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人胸苷激酶基因cDNA克隆 被引量：7
1
作者 丁克祥 郑永晨 +4 位作者 吴朝阳 王攀 张杰 胡燕祝 吕沅津 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期932-934,共3页
目的　克隆人胸苷激酶基因cDNA。方法采用逆转录PCR方法扩增胸苷激酶cDNA ,用十二烷基氟波酯 (TPA)刺激人外周血细胞的mRNA为模板 ;扩增的PCR产物经TA克隆重组和内切酶鉴定 ,以及DNA序列分析确定克隆基因的序列。结果经逆转录PCR扩增出... 目的　克隆人胸苷激酶基因cDNA。方法采用逆转录PCR方法扩增胸苷激酶cDNA ,用十二烷基氟波酯 (TPA)刺激人外周血细胞的mRNA为模板 ;扩增的PCR产物经TA克隆重组和内切酶鉴定 ,以及DNA序列分析确定克隆基因的序列。结果经逆转录PCR扩增出一个 70 0bp左右的DNA片段 ,TA克隆出现 1 6个阳性克隆 ,选择其中的一个克隆 (TKTA8)进行DNA序列分析 ,序列分析结果表明TKTA8克隆重组的序列是人胸苷激酶的cDNA序列。结论从外周血细胞中得到了hTK完整的开放读码框架。 展开更多
关键词 胸苷激酶基因 逆转录PCR 扩增 DNA序列分析 克隆基因 人外周血 读码框架 阳性克隆 CDNA克隆 PCR产物
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人胸苷激酶单克隆抗体的制备 被引量：5
2
作者 丁克祥 郑永晨 +4 位作者 吴朝阳 王攀 张杰 吕沅津 胡燕祝 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期54-55,共2页
目的制备人胸苷激酶单克隆抗体。方法用大肠杆菌表达和纯化的人胸苷激酶免疫Balb/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养和ELISA筛选阳性克隆,阳性克隆杂交瘤注入小鼠腹腔制备腹水,用ELISA和免疫组化鉴定胸苷激酶单克隆抗... 目的制备人胸苷激酶单克隆抗体。方法用大肠杆菌表达和纯化的人胸苷激酶免疫Balb/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养和ELISA筛选阳性克隆,阳性克隆杂交瘤注入小鼠腹腔制备腹水,用ELISA和免疫组化鉴定胸苷激酶单克隆抗体。结果经细胞融合和筛选得到37个阳性单克隆杂交瘤,其中有二株杂交瘤可以稳定地产生人胸苷激酶的特异性抗体,制备的腹水中有高效价的抗体活性。结论用原核表达的人胸苷激酶免疫小鼠可以制备出人胸苷激酶特异性单克隆抗体。 展开更多
关键词 单克隆抗体 人胸苷激酶 杂交瘤
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人胸苷激酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1
3
作者 丁克祥 郑永晨 +4 位作者 吴朝阳 王攀 张杰 胡燕祝 吕沅津 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1029-1031,共3页
目的　在大肠杆菌中表达人胸苷激酶 (hTK)。方法　用内切酶将hTKTA克隆中的hTK基因切下 ,并与同样内切酶切的载体PET2 8a+连接 ,转化大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,酶切和DNA序列分析鉴定 ,用IPTG诱导培养阳性克隆 ;SDS -PAGE鉴定hTK在大肠... 目的　在大肠杆菌中表达人胸苷激酶 (hTK)。方法　用内切酶将hTKTA克隆中的hTK基因切下 ,并与同样内切酶切的载体PET2 8a+连接 ,转化大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,酶切和DNA序列分析鉴定 ,用IPTG诱导培养阳性克隆 ;SDS -PAGE鉴定hTK在大肠杆菌中的表达。结论　hTK基因重组入PET2 8a +的EcoRI和XhoI位点 ,IPTG可以明显诱导hTK在大肠杆菌中表达。 展开更多
关键词 人胸苷激酶 大肠杆菌 DNA重组
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