壳聚糖-海藻酸钠幽门螺杆菌全菌蛋白微球的制备及表征 被引量：6

1

作者 王毅超 邹全明 +2 位作者 任建敏 刘健 王晓勤 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期375-377,共3页

目的以壳聚糖、海藻酸钠为主要材料包裹幽门螺杆菌(HP)全菌超声蛋白抗原,制备新型HP疫苗制剂。方法将海藻酸钠、壳聚糖、大豆油以及HP超声全菌抗原制备成W/O/W型微球。通过扫描电镜、粒径分布仪等检测微球粒径大小;药物溶出度仪、BCA蛋... 目的以壳聚糖、海藻酸钠为主要材料包裹幽门螺杆菌(HP)全菌超声蛋白抗原,制备新型HP疫苗制剂。方法将海藻酸钠、壳聚糖、大豆油以及HP超声全菌抗原制备成W/O/W型微球。通过扫描电镜、粒径分布仪等检测微球粒径大小;药物溶出度仪、BCA蛋白试剂盒检测微球的蛋白包封率及药物释放速率。结果所制备的微球形态规则,平均粒径3.33μm;蛋白包封率约为64.8%;微球呈显著缓释模式,缓释时间可达6d。结论壳聚糖-海藻酸钠微球包裹全菌蛋白可以作为HP疫苗的新型缓释制剂。 展开更多

关键词 微球 幽门螺杆菌 壳聚糖 海藻酸钠 表征

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壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球疫苗制备工艺研究 被引量：5

2

作者 王毅超 邹全明 +3 位作者 任建敏 郭刚 解庆华 刘健 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第13期1285-1287,共3页

目的改变壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球制备中的各项参数,最终确认微球制备工艺。方法根据形成乳液的溶解性、流动性及黏稠度,选择微球制备过程中海藻酸钠(AGS)浓度及植物油与海藻酸钠的配比,通过比较形成微球的粒径大小,... 目的改变壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球制备中的各项参数,最终确认微球制备工艺。方法根据形成乳液的溶解性、流动性及黏稠度,选择微球制备过程中海藻酸钠(AGS)浓度及植物油与海藻酸钠的配比,通过比较形成微球的粒径大小,最终确定微球制备中CaCl2溶液的滴定程序及搅拌速率、搅拌时间等实验参数。结果确定了AGS乳液浓度为2%、植物油与AGS乳液配比为2∶8、CaCl2溶液反滴滴定法等MS制备工艺,并确定了搅拌速率800r/min、药物浓度2mg/ml、制备温度25℃、搅拌时间30min等参数。结论依照上述参数可以制备出符合实验要求的微球疫苗。 展开更多

关键词 微球 工艺 幽门螺杆菌

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新月柄杆菌RsaA分泌系统用于大肠杆菌胞外递送重组蛋白的初步研究 被引量：1

3

作者 宁亚蕾 周立雄 +4 位作者 肖斌 张卫军 曾浩 毛旭虎 邹全明 《生物技术通讯》 CAS 2008年第2期175-180,共6页

目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报... 目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子、大肠杆菌M15为宿主菌,诱导表达后通过Western Blotting检测培养上清中GFP的表达。结果:获得了与设计完全一致的pQABPS载体,利用该载体系统,在培养上清中报告分子GFP的表达明显增加,且是通过特异的RsaA外运机制被分泌至胞外的,而非渗漏表达或简单的信号肽引导。结论:在大肠杆菌中重现了RsaA分泌系统的外运功能,为该系统在基因工程领域的应用研究打下了良好基础。 展开更多

关键词 新月柄杆菌 RsaA分泌系统 大肠杆菌 胞外分泌 表达载体

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肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究

4

作者 程建平 邹全明 +3 位作者 毛旭虎 易勇 王庆旭 马颖 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期828-832,共5页

目的研究肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力。方法将60只BALB／c小鼠平均分为5组，分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组，用注射方式免疫3次，抗原和佐剂均为每次100μg／只。采集免... 目的研究肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力。方法将60只BALB／c小鼠平均分为5组，分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组，用注射方式免疫3次，抗原和佐剂均为每次100μg／只。采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体，末次免疫10d后以10^9CFU的O157全菌液经口感染小鼠。观察小鼠临床症状及死亡情况，检测粪便与肠道带菌情况，并作病理组织学检测。结果各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加，感染后各组小鼠均有死亡，IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73％、64％、36％和91％。未病死小鼠粪便排菌情况：对照组22d，实验组为5—14d。肠道带菌情况：对照组阳性率为100％，实验组为25％-83％。病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变。结论IntiminC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用，而联合免疫效果又大于单独免疫。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157:H7 紧密黏附素 志贺毒素ⅡB亚单位 EHEC溶血素 基因工程疫苗

原文传递

基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表达研究

5

作者 宁亚蕾 周立雄 +4 位作者 毛旭虎 张卫军 程琰 余抒 邹全明 《生物技术通讯》 CAS 2008年第3期353-357,共5页

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵... 目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将获得的RsaA系统元件编码序列和异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒,构建新的胞外分泌表达质粒pQABP2S;以大肠杆菌为宿主菌诱导表达EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通过Westernblot检测目标蛋白在培养上清中的表达。结果:获得了新的胞外分泌表达载体pQABP2S;与对照相比,该载体宿主系统培养上清中目标蛋白EspA及EspA-IL-24的表达量明显增加。结论:在大肠杆菌中通过RsaA分泌系统可实现分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特异性分泌表达,进一步证实该分泌表达策略的有效性和通用性;调整调控序列以优化分泌系统的尝试,为此类基因工程技术平台的开发提供了借鉴。 展开更多

关键词 新月柄杆菌 RsaA分泌系统 大肠杆菌分泌蛋白A 白细胞介素-24 分泌表达 表达载体 大肠杆菌

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蛋白质抗原表位研究进展 被引量：50

6

作者 李海侠 毛旭虎 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期54-58,共5页

本文综述了蛋白质抗原表位的种类及特性,回顾了近几年来实验确定和理论预测B细胞蛋白质抗原表位的常用方法,介绍了表位作图和表位疫苗的研究现状。

关键词 抗原表位 噬菌体随机肽库 表位预测 表位作图 表位疫苗

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幽门螺杆菌疫苗的研究进展 被引量：19

7

作者 邹全明 《胃肠病学》 2007年第9期567-570,共4页

幽门螺杆菌(H.pylori)是人类上消化道疾病的重要致病菌,为慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡的主要病因。目前临床治疗尚存在诸多不足,研制疫苗对预防和控制H.pylori感染具有十分重要的意义。经过20余年的发展,H.pylori疫苗在动物模型建... 幽门螺杆菌(H.pylori)是人类上消化道疾病的重要致病菌,为慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡的主要病因。目前临床治疗尚存在诸多不足,研制疫苗对预防和控制H.pylori感染具有十分重要的意义。经过20余年的发展,H.pylori疫苗在动物模型建立、候选抗原的选择、佐剂和投递方式的优化等方面均已取得了较大突破。本文主要就全菌疫苗、亚单位疫苗(基因工程疫苗)、活载体疫苗和DNA疫苗四种类型的H.pylori疫苗的研究现状作一概述。 展开更多

关键词 螺杆菌 幽门 疫苗 进展

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炎症与肿瘤的关系研究进展 被引量：15

8

作者 刘真 肖斌 +1 位作者 毛旭虎 邹全明 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第3期591-594,554,共5页

炎症与肿瘤关系密切,慢性炎症与1/4以上癌症发生相关。炎症微环境中细胞因子,自由基,前列腺素,生长因子等炎性应答介质能诱导DNA甲基化,抑癌基因点突变和翻译后修饰等基因和表观学变化,引起维持正常细胞内环境稳定关键通路的改变并导致... 炎症与肿瘤关系密切,慢性炎症与1/4以上癌症发生相关。炎症微环境中细胞因子,自由基,前列腺素,生长因子等炎性应答介质能诱导DNA甲基化,抑癌基因点突变和翻译后修饰等基因和表观学变化,引起维持正常细胞内环境稳定关键通路的改变并导致癌症的发生和演进;近年来,对炎症中microRNA和免疫应答相互作用的研究进一步加深了人们对炎症与肿瘤相关性的了解。本文就炎症与肿瘤的间的桥梁分子予以综述,鉴定这些关键细胞成分及相互通路特异性的改变能为炎症相关性肿瘤的早期诊断、预防和治疗提供分子靶标。 展开更多

关键词 炎症 肿瘤 炎性介质 MICRORNA

原文传递

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测方法研究进展 被引量：11

9

作者 丁红雷 毛旭虎 +1 位作者 邹全明 王豪举 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2005年第8期523-525,共3页

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新型人类病原菌,由它引起的感染严重威胁着人类健康和生命。对其进行分子流行病学调查,可为该病的预防、诊断和治疗提供有力的依据和参考。现就目前常用的几种大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测技术作一简介。

关键词 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 分子生物学 检测方法 病原菌

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肠出血性大肠杆菌O157的实验室分离与鉴定方法 被引量：6

10

作者 丁红雷 毛旭虎 +1 位作者 王豪举 邹全明 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期242-244,共3页

大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌。对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义。本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的... 大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌。对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义。本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的方法进行了比较。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157 分离鉴定 选择性培养基

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幽门螺杆菌对天然植物成分诱导耐药反应的实验研究 被引量：7

11

作者 赵小勇 邹全明 +3 位作者 郭刚 刘开云 李玉红 解庆华 《中国药业》 CAS 2006年第18期8-10,共3页

目的探讨幽门螺杆菌(HP)是否会对乳香胶、大蒜油和黄连提取物产生耐药。方法采用多步诱导法进行HP的体外耐药试验,另选临床耐药率很高的甲硝唑和目前抗HP疗效好的克拉霉素作同步试验;观察在药物浓度逐渐增加的培养基上转种的HP最低抑菌... 目的探讨幽门螺杆菌(HP)是否会对乳香胶、大蒜油和黄连提取物产生耐药。方法采用多步诱导法进行HP的体外耐药试验,另选临床耐药率很高的甲硝唑和目前抗HP疗效好的克拉霉素作同步试验;观察在药物浓度逐渐增加的培养基上转种的HP最低抑菌浓度(MIC)的变化,将敏感性下降的诱导株在无药培养基上转种3次后检测MIC值,测定乳香胶、大蒜油和黄连提取物对甲硝唑敏感性下降诱导株的MIC值。结果在多步诱导培养过程中,未诱导出对乳香胶、大蒜油和黄连提取物耐药的HP菌株,而在含64倍MIC甲硝唑的培养基上菌株仍能生长。在培养过程中,菌株对甲硝唑的敏感性逐渐下降,MIC值逐渐升高至64μg/mL;甲硝唑耐药株(MR)在无药培养基上转种10次后得到的MR'的MIC值不变。乳香胶、大蒜油和黄连提取物对MR的MIC没有影响。结论HP对乳香胶、大蒜油和黄连提取物不易产生耐药性,且甲硝唑耐药株对三者仍保持敏感。乳香胶、大蒜油和黄连提取物是有良好开发前景的抗HP感染的天然药物。 展开更多

关键词 乳香胶 大蒜油 黄连提取物 幽门螺杆菌 体外诱导耐药

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幽门螺杆菌UreB单克隆抗体的制备及尿素酶活性抑制能力的研究 被引量：6

12

作者 吴亚男 邹全明 +2 位作者 罗萍 郭刚 王晓勤 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期393-396,共4页

目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力。方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Westernblot检测mAb的特异性。将尿素酶与... 目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力。方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Westernblot检测mAb的特异性。将尿素酶与单克隆抗体预孵育后加入含有尿素和酚红的缓冲液,于550nm测定单克隆抗体对尿素酶活性的抑制能力。结果得到5株稳定分泌抗UreB的单克隆抗体的杂交瘤细胞1D5、9E1、3A2、1D6、6E6。测定抗体亚型1D5,9E1,3A2为IgG1,1D6、6E6为IgG2a,亲和常数分别为4×108、4.6×108、2.8×108、2×109、3×109L/mol。Westernblot鉴定5种单克隆抗体均能和重组UreB及全菌蛋白中的UreB抗原发生特异性结合,且均不与肠道常见菌发生交叉反应。5株单克隆抗体中只有6E6具有对尿素酶活性的抑制作用,且抑制率与单克隆抗体剂量相关。结论制备了5株稳定分泌抗UreB抗体的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体效价高且特异性好,其中6E6能抑制尿素酶活性。本研究为探讨尿素酶的作用机制、UreB的纯化及Hp的临床诊断和治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 尿素酶B亚单位 单克隆抗体 尿素酶活性

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单纯疱疹病毒型特异性的鉴别诊断 被引量：6

13

作者 姬小薇 毛旭虎 邹全明 《国际检验医学杂志》 CAS 2006年第8期739-740,共2页

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法... 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法作一综述。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒属 疱疹病毒Ⅰ型 人 疱疹病毒Ⅱ型 人 诊断 鉴别

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幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究 被引量：5

14

作者 高原 邹全明 张卫军 《中国药业》 CAS 2006年第18期11-13,共3页

目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构... 目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-napA-LTB,转化E.coliBL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用亲和层析柱ChelatingSepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westernblot鉴定,GM1-ELISA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合。口服免疫BALB/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约760bp的napA-LTB融合基因,其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的30%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约29000,纯化后纯度大于90%。Westernblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性。动物实验表明,分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG,IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于无佐剂单一亚单位疫苗。结论所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 中性粒细胞激活蛋白 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 疫苗 分子内佐剂

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幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定 被引量：4

15

作者 周维英 吴超 +2 位作者 石云 张卫军 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-125,130,共6页

目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编... 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合。结论HpHpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 黏附素 尿素酶B亚单位 大肠杆菌不耐热毒素B亚单位

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段的纯化及活性研究 被引量：5

16

作者 袁小澎 邹全明 +4 位作者 柏杨 杨珺 郭鹰 张卫军 刘正祥 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期959-962,共4页

目的建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法。方法应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,... 目的建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法。方法应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,尿素酶活性阻断试验对纯化后功能片段进行活性鉴定。结果IPTG诱导后目的蛋白高表达,包涵体鉴定试验证实目的蛋白以可溶形式存在宿主细胞中,优化后方案得到目的蛋白纯度>90%且能被尿素酶B免疫的兔血清识别,纯化后蛋白免疫家兔后产生兔抗血清能够特异性中和Hp尿素酶活性。结论成功建立了尿素酶功能片段的纯化方法。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 蛋白纯化 尿素酶B

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幽门螺杆菌双亚单位表位疫苗的构建及免疫原性研究 被引量：5

17

作者 周维英 吴超 +1 位作者 石云 邹全明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期33-37,66,共6页

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)双亚基多表位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法设计引物采用PCR法将黏附素(HpaA)的一个B细胞表位与尿素酶B亚单位的三个TH表位及一个B细胞表位串联起来(... 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)双亚基多表位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法设计引物采用PCR法将黏附素(HpaA)的一个B细胞表位与尿素酶B亚单位的三个TH表位及一个B细胞表位串联起来(HUepi),表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白采用阳离子和疏水层析进行纯化,经鉴定后皮下免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果PCR法扩增出了约233bp的目的片段;原核表达质粒pET-22b(+)-HUepi经酶切及测序鉴定,目的基因序列与设计序列一致;重组蛋白HUepi表达率约20.0%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约8.38×103Dr,破菌后电泳证实目的蛋白以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度大于97.6%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,TH表位多肽、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论Hp HpaA、UreB双亚基表位疫苗HUepi经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫原性。为新一代Hp疫苗的研制奠定实验基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp) 粘附素(HpaA) 尿素酶B亚单位(UreB) 表位疫苗

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小鼠骨髓树突状细胞的体外诱导培养及生物学特性分析 被引量：2

18

作者 吴超 石云 +1 位作者 王晓勤 邹全明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期398-400,共3页

目的探讨从小鼠骨髓中体外诱导培养树突状细胞(DC)的可行性并进行生物学特性分析与鉴定。方法用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,倒置显微镜动态观察形态学变化,扫描电镜观察其表面... 目的探讨从小鼠骨髓中体外诱导培养树突状细胞(DC)的可行性并进行生物学特性分析与鉴定。方法用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,倒置显微镜动态观察形态学变化,扫描电镜观察其表面形态特征,流式细胞术分析细胞表面分子,同时进行抗原吞噬功能和刺激初始型T淋巴细胞增殖能力的检测。结果经体外诱导培养可获得大量未成熟和成熟DC,出现典型树突状形态。未成熟DC的细胞表型为CD11chigh、MHCⅡlow、CD86low,具有极强的抗原吞噬能力;未成熟DC经LPS刺激培养后可转变为成熟DC,细胞表型为CD11chigh、MHCⅡhigh、CD86high,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC。 展开更多

关键词 树突细胞 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 细胞培养

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利用α-溶血素系统分泌表达重组人白介素-6 被引量：3

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作者 宁亚蕾 周立雄 +4 位作者 张卫军 鲁东水 肖斌 毛旭虎 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期380-384,共5页

目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能... 目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pISQ,转化E.coliTop10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达。结果获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/E.coli Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带。结论大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人白介素6 α-溶血素分泌系统 hly操纵子 胞外分泌表达

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产志贺毒素大肠杆菌stx2a和stx2b的血清和牛奶抗体检测 被引量：3

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作者 丁红雷 王豪举 +4 位作者 毛旭虎 朱凤才 邹全明 石云 周维英 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期63-67,共5页

于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N>2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a... 于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N>2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a抗体阳性和stx2b抗体阳性血清各21份(3.93%);415份商品猪血清检测到stx2a抗体阳性血清4份(0.96%),stx2b抗体阳性血清2份(0.48%);326份新鲜牛奶检测到stx2a抗体阳性血清25份(7.46%),stx2b抗体阳性血清21份(6.44%).牛奶中stx2抗体阳性率最高,健康人群血清次之,商品猪血清的阳性率最低.由此表明重庆市STEC菌株中携带stx2基因. 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠杆菌 stx2 ELISA

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