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鳜鱼(Siniperca chuatsi)幽门垂中两种胰蛋白酶的cDNA克隆及其生物信息学分析 被引量：2
1
作者 杜翠红 苏文金 +3 位作者 卢宝驹 刘光明 邱晓燕 曹敏杰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期221-228,共8页
采用RT-PCR、3′-RACE及5′-RACE技术从鳜鱼幽门垂组织中克隆了两种胰蛋白酶(分别命名为TRS-A与TRS-B)cDNA全长序列。将测序结果递交GenBank数据库,分别获得登录号为ACD70339和ACD70340。采用生物信息学的方法和工具预测了鳜鱼胰蛋白酶... 采用RT-PCR、3′-RACE及5′-RACE技术从鳜鱼幽门垂组织中克隆了两种胰蛋白酶(分别命名为TRS-A与TRS-B)cDNA全长序列。将测序结果递交GenBank数据库,分别获得登录号为ACD70339和ACD70340。采用生物信息学的方法和工具预测了鳜鱼胰蛋白酶的理化参数及其高级结构,并构建了系统进化树。结果表明:(1)TRS-A和TRS-B的cDNA开放阅读框编码的蛋白序列中均含有一段长度为15个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸残基组成的激活肽、222个氨基酸残基组成的成熟蛋白区域;(2)TRS-A成熟蛋白的相对分子量为24.1kDa、理论等电点为5.69,TRS-B的相对分子量为24.2kDa、理论等电点为5.75;(3)建立了TRS-A和TRS-B的三维结构模型,预测了其活性位点及12个半胱氨酸残基形成二硫键的位置。 展开更多
关键词 鳜鱼 胰蛋白酶 基因克隆 生物信息学
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水产品主要过敏原的模拟胃液消化实验的条件优化 被引量：2
2
作者 刘光明 黄园园 +3 位作者 蔡秋凤 翁凌 苏文金 曹敏杰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期811-816,共6页
采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)方法,通过体外模拟消化实验分析水产品主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)和小清蛋白(Parvalbumin,PV)的消化特性,主要研究酶/蛋白的比值、pH值对模拟胃液(... 采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)方法,通过体外模拟消化实验分析水产品主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)和小清蛋白(Parvalbumin,PV)的消化特性,主要研究酶/蛋白的比值、pH值对模拟胃液(SGF)消化过敏蛋白稳定性的影响。结果表明,提高胃蛋白酶的相对量使甲壳类水产品TM从消化稳定性转变成消化不稳定性,但是TM具有较强的消化稳定性,当酶/蛋白比值提高到10/1时,一些稳定的降解条带仍未被完全分解;当pH≥5时胃液消化会受到抑制,甲壳类水产品TM和鱼类PV均不会被消化分解。在优化条件(0.33U酶/μg蛋白,pH3.5)的SGF消化试验中,甲壳类水产品TM具有较高的消化稳定性,而鱼类PV能被较快分解;甲壳类水产品过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,其降解产物仍可能引起过敏反应的发生。 展开更多
关键词 水产品过敏原 模拟胃液消化 原肌球蛋白 小清蛋白 SDS-PAGE WESTERN BLOT
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乌鳢(Channa argus)胃蛋白酶原基因克隆及其生物信息学分析 被引量：1
3
作者 杜翠红 黄圆圆 +2 位作者 蔡秋凤 郑志松 曹敏杰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期733-738,共6页
采用RT-PCR和3′RACE技术,首次从乌鳢胃组织中克隆了一种胃蛋白酶原基因。测序结果表明,该基因开放阅读框全长1086bp编码361个氨基酸,递交GeneBank数据库,获得登录号为GQ303143。系统进化关系分析表明,该乌鳢胃蛋白酶原氨基酸序列与鳜... 采用RT-PCR和3′RACE技术,首次从乌鳢胃组织中克隆了一种胃蛋白酶原基因。测序结果表明,该基因开放阅读框全长1086bp编码361个氨基酸,递交GeneBank数据库,获得登录号为GQ303143。系统进化关系分析表明,该乌鳢胃蛋白酶原氨基酸序列与鳜鱼类的胃蛋白酶原A2亲缘关系最近,从而推测本研究克隆的乌鳢胃蛋白酶原属于胃蛋白酶原A2类。采用生物信息学的方法和工具预测了该乌鳢胃蛋白酶原的理化参数及其高级结构,结果表明,该乌鳢胃蛋白酶原的相对分子量为38.8kDa,理论等电点为4.56。采用同源建模法建立了乌鳢胃蛋白酶原的三维结构模型,预测了其活性位点及6个必需半胱氨酸残基的位置。该研究结果为进一步研究乌鳢胃蛋白酶的结构和功能关系奠定了基础。 展开更多
关键词 乌鳢 胃蛋白酶原 基因克隆 生物信息学
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