产物用SDS-PAGE和W estern B lot鉴定。同时对诱导表达培养基的pH值和配方,以及培养环境温度等条件进行了优化研究。结果表达产物分子量约93×103,表达条件的优化研究提示:降低诱导培养基pH值、添加低剂量EDTA、蛋白酶水解物和降低培养温度,可以使全长表达产物提高11倍,占总蛋白的18.24%,达到(254.10±24.52)μg/m l水平。结论我们成功在巴斯德毕赤酵母GS115中表达了rhA20,通过对诱导培养基成分及诱导温度的优化,使全长rhA20表达得到明显提高,探索了人A20的生物合成途径,也为巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白遭遇降解时的处理提供了新的方法。 展开更多

关键词 A20 基因表达 巴斯德毕赤酵母 基因工程

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ISS与NISS LD50的获取及其在预测创伤后并发症及死亡结局中的应用 被引量：5

8

作者 靳贺 邱俊 +11 位作者 马迪辉 肖雅 刘政 刘雪媛 邓佳 张连阳 蒋东坡 周健 周继红 易东 严军 梁华平 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期70-74,共5页

目的 获取中国汉族创伤患者ISS和新ISS（NISS）的半数致死量（LD50）并探讨其对创伤后并发症及死亡结局的预测价值. 方法 对来源于中华创伤数据库收录的6 542例汉族创伤患者进行Probit回归分析,获取ISS和NISS在不同年龄段的LD50值.再利... 目的 获取中国汉族创伤患者ISS和新ISS（NISS）的半数致死量（LD50）并探讨其对创伤后并发症及死亡结局的预测价值. 方法 对来源于中华创伤数据库收录的6 542例汉族创伤患者进行Probit回归分析,获取ISS和NISS在不同年龄段的LD50值.再利用ISS、NISS、ISSLD50ISS和NISS LD50NISS对来源于大坪医院的1 148例汉族创伤患者并发症及死亡结局进行预测.根据受试者工作特征曲线（ROC）评价预测能力.通过DeLong-DeLong非参数法比较ROC曲线下面积（AUC）评估各指标的预测价值. 结果 16 ～44岁、45～ 64岁和≥65岁三个年龄段ISSLD50值（LD50ISS）分别为55,49和33;NISS的LD50值（LD50NISS）分别为62,56和43.在预测ARDS、MODS时,ISS/LD50ISS和NISS/LD50NISS的AUC大于单独应用ISS和NISS（P＜0.05）,具有更高的预测价值.在预测脓毒症时,ISS/LD50ISS和NISS/LD50NISS与单独应用ISS和NISS具有相同的预测价值.在预测死亡时,ISS/LD50ISS和NISS/LD50NISS的AUC均＞0.9（分别为0.907和0.903）,表现出较高的预测价值. 结论 本研究提出中国汉族不同年龄段创伤患者ISS和NISS的LD50值,可作为早期预测创伤后ARDS、MODS和死亡结局的新方法. 展开更多

关键词 创伤和损伤 损伤严重度评分 并发症 预测

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应激模型的生理学基础及其比较研究进展 被引量：4

9

作者 高文婷 杨策 +2 位作者 王海燕 杜娟 蒋建新 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第21期4160-4163,共4页

各种外界因素如创伤、手术、感染、缺氧、强光、噪音等通过一定强度作用于机体可以引起机体特异性和非特异性反应,非特异性反应与刺激因素性质无直接关系,称为应激(stress)。近年来,随着社会的发展,生活节奏的加快、自然环境和生活环境... 各种外界因素如创伤、手术、感染、缺氧、强光、噪音等通过一定强度作用于机体可以引起机体特异性和非特异性反应,非特异性反应与刺激因素性质无直接关系,称为应激(stress)。近年来,随着社会的发展,生活节奏的加快、自然环境和生活环境的恶化,应激已经成为威胁人类健康的重要因素,有关应激影响机体健康的研究备受国内外学者的重视,而合适的应激动物模型的建立对应激研究的顺利开展有着重要意义。本文就目前应激动物模型的病理生理特点、种类、制作和评价方法等进行综述,旨在为应激研究提供参考。 展开更多

关键词 应激 下丘脑 肾上腺 动物模型

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大鼠表皮基底层干细胞体外分离与培养 被引量：2

10

作者 邓先见 姚波 +4 位作者 李力 徐苗苗 顾玮 杨策 蒋建新 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期2441-2443,2448,共4页

目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤,采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞,将慢黏附细胞作为对照组细胞,均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素... 目的建立简单、可靠的大鼠表皮基底层干细胞体外分离培养方法。方法取新生大鼠背部皮肤,采用胰酶两步消化法获得单细胞悬液,Ⅳ型胶原差速贴壁法富集干细胞,将慢黏附细胞作为对照组细胞,均以角质形成细胞无血清培养基培养。以β1-整合素和角蛋白19(K19)双重荧光染色鉴定细胞表型,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力。结果分离培养的细胞为多角形、呈铺路石样排列,倍增时间约为24h,细胞形态和生长规律符合基底层干细胞的特征。免疫荧光鉴定显示细胞共表达β1-整合素和K19,基底层干细胞克隆形成能力显著强于对照细胞。结论两步消化联合Ⅳ型胶原差速贴壁法获取基底层干细胞简易可行,培养的细胞活力好、表型可靠。 展开更多

关键词 成体干细胞 细胞培养技术 表皮干细胞 基底层干细胞

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巨噬细胞趋化检测方法的建立及皮质酮对其趋化功能的影响 被引量：1

11

作者 钟河江 王海燕 +5 位作者 刘庆 蒋建新 杨策 严军 黄苏娜 杨天德 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第15期1876-1878,1881,共4页

目的建立改良Boyden趋化小室(Boyden chamber)法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。方法分离成年Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔巨噬细胞。应用48孔Boyden chamber趋化板检测趋化功能。下室加入27μ... 目的建立改良Boyden趋化小室(Boyden chamber)法检测巨噬细胞趋化功能的方法,探讨皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞趋化功能的影响。方法分离成年Sprague-Dawley(SD)大鼠腹腔巨噬细胞。应用48孔Boyden chamber趋化板检测趋化功能。下室加入27μL的10nM FMLP作为趋化剂或含1%牛血清清蛋白的RPMI-1640作为阴性对照,将50μL不同细胞密度的大鼠腹腔巨噬细胞悬液(3、6、12×106/mL)置于上室以确定最适细胞密度,将趋化装置置于5%CO2、37℃细胞培养箱内孵育2、3h以确定最适孵育时间。同时,以0、10、501、000ng/mL皮质酮处理大鼠腹腔巨噬细胞,应用Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能。结果巨噬细胞对10nM FMLP趋化剂呈细胞密度依赖性增加,上室巨噬细胞密度为6×106/mL时为最适细胞密度,并且最适孵育时间为3h。低浓度皮质酮(10、50ng/mL)处理大鼠腹腔巨噬细胞其趋化指数显著高于对照组(P<0.01),而高浓度皮质酮(1 000ng/mL)处理后巨噬细胞趋化指数与对照组相比差异不明显。结论成功建立了改良Boyden chamber法检测巨噬细胞趋化功能方法,皮质酮可呈剂量依赖性地影响巨噬细胞趋化功能,在无免疫刺激状态下,低浓度皮质酮能增强巨噬细胞趋化功能。 展开更多

关键词 趋化检测 巨噬细胞 皮质酮

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皮质酮对动物骨髓间充质干细胞迁移活性的影响及其修复学意义 被引量：1

12

作者 高文婷 杨策 +2 位作者 王海燕 严军 蒋建新 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1788-1791,共4页

目的研究下丘脑-垂体-肾上腺轴效应激素———糖皮质激素(GC)对不同动物骨髓间充质干细胞迁移活性影响。方法分离、培养并鉴定大鼠和小鼠骨髓间充质干细胞,通过不同方法观察两种来源的骨髓间充质干细胞趋化活性的变化,评价GC对不同来源... 目的研究下丘脑-垂体-肾上腺轴效应激素———糖皮质激素(GC)对不同动物骨髓间充质干细胞迁移活性影响。方法分离、培养并鉴定大鼠和小鼠骨髓间充质干细胞,通过不同方法观察两种来源的骨髓间充质干细胞趋化活性的变化,评价GC对不同来源的骨髓间充质干细胞迁移活性的影响。结果尽管不同种属来源的骨髓间充质干细胞在形态上存在一定差异,但一定浓度的GC能够显著增强其趋化活性(P<0.05)。结论急性应激条件下,骨髓间充质干细胞迁移活性增强对损伤组织修复具有潜在的临床意义。 展开更多

关键词 糖皮质激素类 间质干细胞 骨髓

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促肾上腺皮质激素释放激素基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

13

作者 王海燕 刘庆 +4 位作者 钟河江 杨策 黄苏娜 严军 蒋建新 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期1668-1670,1674,共4页

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因敲除(KO)小鼠饲养、繁殖及基因型鉴定的方法。方法从美国Jackson实验室引进CRH KO小鼠,按照遗传学规则,对杂合子型(CRH+/-)小鼠进行配对繁殖,提取幼鼠尾部组织全基因组DNA,通过聚合酶链反应(P... 目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因敲除(KO)小鼠饲养、繁殖及基因型鉴定的方法。方法从美国Jackson实验室引进CRH KO小鼠,按照遗传学规则,对杂合子型(CRH+/-)小鼠进行配对繁殖,提取幼鼠尾部组织全基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对幼鼠基因型进行鉴定。结果 CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠的繁殖和饲养均获得成功,采用PCR成功地对所获得的小鼠进行基因分析,在子代小鼠中存在野生纯合子型(CRH+/+)、杂合子型(CRH+/-)及CRHKO纯合子型(CRH-/-)小鼠。CRH-/-小鼠较另外2种基因型小鼠存活率明显下降,但3种基因型小鼠在出生后10 d及30d体质量无明显差异。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法可从杂合子型(CRH+/-)小鼠中获得CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠。 展开更多

关键词 促肾上腺皮质素释放激素 小鼠 基因敲除 基因型 聚合酶链反应 近亲繁殖

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