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精氨酸脱亚胺酶活性以及瓜氨酸转化研究 被引量：2
1
作者 任丽梅 成志远 +2 位作者 李晓静 吴会广 袁国强 《氨基酸和生物资源》 CAS 2015年第3期69-74,共6页
目前,L-瓜氨酸的主要生产方法为化学法水解L-精氨酸。利用精氨酸脱亚胺酶可以直接转化L-精氨酸获得L-瓜氨酸,条件温和、效率高、环境友好,因而在工业化生产中具有很好的应用前景。本研究将优化后的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes... 目前,L-瓜氨酸的主要生产方法为化学法水解L-精氨酸。利用精氨酸脱亚胺酶可以直接转化L-精氨酸获得L-瓜氨酸,条件温和、效率高、环境友好,因而在工业化生产中具有很好的应用前景。本研究将优化后的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)精氨酸脱亚胺酶(ADI)基因序列分别克隆到相应的载体pET-21a、pWB980及pAO815中,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3)、枯草芽胞杆菌WB600及毕赤酵母GS115中构建表达菌株。发现大肠杆菌能高效表达ADI。经过5L发酵罐验证,发酵后酶活力单位可达200 000~270 000 U·L-1。经过验证,该酶可以很好地应用于L-瓜氨酸生产。在7 920~17 600U·L-1的ADI存在条件下,5.5h内,可使95%的浓度为94~258g·L-1的精氨酸转化为瓜氨酸。该方法具备良好的工业化应用前景。 展开更多
关键词 精氨酸脱亚胺酶 L-精氨酸 L-瓜氨酸 酶转化法
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生物法生成可可碱技术
2
作者 任丽梅 刘永明 +5 位作者 袁国强 张浩 牛素菊 谢丽莎 任璐 王坤丽 《生物技术通讯》 CAS 2016年第5期679-683,共5页
目的:利用含有基因串联表达质粒的大肠杆菌工程菌催化咖啡因制备可可碱。方法:通过分子生物学手段将高活性C1咖啡因脱甲基化酶与葡萄糖脱氢酶串联表达质粒转化大肠杆菌,该脱甲基酶在菌体生长过程中与菌体自身电子传递链相关蛋白偶合,从... 目的:利用含有基因串联表达质粒的大肠杆菌工程菌催化咖啡因制备可可碱。方法:通过分子生物学手段将高活性C1咖啡因脱甲基化酶与葡萄糖脱氢酶串联表达质粒转化大肠杆菌,该脱甲基酶在菌体生长过程中与菌体自身电子传递链相关蛋白偶合,从而赋予菌体脱甲基化功能,结合葡萄糖脱氢酶对辅酶NADH的循环作用,可以高效催化咖啡因1位脱甲基得到可可碱。结果:发酵在线转化,投入咖啡因5 g/L,25 h可可碱产量可达3.01 g/L,转化率大于95%。该催化反应体系无毒性化学试剂污染,转化效率较高。结论:为生物法催化咖啡因生产可可碱路线奠定了前期基础,也为未来生物法制备可可碱技术的工业化研究指明方向。 展开更多
关键词 生物催化 咖啡因 咖啡因脱甲基酶 葡萄糖脱氢酶 可可碱
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洛伐他汀酰基转移酶在毕赤酵母中的高效表达
3
作者 袁国强 李鹤 +2 位作者 王翠 韩卫强 任丽梅 《生物技术通讯》 CAS 2015年第6期767-771,共5页
目的:构建并筛选高效表达洛伐他汀酰基转移酶(Lov D)的毕赤酵母重组菌株。方法:将突变的Lov D基因克隆到毕赤酵母胞外表达质粒p PIC9K和胞内表达质粒p AO815中,将重组表达质粒电转入毕赤酵母GS115中,得到毕赤酵母重组菌株,通过摇瓶发酵... 目的:构建并筛选高效表达洛伐他汀酰基转移酶(Lov D)的毕赤酵母重组菌株。方法:将突变的Lov D基因克隆到毕赤酵母胞外表达质粒p PIC9K和胞内表达质粒p AO815中,将重组表达质粒电转入毕赤酵母GS115中,得到毕赤酵母重组菌株,通过摇瓶发酵筛选高酶活力的重组菌株;在此基础上,研究重组菌在5L发酵罐中的高密度发酵,并将所得酶液进行辛伐他汀催化反应。结果:p PIC9K-Lov D胞外表达重组菌的酶活是p AO815-Lov D胞内表达重组菌的3倍。筛选到酶活高的p PIC9K-Lov D-3菌株进行5L发酵罐放大实验,经过96 h的甲醇诱导表达,酶活可达609.3 U/L;发酵所得酶液冻干后进行酶功效实验,反应45 h后,其底物转化率可达96%以上。结论:构建的毕赤酵母胞外表达菌株可高效表达洛伐他汀酰基转移酶,培养液上清杂蛋白较少,有利于后续分离和纯化,为洛伐他汀酰基转移酶的工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 洛伐他汀酰基转移酶 高效表达 辛伐他汀
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