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题名双内标PCR-ELISA定量检测技术的建立
被引量：4
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作者
邱育淼
黄义德
张彦定
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机构
福建师范大学生命科学学院发育生物学教研室
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出处
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2007年第7期666-669,共4页
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基金
福建省科技攻关重点项目(2001Z041)
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文摘
目的:建立双内标PCR-ELISA定量检测方法,并进行标定评价.方法:制备了两种与HIV-1野生扩增片段等长的PCR内参照HS和LS,设计了一对HIV-1基因组gag区基因扩增引物,下游引物的5′端用地高辛修饰,可同时扩增115bp左右的野生型和两种内参照片段.设计三套捕获探针,其5′端用生物素(Biotin)修饰,可分别与竞争PCR产物中的野生片段和两种突变型片段杂交.同一反应管内,加入已知量但不同浓度的两种内参照及待测HIV-1DNA标准品,它们将以相同的效率在同一个PCR管内被同时扩增并标记,酶联杂交法进行产物分析,结果用公式计算得出每单位体积待测标本中HIV-1的DNA含量.结果:公式计算出的HIV-1拷贝数与实验加入的HIV-1拷贝数这两组变量具有良好的线性关系,相关系数0.9998,批内变异系数9.48%,结果误差平均在12.58%,无非特异性扩增.结论:建立了双内标PCR-ELISA定量检测方法,该方法具有特异、灵敏、成本低等特点,利于在临床实验上推广.
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关键词
聚合酶链反应
酶联免疫吸附测定
基因定量
HIV-1
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Keywords
PCR
ELISA
gene quantification
HIV-1
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分类号
R512.91
[医药卫生—内科学]
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