敲除SNF1基因提高酿酒酵母乙醇生物合成的研究 被引量：2

1

作者 雷娟娟 王艳尊 +6 位作者 江贤章 高媛媛 李欣 蓝灿华 陈由强 吴松刚 黄建忠 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第2期103-107,共5页

SNF1基因编码的Snf1p对起始受葡萄糖阻遏基因的转录是必需的。通过重叠延伸PCR和两步PCR法合成了两端各带有352bp和345bp与SNF1序列上下游同源的基因敲除组件。将该敲除组件转化至酿酒酵母YS2,获得被loxP-kan-loxP序列组件替换而产生kan... SNF1基因编码的Snf1p对起始受葡萄糖阻遏基因的转录是必需的。通过重叠延伸PCR和两步PCR法合成了两端各带有352bp和345bp与SNF1序列上下游同源的基因敲除组件。将该敲除组件转化至酿酒酵母YS2,获得被loxP-kan-loxP序列组件替换而产生kanr的阳性克隆子。然后将质粒pSH65转入阳性克隆子并诱导表达Cre酶切除kan基因,进而通过传代丢失质粒pSH65后得到SNF1单倍体缺陷型菌株。重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除,得到SNF1双倍体缺陷型菌株YS2-△snf1::loxp-kan-loxp。厌氧发酵试验表明该突变株的乙醇产量较出发菌株YS2提高了8.74%。残糖量试验表明在培养基中葡萄糖消耗殆尽后,突变株相对于出发菌株而言并没有利用乙醇作为碳源,乙醇产量保持稳定未有下降。敲除SNF1基因是提高酿酒酵母生物合成乙醇的一条有效途径。 展开更多

关键词 酿酒酵母 SNF1基因 基因敲除 乙醇

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西双版纳地区热带雨林土壤酸杆菌(Acidobacteria)群体结构和多样性分析 被引量：27

2

作者 王春香 田宝玉 +4 位作者 吕睿瑞 林伟铃 徐燕 黄钦耿 黄建忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期24-29,共6页

酸杆菌(Acidobacteria)广泛存在于自然界,在许多生态系统中发挥重要作用。本文以西双版纳热带森林的土壤为研究对象,提取土壤的总基因组DNA为模板,采用特异引物扩增酸杆菌16SrRNA基因,构建酸杆菌门细菌16SrRNA基因克隆文库,利用限制性... 酸杆菌(Acidobacteria)广泛存在于自然界,在许多生态系统中发挥重要作用。本文以西双版纳热带森林的土壤为研究对象,提取土壤的总基因组DNA为模板,采用特异引物扩增酸杆菌16SrRNA基因,构建酸杆菌门细菌16SrRNA基因克隆文库,利用限制性片段长度多态性(RFLP)对随机克隆进行筛选、测序,对该生态环境下酸杆菌菌群种类和组成进行了系统发育分析。结果表明该地区热带森林土壤的酸杆菌有5个类群:分别为Gp1、Gp2、Gp3、Gp5和1个未知分类的酸杆菌种。其中Gp1是该土壤环境下酸杆菌门的绝对优势菌群,约占整个酸杆菌群的50%-80%,其次是Gp2,占12%-25%,不同采样点酸杆菌类群的分布趋势是一致的。研究表明西双版纳热带森林土壤中的酸杆菌类群具有适应其土壤环境的广泛的多样性。 展开更多

关键词 热带森林 红壤 酸杆菌 RFLP分析 生态多样性

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丝状真菌启动子研究进展 被引量：16

3

作者 林涛 黄建忠 《安徽农业科学》 CAS 2013年第7期2862-2863,2865,共3页

文中综述了丝状真菌中用于开启异源或同源基因表达的启动子的最新进展。分别重点介绍了在丝状真菌中诱导型启动子、组成型启动子及其他一些启动子的应用情况,为在丝状真菌中表达异源基因或一些新基因功能的研究提供帮助。

关键词 丝状真菌 启动子

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多不饱和脂肪酸合成途径研究进展 被引量：10

4

作者 廖灵旋 于昊 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期80-85,共6页

多不饱和脂肪酸在大多数生物体膜生物学和信号传递过程中起着至关重要的作用。最近研究发现,一些深海生物合成多不饱和脂肪酸并非由饱和脂肪酸的延长及脱饱和反应,而是由聚酮合酶途径(polyketide synthase,PKS)直接合成。介绍多不饱和... 多不饱和脂肪酸在大多数生物体膜生物学和信号传递过程中起着至关重要的作用。最近研究发现,一些深海生物合成多不饱和脂肪酸并非由饱和脂肪酸的延长及脱饱和反应,而是由聚酮合酶途径(polyketide synthase,PKS)直接合成。介绍多不饱和脂肪酸的生物合成并总结近年来聚酮合酶这一新途径及其分子机制的研究进展。 展开更多

关键词 多不饱和脂肪酸 合成途径 聚酮合酶

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黑曲霉原生质体诱变选育果胶酶高产菌株 被引量：9

5

作者 陈林 王明兹 +5 位作者 柯崇榕 高媛媛 庄秀红 杨章萍 牛俊巍 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期27-30,共4页

通过UV和NTG诱变筛选获得了2株高产果胶酶突变株。以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为诱变材料,采用1.5%的溶壁酶和1.5%的纤维素酶处理其对数生长期菌丝体2 h获得高质量的原生质体。采用UV25S或50μg/mL NTG诱变30 min,构建原生质体突变库,经... 通过UV和NTG诱变筛选获得了2株高产果胶酶突变株。以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为诱变材料,采用1.5%的溶壁酶和1.5%的纤维素酶处理其对数生长期菌丝体2 h获得高质量的原生质体。采用UV25S或50μg/mL NTG诱变30 min,构建原生质体突变库,经刚果红果胶平板筛选获得果胶酶突变株,通过液体深层培养复筛获得高产突变株EIM6-U11、EIM6-N5,酶活力分别从46 598.08、46 598.08 U/mL提高至68 596.57、68 879.56 U/mL,分别提高了47.21%、47.82%。连续8次传代经发酵测酶活力表明高产突变株EIM6-U11、EIM6-N5具有较高的遗传稳定性。 展开更多

关键词 黑曲霉 果胶酶 原生质体 UV诱变 NTG诱变

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酿酒酵母SNF4基因敲除缺失菌株的构建 被引量：8

6

作者 林晓华 柯崇榕 +4 位作者 吴毕莎 郑永标 李力 陈由强 黄建忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期572-578,共7页

构建一株酿酒酵母SNF4基因缺失菌株并研究其对乙醇产量的影响。扩增带有SNF4基因上下游同源序列和Kanr筛选标记的SNF4基因敲除组件,转化到酿酒酵母YS2获得阳性克隆子,然后将质粒pSH65转到阳性克隆子中,半乳糖诱导pSH65表达Cre酶切除Kan... 构建一株酿酒酵母SNF4基因缺失菌株并研究其对乙醇产量的影响。扩增带有SNF4基因上下游同源序列和Kanr筛选标记的SNF4基因敲除组件,转化到酿酒酵母YS2获得阳性克隆子,然后将质粒pSH65转到阳性克隆子中,半乳糖诱导pSH65表达Cre酶切除Kanr筛选标记,获得SNF4等位基因完全缺失菌株YS2-△SNF4。发酵实验结果表明,缺失菌株YS2-△SNF4乙醇产量较出发菌株提高了7.57%。利用Cre-LoxP系统,成功构建了SNF4等位基因完全缺失菌株并提高乙醇产生量。 展开更多

关键词 酿酒酵母 SNF4 基因敲除

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特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质 被引量：7

7

作者 郑海英 黄平 +3 位作者 蔡少丽 柯崇榕 林国滟 黄建忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期145-153,共9页

【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表... 【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115。【结果】SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达。重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70°C,且在65°C以下具有较好的热稳定性。最适反应pH为6.5,在pH 6.0?7.0之间有较好的稳定性。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础。 展开更多

关键词 中性内切葡聚糖酶Ⅱ 特异腐质霉 毕赤酵母

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长梗木霉外切纤维素酶CBH Ⅱ基因的克隆及表达 被引量：6

8

作者 王娟 刘海英 +3 位作者 朱亚然 舒正玉 吴松刚 黄建忠 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第2期95-98,共4页

分别以长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)XST1的基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增其外切纤维素酶Ⅱ(cellobiohydrolaseⅡ,CBHⅡ)的全长基因cbhⅡ。序列分析表明:cbhⅡ基因全长1583bp,含3个内含子,分别为94～144bp,529～584bp和832～89... 分别以长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)XST1的基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增其外切纤维素酶Ⅱ(cellobiohydrolaseⅡ,CBHⅡ)的全长基因cbhⅡ。序列分析表明:cbhⅡ基因全长1583bp,含3个内含子,分别为94～144bp,529～584bp和832～894bp。该基因编码的外切纤维素酶Ⅱ蛋白全长470个氨基酸(其中前24个氨基酸为信号肽)。将全长的cbhⅡ基因连接到pPIC3.5K上,转化毕赤酵母GS115(Pichia pastoris GS115)。重组转化子96h诱导培养,发酵上清液水解pNPC的酶活为18.1U/L。SDS-PAGE检测结果表明:浓缩的重组转化子发酵液较对照菌株的发酵液中,有一明显加强的蛋白质条带,Mr约为67k。 展开更多

关键词 长梗木霉 外切纤维素酶 毕赤酵母 表达

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类球红细菌产辅酶Q_(10)发酵工艺的优化 被引量：5

9

作者 杨威 柯崇榕 +2 位作者 邵庆伟 朱勇峰 黄建忠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期75-79,共5页

类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)是一类高产辅酶Q10的光合细菌,该研究对R.sphaeroides EIM-8产辅酶Q10的发酵条件和培养基进行了优化。采用单因素结合响应面设计优化后的培养基组成为:葡萄糖27.8 g/L、(NH4)2SO4 4.9 g/L、谷氨酸4.... 类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)是一类高产辅酶Q10的光合细菌,该研究对R.sphaeroides EIM-8产辅酶Q10的发酵条件和培养基进行了优化。采用单因素结合响应面设计优化后的培养基组成为:葡萄糖27.8 g/L、(NH4)2SO4 4.9 g/L、谷氨酸4.7 g/L、玉米浆粉2.5 g/L、MgSO49.5 g/L、FeSO41.5 g/L,NaCl 3.5 g/L,KH2PO44.0 g/L、辅液15.0 mL/L;通过单因素试验方法确定的培养条件为:pH 6.5、温度32℃、接种量10%、装液量40mL/250 mL,此条件下辅酶Q10产量可达128.9 mg/L,比优化前提高了89.0%。 展开更多

关键词 辅酶Q10 类球红细菌 PLACKETT-BURMAN设计 响应面分析

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微藻生产生物柴油的前景与挑战 被引量：4

10

作者 周新虹 池朝华 +2 位作者 蔡钒 廖伟东 叶强 《农产品加工（下）》 2012年第3期103-106,160,共5页

介绍了微藻生产生物柴油的优势及研究进展,分析了微藻生物柴油产业所面临的问题,提出了微藻生物柴油产业发展战略意见:从藻种的选育和培养,到收获、油脂的提取、酯交换的每一步都要降低成本,从生产过程中取得高附加值的产品,最大程度提... 介绍了微藻生产生物柴油的优势及研究进展,分析了微藻生物柴油产业所面临的问题,提出了微藻生物柴油产业发展战略意见:从藻种的选育和培养,到收获、油脂的提取、酯交换的每一步都要降低成本,从生产过程中取得高附加值的产品,最大程度提高利润,并对微藻生物柴油应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 微藻 生物柴油 应用前景

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高密度流加放大培养Schizochytrium sp. FJU-512生产DHA 被引量：5

11

作者 张明亮 江贤章 +2 位作者 余清梅 刘小琳 黄建忠 《药物生物技术》 CAS 2013年第1期34-38,共5页

以提高裂殖壶菌生物量,油脂产量和DHA产量为目的,研究从15 L发酵罐到100 L发酵罐流加补料放大培养条件。根据单位体积液体中搅拌功率相同的准则,进行主要控制参数———搅拌转速的理论放大计算。由裂殖壶菌15 L发酵搅拌转速为220～465 r... 以提高裂殖壶菌生物量,油脂产量和DHA产量为目的,研究从15 L发酵罐到100 L发酵罐流加补料放大培养条件。根据单位体积液体中搅拌功率相同的准则,进行主要控制参数———搅拌转速的理论放大计算。由裂殖壶菌15 L发酵搅拌转速为220～465 r/min,通气量为1.0～2.0 L/L.min(vvm),确定了100 L发酵罐放大的理论转速为150～310 r/min,通气量为1.0～2.0 vvm。通过实验研究,成功实现了由15 L发酵罐至100 L发酵罐的裂殖壶菌放大培养,裂殖壶菌的生物量、油脂产量和DHA产量分别由原来的103.26,51.50 g/L和19.44 g/L增加到110.75、50.77和22.32 g/L。 展开更多

关键词 裂殖壶菌 补料流加 放大培养 二十二碳六烯酸

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黑曲霉果胶裂解酶基因在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的表达 被引量：5

12

作者 强慧妮 杨欣伟 +6 位作者 田宝玉 柯崇榕 林伟铃 吕睿瑞 黄薇 王春香 黄建忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1962-1968,共7页

利用RT-PCR技术从黑曲霉(EIM-6)中扩增得到去除信号肽的果胶裂解酶基因A,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建重组表达质粒pPIC9K-pelA,电击转化毕赤酵母GS115,得到了表达成功的工程菌株。用终浓度为1.5%的甲醇对其进行诱导,将发... 利用RT-PCR技术从黑曲霉(EIM-6)中扩增得到去除信号肽的果胶裂解酶基因A,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建重组表达质粒pPIC9K-pelA,电击转化毕赤酵母GS115,得到了表达成功的工程菌株。用终浓度为1.5%的甲醇对其进行诱导,将发酵上清液浓缩后,用盐酸法测定其酶活可以达到2.3U/mL。通过对重组毕赤酵母诱导表达产物进行SDS-PAGE鉴定,发现重组毕赤酵母分泌了1个约38kD的蛋白,与该酶基因产物的理论值相符,并通过水解圈法测定验证,均说明果胶裂解酶得到正确的分泌表达. 展开更多

关键词 黑曲霉 果胶裂解酶 毕赤酵母 表达

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内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化 被引量：2

13

作者 郑海英 蔡少丽 +6 位作者 黄平 杨威 黄杨 杨鹤 张爱平 刘小琳 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期12-16,共5页

对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 ... 对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 mL/L,硫酸镁10 g/L,磷酸二氢钾9 g/L,初始pH 6.0,培养温度28℃,PTM1添加量0.02%,甲醇诱导浓度1.5%。优化后内切葡聚糖酶活力可达4 158 U/(mL.min)是优化前1 449 U/(mL.min)的2.86倍。 展开更多

关键词 内切中性纤维素酶 毕赤酵母 优化

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中性纤维素酶外切葡聚糖酶CBHⅡ的异源表达 被引量：2

14

作者 林国滟 蔡少丽 +6 位作者 黄平 郑海英 柯崇榕 杨章萍 蔡水淋 林艺平 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期88-91,共4页

利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastor... 利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达。gel pro Analyser软件分析其表达蛋白的表观分子量约为62.548ku。用BandScan软件分析其蛋白表达量为2.3%,即0.738μg/mL(mg/L)。 展开更多

关键词 特异腐质霉 中性外切葡聚糖酶 毕赤酵母 异源表达

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酿酒酵母SNF4基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1

15

作者 吴毕莎 柯崇榕 +3 位作者 林晓华 林清强 陈由强 黄建忠 《生物信息学》 2012年第1期8-11,共4页

SNF4基因编码的Snf4p具有调节Snf1复合体的蛋白激酶活性功能,根据已知的SNF4基因序列设计引物扩增获得S.cerevisiae YS2的SNF4基因完整序列。序列分析表明,SNF4基因的开放阅读框为969bp,编码322个氨基酸残基。应用生物信息方法预测其理... SNF4基因编码的Snf4p具有调节Snf1复合体的蛋白激酶活性功能,根据已知的SNF4基因序列设计引物扩增获得S.cerevisiae YS2的SNF4基因完整序列。序列分析表明,SNF4基因的开放阅读框为969bp,编码322个氨基酸残基。应用生物信息方法预测其理化性质、疏水性、信号肽、亚细胞定位、活性位点及其高级结构。结果表明:Snf4p为具有一定亲水性的非跨膜胞内稳定酸性蛋白,功能结构域为CBS_pair superfamily结构域,二级结构主要由a-螺旋组成,空间结构是由4个CBS结构域构成两个CBS对围绕形成的二聚体。Snf4p的第一个CBS对区域的β片层结构是Snf1p、Sip2p的β发夹结构结合作用区。 展开更多

关键词 SNF4 酿酒酵母 ADH2 生物信息学

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辅酶Q_(10)菌种选育及高通量筛选研究进展 被引量：1

16

作者 庄秀红 陈林 +4 位作者 杨章萍 王明兹 林清强 柯崇榕 黄建忠 《农产品加工（下）》 2012年第3期46-50,共5页

辅酶Q10在预防和治疗人体疾病上起到非常重要的作用,广泛应用于化妆品和保健品领域,其市场需求和工业产量均持续扩大。微生物发酵法制备辅酶Q10是目前最经济且有前景的方法,而选育获得高产菌株是微生物发酵生产的关键。通常,采用传统或... 辅酶Q10在预防和治疗人体疾病上起到非常重要的作用,广泛应用于化妆品和保健品领域,其市场需求和工业产量均持续扩大。微生物发酵法制备辅酶Q10是目前最经济且有前景的方法,而选育获得高产菌株是微生物发酵生产的关键。通常,采用传统或现代遗传改造技术处理菌株,产生大量突变后代,然后从中筛选出增幅最大的高产菌株。由于微生物突变是随机不定向的,因此高通量的筛选技术是实现突变库快速高效筛选和提高育种效率的保障。综述了近年来国内外在辅酶Q10高产菌株选育方面的技术和原理进展,以及显色定量法、紫外薄层色谱、HPLC,UPLC等技术在其高通量筛选方面的应用等相关研究进展。 展开更多

关键词 辅酶Q10 育种 筛选 高通量

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培养基组分对细脚拟青霉液体发酵生物量与有机粗提物量的影响 被引量：1

17

作者 陈丹霞 居晨玉 +2 位作者 郑永标 黄颢 黄建忠 《食用菌》 2012年第2期23-24,共2页

研究通过正交试验考察细脚拟青霉液体发酵培养基3种主要组分马铃薯、葡萄糖和蛋白胨对其生物量与发酵液有机粗提物量的影响。结果表明,培养基成分为400g/L的土豆,11g/L的蛋白胨和40g/L的葡萄糖时,细脚拟青霉菌丝体生长较佳,其菌体生物... 研究通过正交试验考察细脚拟青霉液体发酵培养基3种主要组分马铃薯、葡萄糖和蛋白胨对其生物量与发酵液有机粗提物量的影响。结果表明,培养基成分为400g/L的土豆,11g/L的蛋白胨和40g/L的葡萄糖时,细脚拟青霉菌丝体生长较佳,其菌体生物量可达30g/L;培养基成分为200g/L的土豆,8g/L的蛋白胨及40g/L的葡萄糖时,其发酵液有机粗提物量较高,可达36mg/L。 展开更多

关键词 培养基组分 细脚拟青霉 液体发酵 生物量 有机粗提物

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灰黄霉素高产菌F208发酵过程蛋白质表达差异的研究

18

作者 李晶 柯崇榕 +1 位作者 高媛媛 黄建忠 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第11期986-988,990,共4页

目的为探寻灰黄霉素生物合成过程中的关键酶,以蛋白质组学技术手段分析灰黄霉素高产菌F208发酵过程蛋白质表达差异。方法通过双向电泳联用质谱技术对F208发酵过程蛋白质组图谱进行比较分析。结果研究发现灰黄霉素产生期(192 h)F208表达... 目的为探寻灰黄霉素生物合成过程中的关键酶,以蛋白质组学技术手段分析灰黄霉素高产菌F208发酵过程蛋白质表达差异。方法通过双向电泳联用质谱技术对F208发酵过程蛋白质组图谱进行比较分析。结果研究发现灰黄霉素产生期(192 h)F208表达的蛋白质与产生前期(72 h)有较大差异,并鉴定出在灰黄霉素产生高峰期蛋白表达量明显增加的两个特异点是丝氨酸羟甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸合成酶。结论成功建立灰黄青霉菌丝体总蛋白双向电泳技术体系。并鉴定出两个蛋白特异点,极可能与灰黄霉素生物合成有关。 展开更多

关键词 灰黄青霉 灰黄霉素 蛋白质组 双向电泳 质谱

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碱性果胶酶基因在毕赤酵母中的非诱导表达

19

作者 张爱平 蔡少丽 +3 位作者 杨鹤 郑海英 柯崇榕 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期33-36,共4页

为了使碱性果胶酶基因能在毕赤酵母中获得非诱导表达,利用聚合酶链式反应(PCR)技术,以实验室保藏菌株毕赤酵母EIM-60基因组为模板,设计引物扩增出编码碱性果胶酯裂解酶的基因PGL,大小约为1 206 bp。酶切后连接到毕赤酵母组成型表达载体p... 为了使碱性果胶酶基因能在毕赤酵母中获得非诱导表达,利用聚合酶链式反应(PCR)技术,以实验室保藏菌株毕赤酵母EIM-60基因组为模板,设计引物扩增出编码碱性果胶酯裂解酶的基因PGL,大小约为1 206 bp。酶切后连接到毕赤酵母组成型表达载体pGAPZαA的多克隆位点上,成功构建了重组载体pGAPZαA-PGL,将其电转化入毕赤酵母GS115进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达,分子量为44.3 ku。通过考马斯亮蓝法蛋白浓度试剂盒测定其蛋白含量为0.430 g/L,通过BandScan软件分析目的蛋白占总蛋白的41.4%,即0.178 g/L。 展开更多

关键词 碱性果胶酶 pGAPZαA 毕赤酵母 异源表达

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侧孢短芽胞杆菌产生线虫侵染性蛋白酶的优化

20

作者 柯崇榕 黄薇 +2 位作者 秦勇 田宝玉 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期6-10,共5页

采用单因素试验确定侧孢短芽胞杆菌G4产线虫侵染性蛋白酶的最佳碳氮源,通过Placket-Burman设计筛选影响蛋白酶活力的主效因子,最陡坡试验和Box-Behnken设计获得主效因子的最佳水平,建立线虫侵染性蛋白酶的最佳生产体系:葡萄糖9.78 g/L... 采用单因素试验确定侧孢短芽胞杆菌G4产线虫侵染性蛋白酶的最佳碳氮源,通过Placket-Burman设计筛选影响蛋白酶活力的主效因子,最陡坡试验和Box-Behnken设计获得主效因子的最佳水平,建立线虫侵染性蛋白酶的最佳生产体系:葡萄糖9.78 g/L、牛肉膏16.65 g/L、磷酸氢二钾0.75 g/L、可溶性淀粉12.5 g/L、氯化钠0.75 g/L、硫酸镁0.5 g/L、初始pH值自然、装液量50 mL,37℃摇瓶培养32 h,蛋白酶活力可达12 379.41 U/mL,较优化前的2 476.3 U/mL提高了4倍。 展开更多

关键词 侵染线虫 蛋白酶 侧孢短芽胞杆菌 响应面 优化

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