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肠出血性大肠杆菌O157：H7 EspA—Stx2B融合蛋白的克隆、表达及生物学活性研究
1
作者 王庆旭 毛旭虎 +4 位作者 彭燕 刘艳青 余抒 程建平 邹全明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期258-262,共5页
目的重组表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7的EspA与Stx2B融合蛋白，并对其生物学活性进行初步研究。方法采用PCR技术从EHEC O157：H7基因组中扩增espA基因及stx2B基因，两基因通过连接子（1inker）相连，T／A法克隆，克隆至pET-28... 目的重组表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7的EspA与Stx2B融合蛋白，并对其生物学活性进行初步研究。方法采用PCR技术从EHEC O157：H7基因组中扩增espA基因及stx2B基因，两基因通过连接子（1inker）相连，T／A法克隆，克隆至pET-28a（＋）表达载体上，转化宿主细胞E.coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS—PAGE检测其表达量及表达形式，免疫印迹分析免疫反应性。用纯化的融合蛋白免疫BALB／c小鼠，检测其免疫原性，然后对免疫小鼠进行O157活菌攻毒试验和O157超声上清致死保护试验。结果构建的espa—stx2B融合基因片段的测序结果与理论预测值完全一致。融合蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达，表达量约40％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与EspA和Stx2B抗体发生抗原抗体反应。免疫小鼠其特异性抗体阳转率达100％，EspA和Stx2B抗体的几何平均滴度（GMT）分别增长了124．30倍和58．49倍。免疫小鼠O157活菌攻毒保护试验免疫后排菌时间和排菌量与对照组相比并没有明显改变，O157菌超声上清致死保护试验免疫组存活率为10／15，对照组全部死亡。结论在E．coli中高效表达了EspA—Stx2B融合蛋白，此融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，融合蛋白免疫小鼠并不能降低细菌在小鼠胃肠道的黏附与定植，但却起到明显的免疫保护作用，保护率为66．7％（10／15）。 展开更多
关键词 EHEC O157:H7 EspA stx2B 融合蛋白 基因表达
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肠出血性大肠杆菌O157的实验室分离与鉴定方法 被引量：6
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作者 丁红雷 毛旭虎 +1 位作者 王豪举 邹全明 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期242-244,共3页
大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌。对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义。本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的... 大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌。对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义。本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的方法进行了比较。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 分离鉴定 选择性培养基
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抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备
3
作者 邹锋 郝飞 +4 位作者 宋志强 易勇 翟志芳 邹全明 叶庆佾 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期563-565,共3页
目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶... 目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Westernblotting检测抗体效价及特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7200的HSPC016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。双向免疫扩散显示兔抗HSPC016多克隆抗体效价为1∶16;ELISA分析兔抗HSPC016血清的滴度可达320000EU;Westernblotting显示抗血清可与原核表达的HSPC016蛋白特异结合。结论:成功制备了兔抗HSPC016多抗血清,为进一步研究HSPC016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础。 展开更多
关键词 人毛乳头细胞 造血干细胞016基因 原核表达 抗体 兔
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