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福建省2018年~2020年非免疫鸡群滑液囊支原体感染的流行病学调查 被引量：11
1
作者 王晨燕 罗忠宝 +4 位作者 黄宝钦 江斌 张世忠 邵国青 侯博 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期697-703,共7页
自2010年以来,滑液囊支原体(MS)在我国不同种类和品种鸡群中的感染率持续升高。为调查2018年~2020年福建省肉鸡和蛋鸡群MS感染情况和感染规律,本研究采用商品化ELISA抗体检测试剂盒对1 668份非免疫蛋鸡血清样品进行MS抗体检测;采用本实... 自2010年以来,滑液囊支原体(MS)在我国不同种类和品种鸡群中的感染率持续升高。为调查2018年~2020年福建省肉鸡和蛋鸡群MS感染情况和感染规律,本研究采用商品化ELISA抗体检测试剂盒对1 668份非免疫蛋鸡血清样品进行MS抗体检测;采用本实验室建立的Taq Man qPCR法对2 777份白羽肉鸡上颚裂拭子样品进行MS检测;对3个规模化养殖场的非免疫蛋鸡群进行MS抗体和病原持续跟踪检测,分析MS抗体产生与MS感染之间的关系;并对临床MS分离株的vlhA基因进行遗传进化分析,以了解MS感染菌株的遗传背景和来源情况。结果显示:福建地区2018年~2020年非免疫蛋鸡群MS抗体总阳性率为64.09%(1 069/1 668),非免疫肉鸡群病原总阳性率为49.62%(1 378/2 777);MS抗体阳性率和病原阳性率在肉鸡和蛋鸡中均表现为随日龄增加而升高。各年龄段蛋鸡MS抗体均为阳性,1月龄蛋鸡MS抗体阳性率为4.4%,2、3月龄蛋鸡MS抗体阳性率显著上升,4月龄蛋鸡MS抗体阳性率大于50%,并可持续至7月龄~15月龄;白羽肉鸡在8日龄~14日龄时MS阳性率开始显著升高,22日龄~28日龄时阳性率超过50%,至36日龄~42日龄时达到92.17%;通过对3个非免疫蛋鸡群的MS抗体和病原持续跟踪检测发现,同一时间点抗体阳性率显著低于病原阳性率;通过vlhA基因遗传进化分析表明,福建地区MS分离株属于不同的进化分支,其来源复杂。本研究结果表明,福建地区2018年~2020年蛋鸡群和肉鸡群MS感染率高,存在严重的水平传播,且同时存在垂直传播的可能性,MS感染菌株来源复杂,临床应采用Taq Man qPCR法对鸡群开展早期MS感染监测。因此,本研究有助于了解和掌握MS在鸡群中的感染情况和规律,为及时采取防控措施降低鸡群MS感染率并提高防治效果奠定了基础。 展开更多
关键词 滑液囊支原体 血清学 病原检测 感染规律 进化
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鸡传染性喉气管炎病毒WF03株关键抗原基因和毒力基因的遗传演化与致病性分析 被引量：1
2
作者 张翼 王晨燕 +2 位作者 杨骁 邵国青 侯博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3435-3444,共10页
本研究旨在分析近年分离自鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)活疫苗免疫失败鸡群的ILTV WF03株的部分关键抗原基因及毒力基因的变异情况和对鸡的致病力,为ILTV活疫苗的有效性评价提供一个稳定、可靠的攻毒毒株。通过ILTV临床分离株WF03的部分... 本研究旨在分析近年分离自鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)活疫苗免疫失败鸡群的ILTV WF03株的部分关键抗原基因及毒力基因的变异情况和对鸡的致病力,为ILTV活疫苗的有效性评价提供一个稳定、可靠的攻毒毒株。通过ILTV临床分离株WF03的部分免疫原性基因和毒力相关基因进行克隆和测序,并与疫苗株和早期分离株进行遗传进化分析,同时在28和56日龄SPF鸡测定了该毒株的致病力。遗传进化分析结果表明:WF03株主要免疫原性基因和毒力相关基因与我国早期的分离株和现在部分商品化的疫苗株处在同一个大的进化分支,亲缘关系较近。致病力试验显示WF03株以10^(4.5)、10^(4).0、10^(3.5)和10^(3.0)EID_(50)·羽^(-1)的剂量感染28日龄SPF鸡后发病率分别为100%、100%、95%和85%,死亡率分别为45%、30%、35%和10%;以10^(4).0 EID_(50)·羽^(-1)的剂量感染56日龄SPF鸡的发病率和死亡率分别为100%和27.3%;所有发病鸡临床症状主要表现为咳血、呼吸困难、张口呼吸等典型的喉气管炎发病症状。结果表明:ILTV临床分离株WF03主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,属于强致病力毒株,其对SPF鸡的发病能力稳定,在10^(4.5)、10^(4).0、10^(3.5)和10^(3.0)EID_(50)·羽^(-1)攻毒剂量时均可以使80%以上的鸡发病。结果提示目前我国鸡群中存在着强致病力ILTV毒株流行,且WF03株可以作为疫苗效力评价的攻毒毒株,这将丰富我国当前ILTV毒株的流行病学数据库。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 遗传特征 致病力
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博落回提取物和抗生素联合用药对蛋种鸡自然感染滑液囊支原体的治疗效果分析 被引量：1
3
作者 王晨燕 周峰 +1 位作者 邵国青 侯博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4827-4838,共12页
旨在分析博落回提取物和抗生素联合用药对蛋种鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synovia,MS)自然感染病例的治疗效果。选取80只124日龄的海兰褐父母代蛋种鸡,随机分为博落回提取物组(G1)、无处理组(G2)、盐酸多西环素+博落回提取物组(G3)、林... 旨在分析博落回提取物和抗生素联合用药对蛋种鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synovia,MS)自然感染病例的治疗效果。选取80只124日龄的海兰褐父母代蛋种鸡,随机分为博落回提取物组(G1)、无处理组(G2)、盐酸多西环素+博落回提取物组(G3)、林可-大观霉素+博落回提取物组(G4)、酒石酸泰乐菌素+博落回提取物组(G5)、酒石酸泰万菌素+博落回提取物组(G6)、磷酸替米考星+博落回提取物组(G7)、延胡索酸泰妙菌素+博落回提取物组(G8)。G2组正常饮食和饮水,其余各组饲料中全程添加博落回提取物,此外G3~G8组通过饮水进行抗生素给药,连续使用5 d,停3 d后,再使用5 d。各组在用药前以及用药后第17天、第24天、第38天和第59天分别采集上颚裂拭子,并在用药后第59天采集输卵管膨大部和子宫部拭子进行MS病原荧光定量PCR检测。各组在用药前以及用药后第17天、第31天和第59天分别采血进行MS抗体检测。在用药后第59天剖检观察并统计包括气囊炎、脚垫肿胀和输卵管炎的发病率,同时采集气管、输卵管膨大部和子宫部固定并进行病理损伤观察。开产后,统计6周的周日均产蛋数,并测定各组第4、5和6周的蛋品质。结果显示:1)MS病原检测结果表明:用药后第17天和第24天,G4组的上颚裂拭子MS载量相较于G2组分别极显著和显著下降(P<0.001和P<0.01),用药后第17天,G6和G7组的上颚裂拭子MS载量相较于G2组显著下降(P<0.01);在用药后第17天和第24天,用药组上颚裂拭子的MS病原阳性率(G3和G5组除外)均下降,在用药后第59天,用药组(G4、G6和G8组除外)阳性率都恢复到用药前水平;G2和G8组的输卵管膨大部中MS病原阳性率为20%,G4、G5和G7组的阳性率均为10%,而G1、G3和G6组的输卵管膨大部以及各组子宫部均未检测到MS病原。2)MS抗体检测结果表明:G1和G4组用药后第59天抗体平均滴度较用药前下降60%左右。3)病理损伤观察发 展开更多
关键词 滑液囊支原体 抗生素 博落回 药物治疗
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运用免疫蛋白质组学方法筛选副猪嗜血杆菌血清4型菌株的免疫反应性蛋白 被引量：2
4
作者 王晨燕 周伦江 +3 位作者 王隆柏 车勇良 吴学敏 陈如敬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1511-1515,共5页
选取2株副猪嗜血杆菌血清4型菌株(A、B菌株),采用蛋白提纯和双向电泳技术获得高分辨率的蛋白胶。通过比对蛋白胶和免疫印迹膜上的蛋白反应点,并切取相应蛋白点进行质谱鉴定。根据质谱鉴定结果,菌株A和B有13个相同的蛋白点,其中8个蛋白... 选取2株副猪嗜血杆菌血清4型菌株(A、B菌株),采用蛋白提纯和双向电泳技术获得高分辨率的蛋白胶。通过比对蛋白胶和免疫印迹膜上的蛋白反应点,并切取相应蛋白点进行质谱鉴定。根据质谱鉴定结果,菌株A和B有13个相同的蛋白点,其中8个蛋白点是新发现的具有免疫原性的蛋白点,它们分别是二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、dppA、过氧化氢酶(CAT)、蛋白酶(P)、转酮醇酶(TK)、延长因子(EF-Ts)、周质丝氨酸蛋白水解酶(SP)、2,3-二磷酸甘油酸变位酶(BPGM)。在2株副猪嗜血杆菌血清4型菌株中发现有13个相同的免疫反应性蛋白,DLDH、dppA、CAT、P、TK、EF-Ts、SP和BPGM是新发现的免疫原性蛋白,它们作为疫苗候选抗原有待进一步研究。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 双向电泳 免疫蛋白质组学
原文传递
猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：2
5
作者 王晨燕 王隆柏 +3 位作者 吴学敏 陈如敬 车勇良 周伦江 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第8期823-827,共5页
采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL^(-1),37℃包被2h,采... 采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL^(-1),37℃包被2h,采用5%BSA封闭液封闭1h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91μg·mL^(-1),酶标二抗稀释度为1∶2000,以OD450nm≥0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30μg·mL^(-1)(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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副猪嗜血杆菌双向电泳方法的建立和优化
6
作者 王晨燕 周伦江 +3 位作者 王隆柏 车勇良 吴学敏 陈如敬 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第6期549-553,共5页
为建立副猪嗜血杆菌蛋白质组学双向电泳方法,从裂解液配方、样品前处理、上样量以及聚焦时间对副猪嗜血杆菌临床分离株进行双向电泳体系的优化。通过超声-裂解(7mol·L-1尿素裂解液)-离心法提取全蛋白,结合2-D clean up试剂盒纯化样... 为建立副猪嗜血杆菌蛋白质组学双向电泳方法,从裂解液配方、样品前处理、上样量以及聚焦时间对副猪嗜血杆菌临床分离株进行双向电泳体系的优化。通过超声-裂解(7mol·L-1尿素裂解液)-离心法提取全蛋白,结合2-D clean up试剂盒纯化样品,用银染方法确定了24cm胶条上样量为500μg,一向等电聚焦电压达到60 000Vh,可以获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 双向电泳 优化
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