热休克蛋白70和葡萄糖调节蛋白78在肝细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：7

1

作者 王斌 刘景丰 +3 位作者 金杰钿 葛小霞 薛励秋 黄爱民 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2115-2118,F0003,共5页

目的 检测热休克蛋白70 （HSP70）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在肝细胞癌（HCC）中的表达并探讨其与临床病理资料及预后的关系.方法 采用Western blot和免疫组织化学染色的方法检测HCC及其癌旁肝组织中HSP70和GRP78的表达,分析其与临... 目的 检测热休克蛋白70 （HSP70）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在肝细胞癌（HCC）中的表达并探讨其与临床病理资料及预后的关系.方法 采用Western blot和免疫组织化学染色的方法检测HCC及其癌旁肝组织中HSP70和GRP78的表达,分析其与临床病理特征的关系;应用Kaplan-Meier法及多因素Cox比例风险模型分析HSP70和GRP78表达与预后的关系.结果 HSP70及GRP78蛋白在HCC组中的相对表达量明显高于癌旁肝组织（0.879±0.556比0.240±0.156,P＜0.01;0.515±0.353比0.202±0.132,P＜0.01）;HSP70阳性表达与肿瘤的大小、乙型肝炎病毒（HBV）感染、Edmondson分级、分化及TNM分期密切相关（P＜0.05）,GRP78阳性表达与Edmondson分级、分化、微血管侵犯、TNM分期及复发密切相关（P＜0.05）.单因素生存分析显示HSP70和GRP78蛋白阳性表达组生存率明显低于阴性表达组（P＜0.05）;多因素Cox回归分析结果显示TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤大小及复发是反映肝癌患者预后的独立危险因素,其相对危险度分别为1.502、1.971、2.267及4.746.结论 HSP70和GRP78过表达参与了HCC的发生和发展. 展开更多

关键词 肝细胞癌 热休克蛋白70 葡萄糖调节蛋白78 免疫组织化学 预后

原文传递

APE1在肝细胞癌组织芯片的表达及临床病理意义 被引量：5

2

作者 郑智华 黄爱民 +3 位作者 刘景丰 臧盛兵 高凌云 陈水平 《福建医科大学学报》 2008年第2期100-103,共4页

目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因在原发性肝细胞癌(HCC)的表达及其与临床病理变化的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测包含HCC及转移灶、癌旁肝硬化组织、癌旁慢性肝炎组织和正常肝组织的组织芯片中APE1的表达情况,结合... 目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因在原发性肝细胞癌(HCC)的表达及其与临床病理变化的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测包含HCC及转移灶、癌旁肝硬化组织、癌旁慢性肝炎组织和正常肝组织的组织芯片中APE1的表达情况,结合临床病理资料进行统计分析。结果APE1在癌旁肝硬化组织、癌旁慢性肝炎组织和正常肝组织以细胞核表达为主,在HCC和转移灶组织以细胞质细胞核联合表达为主(P<0.01)。细胞质与细胞核染色强度均与HCC分级和转移密切相关(P<0.01),细胞质染色强度还与肿瘤包膜有无浸润有关(P<0.01)。结论APE1蛋白表达与HCC恶性表型有关,APE1蛋白过表达及细胞质表达的出现可能成为HCC预后不良的指标之一。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 内切核酸酶类 芯片分析技术 免疫组织化学 预后

下载PDF 职称材料

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌组织的表达及其临床意义 被引量：3

3

作者 苏红英 黄雄飞 +4 位作者 马创 刘景丰 王斌 高美钦 黄爱民 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1896-1898,共3页

目的观察钙磷脂结合蛋白Ⅱ（Annexinll）在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测33例HCC患者肝癌组织和配对的癌旁肝组织以及11例正常肝组织中AnnexinⅡmRNA表达；利用免疫组织... 目的观察钙磷脂结合蛋白Ⅱ（Annexinll）在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测33例HCC患者肝癌组织和配对的癌旁肝组织以及11例正常肝组织中AnnexinⅡmRNA表达；利用免疫组织化学方法检测104例HCC组织和配对的癌旁肝组织中AnnexinⅡ蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinⅡmRNA表达量高于癌旁肝组织和正常肝组织，是癌旁肝组织的3．38倍（P〈0．01），是正常肝组织的4．42倍（P〈0．01）；AnnexinII蛋白表达明显高于配对的癌旁肝组织（P〈0．05）。年龄≤40岁的患者AnnexinⅡmRNA表达水平是年龄〉40岁患者的1．875倍（P〈0．05）。结论AnnexinII在人HCC患者肝癌组织中表达上调，可能成为肝细胞癌临床诊断的新的候选基因。 展开更多

关键词 肝细胞癌 钙磷脂结合蛋白Ⅱ 基因表达

原文传递

肝细胞癌中与转录激活因子3相互结合的蛋白质的筛选及验证 被引量：3

4

作者 李小燕 臧盛兵 +2 位作者 方雪婷 马小杰 黄爱民 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期314-317,共4页

目的筛选及验证肝癌细胞中与转录激活因子3（ATF3）相互结合的蛋白质，初步探讨在肝癌发生发展中协助ATF3发挥生物学功能的相关分子机制。方法应用免疫沉淀法沉淀出HepG2细胞中与ATF3相互结合的蛋白，经变性聚丙烯凝胶分析，与空载体组... 目的筛选及验证肝癌细胞中与转录激活因子3（ATF3）相互结合的蛋白质，初步探讨在肝癌发生发展中协助ATF3发挥生物学功能的相关分子机制。方法应用免疫沉淀法沉淀出HepG2细胞中与ATF3相互结合的蛋白，经变性聚丙烯凝胶分析，与空载体组比对，挑选出差异性的电泳条带进行蛋白质谱分析，筛选出候选蛋白；再经免疫共沉淀验证二者是否相互结合；应用免疫组织化学及Westernblot检测并分析ATF3和候选蛋白在肝癌中的表达模式。结果过表达ATF3的HepG2实验组呈现出差异性表达的电泳条带；经质谱检测，Mascot软件分析及NCBI数据库检索，得到候选蛋白肽段信息，结合前期实验结果，PubMed文献报道，从中筛选出与ATF3最可能相关的蛋白gelsolin（GSN）；免疫共沉淀结果验证了ATI^3与GSN相互结合的关系，免疫组织化学及Westernblot检测出肝癌组织中ATF3与GSN的表达模式一致。结论ATF3可能通过与GSN蛋白之间的相互作用，在肝癌形成过程中协同发挥抑癌作用。 展开更多

关键词 肝细胞癌 转录激活因子3 蛋白质类

原文传递

KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究 被引量：2

5

作者 徐玫芳 臧盛兵 +4 位作者 刘景丰 高凌云 高美钦 杨映红 黄爱民 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期925-929,共5页

目的观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础。方法培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H，瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组，转染空载体pcDNA3．1／HiS... 目的观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础。方法培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H，瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组，转染空载体pcDNA3．1／HiSC的细胞为空白对照组，未转染细胞为阴性对照组，采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KISS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响。应用SPSS13．0统计软件包进行统计分析，组间差异以两样本t检验分析。结果转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力（A值）分别为0．257±0．029、0．374±0．016和0．394±0．031，转染组明显低于空载体组（t=-7．90345，P〈0．01）和未转染组（t=-7．22752，P〈0．01）；与Fibronectin基质的黏附能力（A值）分别为0．292±0．004、0．394±0．010和0．412±0．023，转染组明显低于空载体组（t=-20．93138，P〈0．01）和未转染组（t=-11．31371，P〈0．01）;趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65．80±1．92、93．80±2．28和96．40±2．07，转染组明显低于空载体组（t=-30．11750，P〈0．01）和未转染组（t=-24．19142，P〈0．01）;侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42．40±1．14、66．00±1．58和67．80±1．92，转染组明显低于空载体组（t=-27．0711，P〈0．01）和未转染组（t=一25．4，P〈0．01）。而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力（A值）分别为0．644±0．027、O．669±0．022和0．678±0．027，转染组略低于空载体组（t=一1．60371，P〉0．05）和未转染组（t=-1．97828，P〉0．05）}同时，转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞，也未出现明显的凋亡峰。结论KISS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能� 展开更多

关键词 癌 肝细胞 细胞增殖 基因 肿瘤抑制

原文传递

脆性位点基因WWOX mRNA在肝细胞癌中的表达及临床病理意义 被引量：1

6

作者 王斌 林洁 +2 位作者 罗顺锋 汪晓军 黄爱民 《福建医科大学学报》 2011年第6期393-397,共5页

目的检测WWOX野生型mRNA及其异常转录剪接体在肝细胞癌中的表达情况,并分析其临床病理意义。方法采用Rea-ltime RT-PCR和RT-PCR方法检测44例肝细胞癌(HCC)、相应癌旁肝组织和5例正常肝组织中WWOX野生型mRNA及转录剪接体Variant1、Varia... 目的检测WWOX野生型mRNA及其异常转录剪接体在肝细胞癌中的表达情况,并分析其临床病理意义。方法采用Rea-ltime RT-PCR和RT-PCR方法检测44例肝细胞癌(HCC)、相应癌旁肝组织和5例正常肝组织中WWOX野生型mRNA及转录剪接体Variant1、Variant4及Variant6的表达,同时分析WWOX mRNA的表达与临床病理参数的关系。结果 (1)在HCC中,WWOX野生型mRNA的表达较癌旁肝组织明显降低(P<0.01);随着HCC组织学分级的升高和分化程度的降低,WWOX野生型mRNA的表达量逐步减少(P<0.05);术后复发组WWOX野生型mRNA的表达低于非复发组(P<0.05)。(2)通过RT-PCR方法检测到了WWOX异常转录剪接体Variant4和Variant6,并经过测序证实;Variant4在HCC中的出现率为70.5%,明显高于癌旁肝组织的38.6%和正常肝组织的40%(P<0.01),其表达在肝硬化和无肝硬化组中有差别(P<0.05);Vari-ant6在HCC、癌旁肝组织、正常肝组织中的检出率分别为72.7%,81.8%和80.0%(P<0.05);这两型异常转录剪接体的出现与HCC的大小、组织学类型、组织学分级、分化、血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶等病理特征及患者的性别、甲胎蛋白水平、复发情况均无关。结论 WWOX野生型mRNA表达的下调可能在HCC的发生发展中起重要作用;WWOX异常转录剪接体Variant4可能为致癌因素致癌作用的一个分子靶点。 展开更多

关键词 癌 肝细胞癌 RNA 信使 基因 肿瘤抑制 染色体脆性位点 逆转录聚合酶链反应 聚合酶链反应

下载PDF 职称材料

APE1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：1

7

作者 李艳菊 郑智华 +2 位作者 刘景丰 高美钦 黄爱民 《福建医科大学学报》 2010年第2期86-90,共5页

目的构建APE1基因慢病毒载体,为其后续的体内外实验研究提供基础。方法应用基因工程技术,筛选出两条针对APE1基因的RNAi靶序列KD1、KD2,分别与pGCIL-GFP载体连接,经转化筛选鉴定后,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,分别命名为LV-APE1-... 目的构建APE1基因慢病毒载体,为其后续的体内外实验研究提供基础。方法应用基因工程技术,筛选出两条针对APE1基因的RNAi靶序列KD1、KD2,分别与pGCIL-GFP载体连接,经转化筛选鉴定后,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,分别命名为LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2,两种病毒颗粒分别感染MHCC97-H细胞,设为感染LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2细胞组,同时设未感染病毒组和感染空载体细胞组。Real-time PCR和Western blot检测MHCC97-H细胞中APE1基因的mRNA和蛋白的表达。结果 PCR及测序结果与预期结果一致,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2的病毒滴度为4×108TU/mL和7×108TU/mL。与未感染病毒组和感染空载体细胞组相比,2组慢病毒组APE1基因mRNA和蛋白的表达均明显下降,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2对APE1基因的mRNA表达的抑制率分别为75%,90%,对APE1蛋白表达的抑制率达90%,95%。结论成功构建高效阻断APE1基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究APE1基因在肝癌中的作用机制和基因治疗奠定基础。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 内切核酸酶类 嘌呤类 嘧啶类 肝肿瘤 RNA干扰 慢病毒属 遗传载体

下载PDF 职称材料

KiSS-1基因重组真核质粒的构建、鉴定及其表达 被引量：1

8

作者 徐玫芳 臧盛兵 +3 位作者 黄爱民 刘景丰 高凌云 高美钦 《福建医科大学学报》 2009年第3期193-197,共5页

目的构建KiSS-1基因重组真核质粒,将其导入人高转移肝癌MHCC97-H细胞中,获得瞬时表达的细胞株,为进一步研究KiSS-1基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响奠定基础。方法Trizol试剂法提取新鲜胎盘组织总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,PCR产物及真... 目的构建KiSS-1基因重组真核质粒,将其导入人高转移肝癌MHCC97-H细胞中,获得瞬时表达的细胞株,为进一步研究KiSS-1基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响奠定基础。方法Trizol试剂法提取新鲜胎盘组织总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌Ecoli.Dh5α扩增以获得重组载体,采用脂质体介导转染技术将高纯度的KiSS-1质粒转染到人高转移肝癌细胞株中,用RT-PCR和Westernblot技术加以鉴定。结果RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经PCR、双酶切鉴定及测序,证实已将KiSS-1基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;RT-PCR、免疫细胞化学和Westernblot证实KiSS-1基因已转染入MHCC97-H细胞中。结论成功获得pcDNA3.1/HisC/KiSS-1重组质粒和瞬时表达KiSS-1基因的肝癌细胞,为后续建立稳定转染的KiSS-1高表达阳性细胞克隆奠定基础,为体内外实验研究KiSS-1对人肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响提供前提条件。 展开更多

关键词 肿瘤抑制蛋白类 遗传载体 转染 肝肿瘤 肿瘤侵润 真核细胞核 质粒

下载PDF 职称材料

钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅱ在人胃腺癌组织中上调表达及其意义 被引量：1

9

作者 苏红英 黄雄飞 +3 位作者 陈淑勤 张白凌 刘景丰 黄爱民 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1563-1565,共3页

目的 检测人胃腺癌组织中钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅱ（AnnexinⅡ）蛋白的表达水平,探讨AnnexinⅡ与胃腺癌发生发展的关系。方法 采用免疫组织化学方法分别检测44对胃腺癌组织和配对的癌旁胃组织,以及10例正常胃组织中AnnexinⅡ蛋白的表达,... 目的 检测人胃腺癌组织中钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅱ（AnnexinⅡ）蛋白的表达水平,探讨AnnexinⅡ与胃腺癌发生发展的关系。方法 采用免疫组织化学方法分别检测44对胃腺癌组织和配对的癌旁胃组织,以及10例正常胃组织中AnnexinⅡ蛋白的表达,并分析胃腺癌组织中AnnexinⅡ蛋白表达水平与患者临床病理特征之间的关系。结果 胃腺癌组织中AnnexinⅡ蛋白阳性表达率（70.45%）明显高于配对的癌旁组织（43.18%,P〈0.05）,AnnexinⅡ蛋白在癌组织中的表达主要定位于肿瘤细胞胞膜,AnnexinⅡ蛋白的表达水平和胃腺癌患者肿瘤组织的分化程度有关,中、高分化肿瘤组织中AnnexinⅡ蛋白阳性表达率（57.14%）明显低于低分化患者（87.5%,P〈0.05）。结论 AnnexinⅡ蛋白上调表达可能与胃腺癌的发生和恶性进展有关。 展开更多

关键词 胃腺癌 钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅱ 蛋白表达

原文传递

eNOS G894T基因多态性与胃癌发生发展关系的研究 被引量：1

10

作者 陈淑勤 洪斌斌 +3 位作者 林贤东 朱进伟 唐阳 林建银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1816-1819,共4页

目的:探讨内皮型一氧化氮合酶(Endothelial NOS,eNOS)基因多态性与胃癌发生发展的关系。方法:采用PCR-RFLP技术,检测福建地区汉族324例胃癌患者(病例组)和200例健康对照者(对照组)eNOS基因G894T多态性。结果:(1)在病例组和对照组中e,NOS... 目的:探讨内皮型一氧化氮合酶(Endothelial NOS,eNOS)基因多态性与胃癌发生发展的关系。方法:采用PCR-RFLP技术,检测福建地区汉族324例胃癌患者(病例组)和200例健康对照者(对照组)eNOS基因G894T多态性。结果:(1)在病例组和对照组中e,NOS G894T SNP基因型频率G/G分别为76.5%(248/324)和73.0%(146/200),G/T+T/T分别为23.5%(76/324)和27.0%(54/200),等位基因频率G分别为88.0%(570/648)和86.3%(345/400),T分别为12.0%(78/648)和13.7%(55/400)。eNOS G894T SNP基因型和等位基因频率在病例组与对照组的分布差异无统计学意义(均P>0.05);弥漫型胃癌和肠型胃癌分别与对照组比较,任一基因型或等位基因亦未增加患癌风险(均P>0.05)。(2)eNOS G894T基因型频率分布与胃癌的临床病理特征无明显关系(均P>0.05)。结论:福建地区汉族人群eNOS基因G894T多态性与胃癌的发生和发展无关。 展开更多

关键词 胃癌e NOS G894T基因多态性 疾病遗传易感性

下载PDF 职称材料

shRNA介导DEPDC7基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力影响的研究 被引量：1

11

作者 廖之君 王心睿 +1 位作者 杨红 曾也婷 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第7期977-983,共7页

功能未知基因DEPDC7(DEP domain containing 7)是从基因芯片数据挖掘得到的,基因表达谱提示只在肝组织中选择性高表达,但是关于DEPDC7在肝癌细胞内参与的生命活动及其分子机制的相关研究报道较少。该研究应用RNAi技术构建DEPDC7慢病毒... 功能未知基因DEPDC7(DEP domain containing 7)是从基因芯片数据挖掘得到的,基因表达谱提示只在肝组织中选择性高表达,但是关于DEPDC7在肝癌细胞内参与的生命活动及其分子机制的相关研究报道较少。该研究应用RNAi技术构建DEPDC7慢病毒载体并感染人肝癌细胞株HepG2,利用RT-q PCR和Western blot方法检测DEPDC7干扰效果。运用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成方法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力。结果显示,成功构建的DEPDC7慢病毒载体可以有效干扰DEPDC7 m RNA和蛋白的表达(P<0.05)。此外,DEPDC7被沉默后,可以有效促进细胞周期从G1期向S期转变,细胞增殖和侵袭迁移能力均显著提高(P<0.05)。该研究提示,肝癌细胞HepG2中DEPDC7低表达能有效提高细胞增殖、克隆形成和侵袭迁移能力,为后续研究DEPDC7转录调控机制等指明了方向。 展开更多

关键词 DEPDC7 RNA干扰 肝癌 增殖 迁移 侵袭

原文传递

分泌型磷脂酶A2-IIAmRNA表达与人肝细胞癌临床病理特征的关系

12

作者 苏红英 黄雄飞 +3 位作者 黄爱民 陶璇 张白凌 刘景丰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期829-831,共3页

目的检测人肝细胞癌（HCC）患者分泌型的磷脂酶A2-IIA（PLA2G2A）mRNA表达，探讨PLA2G2A与HCC发生发展的关系。方法采用SYBRGreenI荧光实时定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法分别检测51例HCC组织和配对的癌旁肝组织，以及9例正常肝组织中... 目的检测人肝细胞癌（HCC）患者分泌型的磷脂酶A2-IIA（PLA2G2A）mRNA表达，探讨PLA2G2A与HCC发生发展的关系。方法采用SYBRGreenI荧光实时定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法分别检测51例HCC组织和配对的癌旁肝组织，以及9例正常肝组织中PLA2G2AmRNA表达，以B-肌动蛋白（B—actin）为内参，根据相对定量公式（2△△Ct）计算PLA2G2AmRNA相对表达量，并分析HCC组织中PLA2G2AmRNA表达水平与临床病理特征之间的关系。结果肝癌组织中PLA2G2AmRNA表达量明显低于配对的癌旁肝组织和正常肝组织，仅是癌旁肝组织的0．2446倍（P〈0．01），是正常肝组织的0．2339倍（P〈0．01）；PLA2G2AmRNA的表达水平和HCC组织的分化程度呈正相关（P〈0．05），与HCC患者血清的AFP蛋白的表达量呈负相关（P〈0．05）；有肝硬化背景的患者HCC组织中PLA2G2AmRNA表达量明显高于无肝硬化背景的患者（P〈O．05）。结论PLA2G2AmRNA的表达缺失可能与肝细胞癌的发生和进展有关。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 磷脂酶A2 表达

原文传递

转染胸苷磷酸化酶基因对胃癌细胞株氟尿嘧啶类药敏感性的影响 被引量：1

13

作者 卓丽娟 高美钦 黄爱民 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期330-333,共4页

目的 观察胃癌细胞株中胸苷磷酸化酶（TP）表达水平与其对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）及其前体药去氧氟尿苷和卡倍他滨敏感性的关系.方法 利用Lipdectamin 2000将质粒pEGFP-N1及重组质粒pEGFP-N1-TP转染入胃癌细胞株AGS中,在倒置荧光显... 目的 观察胃癌细胞株中胸苷磷酸化酶（TP）表达水平与其对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）及其前体药去氧氟尿苷和卡倍他滨敏感性的关系.方法 利用Lipdectamin 2000将质粒pEGFP-N1及重组质粒pEGFP-N1-TP转染入胃癌细胞株AGS中,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并用G418筛选阳性细胞克隆AGS-P和AGS-pTP.免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测胃癌细胞株中TP蛋白及TP mRNA的表达情况,四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法检测上述三种胃癌细胞株对氟尿嘧啶类药物的敏感性.结果 构建了稳定表达TP和绿色荧光融合蛋白的胃癌细胞株AGS-pTP及稳定表达绿色荧光蛋白的胃癌细胞株AGS-p;免疫细胞化学显示AGS、AGS-P不表达TP蛋白,而AGS-pTP则强表达;RT-PCR检测显示AGS-pTP中TP mRNA表达水平（灰度比值,0.8090±0.0450）明显高于AGS（0.0490±0.0046）及AGS-P（0.0610±0.0069;P＜0.01）.AGS-pTP对去氧氟尿苷和卡倍他滨的敏感性明显增加,AGS-pTP对去氧氟尿苷和卡倍他滨的IC50值分别是AGS-P的1.7和2.2倍.相比AGS-P,AGS-pTP对5-FU的敏感性无明显改变.结论 提高胃癌细胞中TP表达水平能增强胃癌细胞对5-FU前体药卡倍他滨和去氧氟尿苷的敏感性,但并不影响胃癌细胞对5-FU的敏感性. 展开更多

关键词 胸苷磷酸化酶 胃肿瘤 氟尿嘧啶 细胞系 肿瘤

原文传递

人DEPDC7基因启动子的转录活性分析

14

作者 王心睿 杨红 +1 位作者 曾也婷 廖之君 《热带医学杂志》 CAS 2015年第7期879-882,892,共5页

目的对人DEPDC7基因近端启动子进行生物信息学分析并构建该启动子的荧光素酶报告系统,初步探讨该启动子的活性。方法采用生物信息学方法对人DEPDC7基因的启动子和转录因子进行分析和预测,通过PCR法扩增DEPDC7基因近端启动子序列,PCR产物... 目的对人DEPDC7基因近端启动子进行生物信息学分析并构建该启动子的荧光素酶报告系统,初步探讨该启动子的活性。方法采用生物信息学方法对人DEPDC7基因的启动子和转录因子进行分析和预测,通过PCR法扩增DEPDC7基因近端启动子序列,PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到p GL2-Basic载体,构建一系列的启动子区域荧光素酶报告基因载体,随后经脂质体转染入293T细胞并检测各缺失片段萤光素酶活性。结果人DEPDC7基因位于11p13,翻译起始位点上游1 300 bp左右可能为启动子区域。经双荧光素酶报告基因检测后发现,所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性,其中p GL2-DEPDC7P3活性最强。结论初步证明人DEPDC7基因启动子在-879 bp^+100 bp区域具有较强转录活性,为进一步揭示该基因生物学功能和其分子调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 DEPDC7基因 启动子 转录因子 生物信息学 活性分析

原文传递

基于全偏振成像的数字病理方法 被引量：1

15

作者 董洋 张冯頔 +10 位作者 姚悦 力超 陈丽红 尹洪芳 何宏辉 刘小龙 冯晓彬 曾楠 廖然 刘景丰 马辉 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2023年第4期480-504,共25页

数字病理技术能够对病理切片进行高分辨率数字化,并利用计算机和数据技术对数字化图像进行定量分析和特征识别,以便降低病理医师的工作强度,提高诊断客观性和准确性,实现病理辅助诊断.全偏振显微成像是正在迅速发展的一类成像技术,具有... 数字病理技术能够对病理切片进行高分辨率数字化,并利用计算机和数据技术对数字化图像进行定量分析和特征识别,以便降低病理医师的工作强度,提高诊断客观性和准确性,实现病理辅助诊断.全偏振显微成像是正在迅速发展的一类成像技术,具有不依赖染色、不造成损伤、富含亚细胞超分辨微观结构特征信息等优点,可在不同解剖学层次和空间尺度针对生物医学样本的微观结构进行定量表征,或对生命过程进行原位、在体的动态观测,在临床病理诊断等领域已经展示出了十分诱人的应用潜力.本文从数字病理图像分析技术的概念和方法出发,简要介绍偏振成像方法以及基于偏振成像技术的数字病理图像分析方法的前瞻性研究成果,目的是展示偏振数字病理的概念、技术、方法和初步应用,并展望其潜在的应用前景和未来发展方向. 展开更多

关键词 数字化病理 偏振成像 偏振特征提取 机器学习

原文传递

生存素、p27和PTEN在肝细胞癌中的表达及临床病理意义 被引量：3

16

作者 黄爱民 丁毅 +3 位作者 刘景丰 高凌云 臧盛兵 陈水平 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期17-20,共4页

目的探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床病理意义。方法自制组织芯片，采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、P... 目的探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床病理意义。方法自制组织芯片，采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、PTEN蛋白和生存素mRNA、p27mRNA在141份肝细胞癌、128份癌旁肝组织、97份远癌肝组织及17份正常肝组织中的表达，探讨各指标的关系并建立预测肝癌发生的模型。结果肝癌组中生存素蛋白（Ridit值的95％甜为0．689±0．048，P〈0．01）、生存素mRNA（Ridit值的95％甜为0．690±0．049，P〈0．01）和p27蛋白（Ridit值的95％a为0．556±0．053，P〈0．05）表达明显增高，PTEN（Ridit值的95％a为0．282±0．048）表达明显下降（P〈0．01）；肝癌中生存素的表达与p27、PTEN表达均显著相关；生存素mRNA、p27蛋白和PTEN蛋白对判断肝癌发生与否有重要意义。结论生存素mRNA、p27蛋白的表达上调和PTEN蛋白的表达下调可作为判断肝癌发生的有价值指标。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 基因 生存素 第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因

原文传递

APEX1和Jagged1基因在肝细胞癌中的表达及相关性 被引量：3

17

作者 方雪婷 马小杰 +1 位作者 张钰 黄爱民 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1294-1299,共6页

目的探讨APEX1和Jagged1基因在原发性肝细胞癌中的表达,并分析两者表达的相关性,探讨其在肝细胞癌发生、发展中的作用及相关机制。方法采用qRT-PCR技术检测46例肝细胞癌及癌旁肝组织中APEX1及Jagged1 mRNA的表达水平;采用Western blot... 目的探讨APEX1和Jagged1基因在原发性肝细胞癌中的表达,并分析两者表达的相关性,探讨其在肝细胞癌发生、发展中的作用及相关机制。方法采用qRT-PCR技术检测46例肝细胞癌及癌旁肝组织中APEX1及Jagged1 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测18对新鲜冷冻肝细胞癌组织及癌旁肝组织中APEX1及Jagged1蛋白的表达水平;采用组织芯片结合免疫组化法检测118例肝细胞癌中APEX1及Jagged1蛋白的表达,分析两者表达与临床病理特征的关系及相关性,并复习相关文献。结果肝细胞癌中APEX1 mRNA及蛋白的表达量明显高于癌旁肝组织(P<0.05)。免疫组化染色示,APEX1定位于细胞质和(或)细胞核内,在肝细胞癌中APEX1蛋白在细胞质中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P<0.001)。APEX1 mRNA表达与肿瘤包膜侵犯、分化程度、转移及复发有关(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot结果示,肝细胞癌中Jagged1 mRNA和蛋白的表达明显高于癌旁肝组织(P<0.05)。免疫组化染色示,Jagged1定位于细胞质,在肝细胞癌组织中的阳性率高于癌旁肝组织,两者差异有显著性(P<0.001)。Jagged1蛋白表达与肝细胞癌的AFP水平、分化程度、转移及复发有关(P<0.05)。在肝细胞癌中,APEX1表达与Jagged1的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论APEX1和Jagged1基因在肝细胞癌中的过表达与肝细胞癌侵袭、转移明显相关,APEX1可能通过调控Jagged1表达来参与肝细胞癌的发生、发展。APEX1和Jagged1蛋白过表达可以预测肝细胞癌的恶性转化和转移。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 APEX1 JAGGED1 QRT-PCR WESTERN BLOT 免疫组织化学

下载PDF 职称材料

5-Aza-CdR诱导肿瘤细胞NY-ESO-1抗原的表达 被引量：3

18

作者 陈裕庆 黄丽 +1 位作者 汪晓军 张文敏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期536-540,共5页

目的:探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原表达的诱导作用。方法:常规培养人胃癌细胞株SGC-7901、人肝癌细胞株H2P和MHCC97-H、人结肠癌细胞株HT-29和LoVo及人脑胶质瘤细... 目的:探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原表达的诱导作用。方法:常规培养人胃癌细胞株SGC-7901、人肝癌细胞株H2P和MHCC97-H、人结肠癌细胞株HT-29和LoVo及人脑胶质瘤细胞株U251,RT-PCR和免疫细胞化学法检测5-Aza-CdR作用前后肿瘤细胞中NY-ESO-1 mRNA和蛋白的表达。结果:RT-PCR与免疫细胞化学检测仅见胃癌SGC-7901细胞阳性表达NY-ESO-1,其余5株肿瘤细胞不表达NY-ESO-1。NY-ESO-1阴性的肝癌细胞株H2P、结肠癌细胞株LoVo及脑胶质瘤细胞株U251经5-Aza-CdR(终浓度分别为1、5和10μmol/L)处理6 d后,细胞形态和生长速度均无明显改变,而NY-ESO-1 mRNA和蛋白均被诱导为阳性表达,并随5-Aza-CdR浓度增加而阳性表达逐渐增强。结论:5-Aza-CdR能诱导肝癌、结肠癌、脑胶质瘤等肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原的表达,为肿瘤免疫治疗提供了一条新思路。 展开更多

关键词 5-氮杂-2’-脱氧胞营 NY-ESO-1 肝癌 结肠癌 胶质瘤

下载PDF 职称材料

膜联蛋白A2表达与肝纤维化和肝细胞癌的关系 被引量：2

19

作者 王斌 徐涛 +2 位作者 刘景丰 苏红英 黄爱民 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期284-289,共6页

目的检测膜联蛋白A2（ANXA2）在肝纤维化和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达并探讨其临床意义。方法采用蛋白印迹方法检测ANXA2蛋白在正常肝组织、肝硬化组织及HCC中的表达；采用免疫组织化学染色的方法检测ANXA2蛋白... 目的检测膜联蛋白A2（ANXA2）在肝纤维化和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达并探讨其临床意义。方法采用蛋白印迹方法检测ANXA2蛋白在正常肝组织、肝硬化组织及HCC中的表达；采用免疫组织化学染色的方法检测ANXA2蛋白在HCC及癌旁肝纤维化组织中的表达，并分析其临床意义。结果ANXA2蛋白在HCC和肝硬化中的表达较正常肝组织明显升高，又以在HCC中表达为最高（P=0．000）。ANXA2蛋白表达与肝纤维化分期呈显著正相关（P〈0．05）。ANXA2蛋白在HCC肿瘤细胞中的表达与HBV感染、肿瘤分化程度及复发密切相关（P〈0．05）。在部分HCC患者中，ANXA2蛋白在肿瘤结节最外围的肿瘤细胞及周围纤维基质表达增高。结论ANXA2蛋白过表达可能参与了肝纤维化及HCC的发生和发展。ANXA2蛋白有望成为判断肝纤维化程度、HCC肿瘤分化程度的分子标记物。 展开更多

关键词 肝细胞癌(HCC) 肝纤维化 膜联蛋白A2(ANXA2) 蛋白印迹 免疫组织化学

原文传递