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植物根际芽胞杆菌菌种资源采集及其具有过水解催化活性水解酶基因的克隆 被引量：1
1
作者 王倩 李欢 +5 位作者 郑琳 贾文敬 黄建忠 李欣 董思圳 舒正玉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期76-87,共12页
[背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过... [背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过水解酶催化活性的水解酶蛋白基因,为后续制备过水解酶及酶法合成过氧乙酸奠定基础。[方法]利用定向筛选培养基,从植物根际及纳豆产品中筛选产蛋白酶芽胞杆菌候选菌株,并利用RFLP及16S rRNA基因对其进行鉴定。从蛋白酶高产芽胞杆菌菌株中克隆枯草杆菌蛋白酶、乙酰木聚糖醋酶和头孢菌素乙酰水解酶的全长基因。[结果]从植物根际土壤及纳豆产品中共分离到85个候选菌株,RFLP及16S rRNA基因鉴定结果表明候选菌株均为芽胞杆菌,分别属于Bacillus subtilis、Bacillus cereus、Bacillus pumilus和Bacillus megaterium四个类群。从B.subtilis NSYT-3克隆的枯草杆菌蛋白酶基因编码的多肽链全长381个氨基酸,从B.pumilus OSLJ-3克隆得到的乙酰基木聚糖酯酶基因编码的多肽链全长320个氨基酸,从B.subtilis NSYT-3克隆的头孢菌素乙酰水解酶基因编码的多肽链全长318个氨基酸,3D结构模拟表明这3个酶蛋白均具有α/β水解酶折叠家族蛋白结构特点。[结论]芽胞杆菌源具过水解催化活性水解酶基因的克隆,为后续开发酶法合成过氧乙酸工艺奠定了基础。 展开更多
关键词 根际细菌 芽胞杆菌 过水解催化活性 枯草杆菌蛋白酶 乙酰木聚糖酯酶 头孢菌素乙酰水解酶
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凤尾菇发酵液抑制枇杷炭疽病菌组分的分离及活性研究 被引量：3
2
作者 李鑫 刘艳如 黄建忠 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第1期56-62,78,共8页
以枇杷炭疽病菌为靶标菌,测定了凤尾菇发酵液的乙酸乙酯和正丁醇萃取物的抑菌作用,对抑菌活性较强的乙酸乙酯萃取物采用硅胶柱和Sephadex LH-20凝胶柱进行分离.结果表明,经硅胶柱分离后获得5个组分,其中F4组分对枇杷炭疽病菌有较强的抑... 以枇杷炭疽病菌为靶标菌,测定了凤尾菇发酵液的乙酸乙酯和正丁醇萃取物的抑菌作用,对抑菌活性较强的乙酸乙酯萃取物采用硅胶柱和Sephadex LH-20凝胶柱进行分离.结果表明,经硅胶柱分离后获得5个组分,其中F4组分对枇杷炭疽病菌有较强的抑菌活性,F4组分再经Sephadex LH-20凝胶柱进一步分离获得3个组分,其中F4-A组分对枇杷炭疽病菌抑菌活性最强.电镜观察结果显示,经F4-A组分处理后的枇杷炭疽病菌菌丝呈不规则的肿大和缢缩,菌丝细胞壁不规则增厚,细胞原生质不均匀,有较大的空腔形成,囊泡增多,这些变化最终导致菌丝细胞解体死亡. 展开更多
关键词 凤尾菇发酵液 枇杷炭疽病菌 柱层析分离 电镜
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理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体 被引量：1
3
作者 刘艳如 赵丙春 +5 位作者 董盼盼 邱黎清 黄建忠 朱晓兰 王作镇 舒正玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1014-1025,共12页
【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;... 【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;通过对突变体的结构信息和自由能变化进行评估,筛选出潜在的有价值的突变体。继而利用基因定点突变技术,构建上述候选突变体的突变基因文库,通过实验筛选出热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。【结果】利用上述方法,从构建的20个脂肪酶LipA突变体中,筛选到热稳定性有显著提高的3个突变体LipA-Asn^(125)Asp、LipA-Asn^(125)Glu和LipA-Gln^(262)Glu。经55°C处理12 min后,上述3个突变体的T1250值较野生型分别提高4.0°C、5.5°C和4.4°C;在55°C下的半衰期较野生型分别提高了2.2倍、3.8倍和2.6倍。【结论】利用生物信息学软件,构建脂肪酶LipA突变体电子文库,结合蛋白质的结构信息,可以快速筛选到热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。 展开更多
关键词 伯克霍尔德菌 脂肪酶A 电子设计与筛选 盐桥 热稳定性突变体
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基于空腔填充效应构建伯克霍尔德菌脂肪酶LipA的热稳定性突变体
4
作者 刘艳如 李鑫 +2 位作者 董盼盼 黄建忠 舒正玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1535-1546,共12页
[目的]中温伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA在工业领域具有重要的应用价值。利用蛋白质工程技术来提高其热稳定性,对开发脂肪酶LipA酶制剂及提高其应用范围及应用效果,具有重要的意义。[方法]利用生物信息学软件Castp、Voronoia和Cave分析L... [目的]中温伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA在工业领域具有重要的应用价值。利用蛋白质工程技术来提高其热稳定性,对开发脂肪酶LipA酶制剂及提高其应用范围及应用效果,具有重要的意义。[方法]利用生物信息学软件Castp、Voronoia和Cave分析LipA分子中存在的空腔及其组成氨基酸残基;利用FoldX软件构建上述氨基酸残基的突变体电子文库,并基于空腔效应(体积变小)、自由能变化值(降低)和空间结构特点等对前述突变体电子文库进行筛选。从突变体电子文库中选择具有代表性的突变体,通过基因工程技术,引入突变。经诱导表达后,实验验证并筛选出热稳定性的突变体。[结果]构建了一个由58个突变体组成的电子文库;并对其中17个代表性的突变体进行了实验验证;筛选到2个热稳定性有明显提高的突变体LipA-His^15Pro和LipA-Ala^210Val;其叠加突变体LipA-His^15Pro/Ala^210Val的T50^12较野生型LipA提高了8℃,在55℃下的半衰期较野生型脂肪酶LipA提高了23.1倍。[结论]基于空腔填充技术构建热稳定性伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA突变体,是一种行之有效的策略。 展开更多
关键词 伯克霍尔德菌 脂肪酶LipA 空腔填充效应 T50^12 半衰期
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