NRAMP1基因3′UTR多态性与新疆哈萨克族结核病易感性的研究 被引量：9

1

作者 李春柱 贾学斌 +1 位作者 孟宪杰 张万江 《生命科学研究》 CAS CSCD 2010年第2期125-129,共5页

为了研究人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白NRAMP1基因3′UTR多态性与新疆哈萨克族结核病易感性的关系,研究选取新疆哈萨克族活动性结核病患者213例,新疆哈萨克族正常对照者211人,用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法... 为了研究人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白NRAMP1基因3′UTR多态性与新疆哈萨克族结核病易感性的关系,研究选取新疆哈萨克族活动性结核病患者213例,新疆哈萨克族正常对照者211人,用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法对NRAMP1基因3′UTR多态性进行基因分型,比较不同基因型及等位基因的频率,经统计学分析,探讨NRAMP1基因3′UTR多态性与新疆哈萨克族结核病易感性的关系.结果显示,在新疆哈萨克族活动性结核病患者组中NRAMP1基因3′UTR TGTG+/TGTG+基因型138例(64.8%),TGTG+/del基因型63例(29.6%),del/del基因型12例(5.6%);新疆哈萨克族正常对照组TGTG+/TGTG+基因型则为167例(79.1%),TGTG+/del基因型41例(19.5%),del/del基因型3例(1.4%).新疆哈萨克族结核病患者组TGTG+/del基因型和del/del基因型频率明显高于新疆哈萨克族正常对照组,差异有统计学意义(χ2=10.8,P<0.01);在新疆哈萨克族结核病患者组的TGTG+等位基因频率为79.6%,del等位基因频率为20.4%,新疆哈萨克族正常对照组中TGTG+和del等位基因频率分别为88.9%和11.1%,del等位基因在新疆哈萨克族结核病患者组中的分布频率高,差异有统计学意义(χ2=13.7,P<0.01).研究结果提示TGTG缺失等位基因可能是新疆哈萨克族结核病的易感基因,携带TGTG+/del和del/del基因型的新疆哈萨克族人群可能更易患结核病. 展开更多

关键词 NRAMP1基因 多态性 结核病 易感性

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灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响

2

作者 丰启盈 邓喜玲 +9 位作者 张杰 董江涛 柳小玲 梁粟 王菊 张辉 吴江东 章乐 吴芳 张万江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1100-1106,共7页

目的探讨灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响。方法以PBS、BCG菌株、B/R菌株与灭活B/R菌株为分组方式,单次皮下接种免疫C57BL/6小鼠。于免疫后第9周、第12周和第15周,分别取各组小鼠脾脏,提取脾脏淋巴细... 目的探讨灭活的新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对小鼠T淋巴细胞免疫记忆的影响。方法以PBS、BCG菌株、B/R菌株与灭活B/R菌株为分组方式,单次皮下接种免疫C57BL/6小鼠。于免疫后第9周、第12周和第15周,分别取各组小鼠脾脏,提取脾脏淋巴细胞。各组脾脏淋巴细胞半数直接检测,其余部分进行体外培养,并按实验设计以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)进行刺激,而后进行检测。应用流式细胞技术分别检测未经PPD刺激和经刺激的小鼠脾脏淋巴细胞内中央型记忆性T细胞(T_(CM))和效应型记忆性T细胞(T_(EM))数量。结果免疫后未经PPD刺激,第9周时,灭活B/R组、B/R组、BCG组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=13.20,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=28.15,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=8.92,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=6.13,P<0.05)高于PBS组。第12周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=15.97,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=13.60,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=5.52,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=20.15,P<0.05)高于PBS组。第15周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=15.40,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=7.43,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=6.57,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=9.27,P<0.05)高于PBS组。免疫后经结核特异性抗原PPD刺激,在第9周时,灭活B/R组、B/R组、BCG组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=9.66,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=11.20,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=7.24,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=9.30,P<0.05)高于PBS组。第12周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=9.33,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=6.94,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=67.71,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=10.86,P<0.05)高于PBS组。第15周时,各组诱导产生的CD_(4)^(+)T_(CM)(F=39.88,P<0.05)与CD_(4)^(+)T_(EM)(F=11.93,P<0.05)高于PBS组;诱导产生的CD_(8)^(+)T_(CM)(F=138.80,P<0.05)与CD_(8)^(+)T_(EM)(F=38.47,P<0.05)高于PBS组。值得注意的是,在第15� 展开更多

关键词 结核病 灭活疫苗 T淋巴细胞 免疫记忆

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微量铁元素在结核病发病机制中作用的研究进展 被引量：4

3

作者 李微 张万江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期554-556,共3页

巨噬细胞的铁代谢与结核分枝杆菌的生长繁殖有密切的关系。结核分枝杆菌感染宿主后,主要在宿主巨噬细胞内生长繁殖,巨噬细胞为其生长提供所需要的铁元素,而未被机体免疫系统清除的结核分枝杆菌必须依靠巨噬细胞提供铁元素才能维持其活... 巨噬细胞的铁代谢与结核分枝杆菌的生长繁殖有密切的关系。结核分枝杆菌感染宿主后,主要在宿主巨噬细胞内生长繁殖,巨噬细胞为其生长提供所需要的铁元素,而未被机体免疫系统清除的结核分枝杆菌必须依靠巨噬细胞提供铁元素才能维持其活性和生存。巨噬细胞内转铁蛋白受体1(TfR1)不仅维持巨噬细胞内铁元素的动态平衡,影响胞内结核分枝杆菌生存,而且诱导巨噬细胞自身凋亡,最终杀伤结核分枝杆菌。近年来,有研究表明铁元素与结核分枝杆菌耐药相关。研究铁元素在结核病的发生、发展机制以及结核病耐药机制中的作用,对进一步明确结核病的发病机制,开创治疗结核病的新方法有重要意义。 展开更多

关键词 铁代谢 巨噬细胞 结核分枝杆菌 耐药

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活性氧(ROS)在三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG_2凋亡中的作用 被引量：3

4

作者 翟顺生 赵贵先 +1 位作者 张志会 王雪雯 《农垦医学》 2009年第5期385-389,共5页

目的:利用Mn(Ⅲ)TBAP能特异性清除细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS),观察不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)单独和联合Mn(Ⅲ)TBAP作用于人肝癌HepG_2细胞后细胞内活性氧(ROS)的变化和对凋亡的影响,探讨活性氧(ROS)在三氧化二砷(As_... 目的:利用Mn(Ⅲ)TBAP能特异性清除细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS),观察不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)单独和联合Mn(Ⅲ)TBAP作用于人肝癌HepG_2细胞后细胞内活性氧(ROS)的变化和对凋亡的影响,探讨活性氧(ROS)在三氧化二砷(As_2O_3)诱导肝癌细胞株HepG_2凋亡中的作用。方法:实验分3组:对照组,不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)组,三氧化二砷(As_2O_3)+Mn(Ⅲ)TBAP组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞生长增殖活性;激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS的变化;AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:2、4、8μmol/L三氧化二砷(As_2O_3)处理HepG_2细胞后各组细胞增殖抑制率高于对照组(p<0.05),细胞增殖抑制率随As_2O_3浓度的增加及作用时间的延长而升高(p<0.05);HepG_2细胞内ROS的水平随As_2O_3浓度的增加而升高(p<0.05),As_2O_3处理组HepG_2细胞内ROS水平高于空白对照组(p<0.05),As_2O_3+Mn(Ⅲ)TBAP组HepG_2细胞内ROS的水平低于As_2O_3组(p<0.05),但高于对照组(p<0.05)。细胞早期凋亡率随As_2O_3浓度的增加及作用时间的延长而升高(p<0.05),且均高于Mn(Ⅲ)TBAP+As_2O_3组和对照组,Mn(Ⅲ)TBAP+As_2O_3组高于对照组。结论:三氧化二砷作用于HepG_2细胞促进了细胞内ROS的产生,ROS水平的提高增加了三氧化二砷促HepG_2细胞凋亡的敏感性。 展开更多

关键词 三氧化二砷 活性氧(ROS) 人肝癌细胞株HEPG2 凋亡

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Canstatin基因转染对人肝癌HepG-2细胞体外血管生成拟态的影响 被引量：3

5

作者 张志会 赵贵先 +1 位作者 王雪雯 傅文达 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第4期633-635,F0002,共4页

目的:探讨转染Canstatin基因对人肝癌HepG-2细胞体外形成血管生成拟态的影响。方法:将Canstatin基因通过脂质体法转染人肝癌HepG-2细胞,行G418筛选获得转基因细胞克隆。用SDS-PAGE电泳检测Canstatin蛋白在转基因细胞培养上清液中的表达... 目的:探讨转染Canstatin基因对人肝癌HepG-2细胞体外形成血管生成拟态的影响。方法:将Canstatin基因通过脂质体法转染人肝癌HepG-2细胞,行G418筛选获得转基因细胞克隆。用SDS-PAGE电泳检测Canstatin蛋白在转基因细胞培养上清液中的表达;建立HepG-2细胞人工基底膜基质凝胶体外三维细胞培养模型,观察HepG-2细胞能否形成血管生成拟态,并比较转基因和未转基因细胞的管道形成能力。结果:Canstatin在转染人HepG-2细胞中表达并分泌至上清液中,人肝癌HepG-2细胞在体外三维培养条件下能够形成血管生成拟态。Canstatin基因转染HepG-2细胞组的管状结构数量高于空载体组和HepG-2细胞组,转染细胞管道形成能力明显受抑制。结论:人肝癌HepG-2细胞株可形成血管生成拟态,Canstatin能抑制人肝癌细胞株HepG-2体外血管生成拟态形成。 展开更多

关键词 血管能抑素 基因转染 肝细胞癌 血管生成拟态

原文传递

转化生长因子-β1基因多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的关系 被引量：3

6

作者 石晓鹏 杨建峰 +5 位作者 钟华 邓峰美 王刚 王振焕 陈雄英 何芳 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1072-1074,共3页

原发性高血压（EH）是一类由多基因和环境因素共同影响导致的复杂遗传性疾病,是最常见的慢性心血管病之一,其病因和发病机制尚未完全阐明.新疆哈萨克族人群是EH易感人群,居全国各民族高血压患病率的前5位[1].哈萨克族人群居住在气候寒冷... 原发性高血压（EH）是一类由多基因和环境因素共同影响导致的复杂遗传性疾病,是最常见的慢性心血管病之一,其病因和发病机制尚未完全阐明.新疆哈萨克族人群是EH易感人群,居全国各民族高血压患病率的前5位[1].哈萨克族人群居住在气候寒冷,交通不便,相对隔离的山区,无异族通婚史,有着鲜明的民族聚集和高发的特征.目前国内外有关单核苷酸多态性（SNP）与疾病的关联研究,在SNP位点的选择上除了注意功能区（启动子和外显子）外,由于不同连锁标记间连锁不平衡（LD）模式,为增加基因分型的有效性,还需进行标签SNP（tagSNP）与疾病的关联研究.由于转化生长因子-β1（TGF-β1）基因是血压和血管重构的重要调节因子,可能导致高血压的发病,而TGF-β1基因多态性在高血压中的作用尚无确切结果,因此本研究采用SNaPshot技术对TGF-β1基因的tagSNP多态位点开展研究,以期进一步阐明基因型与EH发生的关联. 展开更多

关键词 原发性高血压 转化生长因子-Β1 基因多态性

原文传递

eNOS基因27bp VNTR多态性与新疆哈萨克族和汉族原发性高血压的对比分析 被引量：3

7

作者 张强 邓峰美 +6 位作者 刘成 何芳 王刚 邹放君 卢贤贵 钟华 唐斌 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第5期592-597,共6页

探讨内皮型一氧化氮合酶基因27bp VNTR多态性与新疆哈萨克族和汉族原发性高血压的相关性研究。运用多重单碱基延伸分型技术(Multiplex SNapshot)对新疆哈萨克族363例高血压患者和370例健康对照,汉族346例高血压患者,385例健康对照进行e... 探讨内皮型一氧化氮合酶基因27bp VNTR多态性与新疆哈萨克族和汉族原发性高血压的相关性研究。运用多重单碱基延伸分型技术(Multiplex SNapshot)对新疆哈萨克族363例高血压患者和370例健康对照,汉族346例高血压患者,385例健康对照进行eNOS基因27bp VNTR多态性分型,比较基因型、等位基因在病例和对照组中的分布频率及同一基因型、等位基因频率在两民族间的差异性及与原发性高血压(EH)的相关性。结果显示:(1)哈萨克族人群中检测到4种基因型bb、aa、ab、bc,EH组及对照组中的分布频率分别为78.5%、78.6%;1.9%、1.1%;19.0%、20.0%;0.6%、0.3%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。等位基因b、a、c在EH组和对照组中分布频率分别为88.3%、88.8%;11.4%、11.1%;0.3%、0.1%,组间差异无统计学意义(P>0.05);(2)汉族对照组中检测到四种基因型bb、aa、ab、bc,未在EH组检测到bc基因型,EH组及对照组中的分布频率分别为80.3%、79.5%;0.9%、1.0%;18.8%、19.2%;0%、0.3%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。等位基因b、a、c在EH组和对照组中分布频率分别为89.7%、89.2%;10.3%、10.6%;0%、0.2%,组间差异无统计学意义(P>0.05);(3)eNOS基因27bp VNTR位点基因型及等位基因在汉族与哈萨克族总人群、高血压及非高血压人群中差异无统计学意义(P>0.05)。新疆哈萨克族和汉族居民eNOS基因27bp VNTR多态性与原发性高血压不相关。 展开更多

关键词 原发性高血压 内皮型一氧化氮合酶 多态性 哈萨克族 汉族

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结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化 被引量：3

8

作者 赵小杰 黄晓艳 +9 位作者 庹清章 董江涛 田玺择 刘云霞 董伟杰 刘丹霞 李微 吴芳 章乐 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第1期54-60,共7页

探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡... 探讨结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因缺失突变菌株对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的影响及其时相性变化。用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞,流式细胞术检测不同时期感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率,比较结核分枝杆菌Hsp16.3基因缺失突变株与正常株感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率的时相性变化。激光共聚焦显微镜检测结果显示:结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗菌株(BCG)以及卡介苗株Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)均被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。流式细胞技术检测结果显示:小鼠感染△H37Rv菌株后,巨噬细胞的凋亡率逐渐上升,至感染7d时达到高峰,随后逐渐降低,1～7d内,各时间段△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率均显著高于H37Rv感染组,9～11d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率反而低于H37Rv菌株组,但13～15d内,△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率又呈现出比H37Rv感染组高的现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。△BCG组凋亡率1～7d内呈现明显下降趋势,7d后巨噬细胞凋亡率变化趋于平稳,且1～5d内,△BCG组凋亡率显著高于BCG组(P<0.05),7～15d内,△BCG组与BCG组巨噬细胞凋亡率无明显差异。结果表明:与结核分枝杆菌H37Rv株野生株相比,结核分枝杆菌H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株在感染的早期和晚期对小鼠肺泡巨噬细胞有更强的致凋亡作用,而这种致凋亡作用与结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3基因的缺失相关,说明在结核分枝杆菌感染的早期和晚期,结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的表达能够抑制宿主巨噬细胞的凋亡。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Hsp16 3 缺失突变 巨噬细胞 凋亡

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pcDNA3.1-Canstatin-3Flag真核表达载体的构建及转染HepG2细胞中的表达 被引量：1

9

作者 赵贵先 张志会 +3 位作者 翟顺生 傅文达 张建华 王雪雯 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第3期450-452,共3页

目的:构建pcDNA3.1-Canstatin-3Flag载体并稳定转染肝癌HepG2细胞,检测canstatin在mRNA水平的表达。方法:胎盘中提取总RNA,RT-PCR法获得canstatinDNA,克隆至pcDNA3.1(-)载体中,并测序,重组质粒pcDNA3.1-Canstatin-3Flag转染肝癌HepG2细... 目的:构建pcDNA3.1-Canstatin-3Flag载体并稳定转染肝癌HepG2细胞,检测canstatin在mRNA水平的表达。方法:胎盘中提取总RNA,RT-PCR法获得canstatinDNA,克隆至pcDNA3.1(-)载体中,并测序,重组质粒pcDNA3.1-Canstatin-3Flag转染肝癌HepG2细胞,G418筛选出稳定转染细胞,RT-PCR检测canstatin mRNA表达。结果:1.成功构建出pcDNA3.1-Canstatin-3Flag重组质粒;2.获得稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag的肝癌HepG2细胞;3.发现转染后的肝癌HepG2细胞canstatin在mRNA水平比未转染细胞有明显的增强。结论:获得了稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag的肝癌HepG2细胞,为后期canstatin在肝癌中的研究提供了支持。 展开更多

关键词 CANSTATIN 肝癌HEPG2细胞 基因转染 RT-PCR

原文传递

结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定 被引量：2

10

作者 梁晨 姜晓霞 +10 位作者 张锋 王霞 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 樊超 庄睿 李文娟 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第6期697-701,共5页

为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(... 为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 PHOP PhoR pMV361

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泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响研究 被引量：2

11

作者 张帅 吴芳 +5 位作者 吴江东 章乐 朱荟云 张大龙 武青青 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第2期163-168,共6页

为探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响及其机制。采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的... 为探讨泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的影响及其机制。采用刃天青显色法,比较单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼最低抑菌浓度(MIC)值的差异;比较在应用外排泵抑制剂后,单耐异烟肼结核杆菌(对照组)与4种基因(Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因)过表达的单耐异烟肼结核杆菌菌株和4种相同基因缺失突变的单耐异烟肼结核杆菌菌株异烟肼MIC差值间的差异。结果显示:(1)与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达PafA基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了1.03μg/m L,过表达Dop、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了1.03μg/m L、0.68μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05);与单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC值分别降低了4.82、4.98、4.99、4.9μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Pup基因的该菌株异烟肼的MIC差值增加了8μg/m L,缺失Pup、Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低4.65、4.81、4.83、4.75μg/m L,差异均有统计学意义(P<0.05);与在应用外排泵抑制剂后单耐异烟肼结核杆菌相比,过表达Dop、PafA、Mpa基因的该菌株异烟肼的MIC差值分别降低了1、0.99、0.65μg/m L,差异均无统计学意义(P>0.05)。由此可知,结核杆菌泛素样蛋白蛋白酶体系统对单耐异烟肼结核杆菌耐药性的产生有调控作用,其作用机制可能是通过调控单耐异烟肼结核杆菌外排泵的功能来调控其耐药性的产生。 展开更多

关键词 结核杆菌 泛素样蛋白-蛋白酶体系统 耐药性 异烟肼 机制

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新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对T细胞免疫记忆的建立及保护效应的研究 被引量：2

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作者 邵萌 吴芳 +6 位作者 张杰 董江涛 吴江东 柳小玲 章乐 赵海军 张万江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期611-617,共7页

目的探讨研究新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对T细胞免疫记忆的建立及保护效应的影响。方法C57BL/6小鼠分别皮下接种PBS、BCG、H37Ra和B/R菌株,各组小鼠于免疫后不同时间点,利用ELISA方法检测血清中IL-2、IFN-γ的水平;用流式细胞技术检... 目的探讨研究新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对T细胞免疫记忆的建立及保护效应的影响。方法C57BL/6小鼠分别皮下接种PBS、BCG、H37Ra和B/R菌株,各组小鼠于免疫后不同时间点,利用ELISA方法检测血清中IL-2、IFN-γ的水平;用流式细胞技术检测小鼠脾脏中央型记忆性淋巴细胞(TCM)及效应型记忆性淋巴细胞(TEM)的数量;检测各组小鼠脾脏和肺脏组织中的菌落数(CFU),以及根据肺脏病理损伤程度评价B/R菌株的保护效果。结果免疫小鼠8周,B/R菌株组小鼠血清中,产生了高于BCG组的IL-2(q=4.709,P<0.05)和IFN-γ(q=5.477,P<0.05),与H37Ra组无统计学差异。免疫小鼠12周,B/R菌株组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平与BCG组和H37Ra组均无统计学差异。免疫小鼠16周,B/R菌株组小鼠血清IFN-γ水平高于BCG组(q=4.243,P<0.05),与H37Ra组无统计学差异;B/R菌株组小鼠血清IL-2水平与BCG组和H37Ra组均无统计学差异。免疫小鼠8、12、16周,与PBS组相比较,除12周时B/R菌株组的CD8^+TCM水平有所降低外,B/R菌株组均可诱导产生较高水平的CD4^+TCM(F=5.178,P<0.05)、CD4^+TEM(F=72.04,P<0.05)以及CD8^+TCM(F=16.86,P<0.05)、CD8^+TEM(F=27.93,P<0.05)。随免疫时间延长,即16周时,与BCG组相比较,B/R菌株组可维持更高水平的CD4^+TEM(q=31.55,P<0.05)和CD8^+TEM(q=16.08,P<0.05),TCM无统计学差异。BCG、H37Ra和B/R菌株免疫小鼠后,各组小鼠脏器病理损伤程度及菌落数,无统计学差异。结论B/R菌株免疫小鼠后,可建立较高水平的T细胞免疫记忆,以TEM为主,其免疫记忆水平可维持近4月,并且与BCG免疫保护效果相当。 展开更多

关键词 结核病 疫苗 免疫记忆 记忆T细胞 免疫保护效应

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豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定 被引量：1

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作者 肖靖杰 张治平 +6 位作者 王洋 司超 张亮 张伟 李丽 李新芝 马克涛 《中国现代医学杂志》 CAS 2018年第29期1-5,共5页

目的本研究联合使用直接贴壁法和酶消化法培养细胞,从豚鼠脑基底动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠颅内分离出脑基底动脉,用0.125%胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行培... 目的本研究联合使用直接贴壁法和酶消化法培养细胞,从豚鼠脑基底动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠颅内分离出脑基底动脉,用0.125%胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养。采用自然纯化法,并根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化。通过形态学观察、免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测对细胞进行鉴定。结果 85%组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测显示,平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本实验可以得到大量高纯度的豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞,有望为颅内动脉粥样硬化等病理生理变化的体外研究及脑血管平滑肌药物评价提供一个理想的实验材料。 展开更多

关键词 豚鼠 脑基底动脉 细胞培养 肌动蛋白

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Canstatin基因导入抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长及血管生成 被引量：2

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作者 史文荣 王雪雯 +1 位作者 宋海林 段晶晶 《现代肿瘤医学》 CAS 2013年第7期1430-1433,共4页

目的:探讨Canstatin基因导入对裸鼠人肝癌皮下移植瘤的生长及肿瘤血管形成的作用。方法:建立肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型并鉴定,运用Ad-Canstatin/GFP基因治疗,Western blot法检测转染后瘤组织内Canstatin蛋白的表达。治疗期间观察... 目的:探讨Canstatin基因导入对裸鼠人肝癌皮下移植瘤的生长及肿瘤血管形成的作用。方法:建立肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型并鉴定,运用Ad-Canstatin/GFP基因治疗,Western blot法检测转染后瘤组织内Canstatin蛋白的表达。治疗期间观察Canstatin对裸鼠及移植瘤生长的影响,用药后HE染色观察肝肾损害,计数外周血白细胞数目;免疫组织化学法检测瘤内微血管密度(microvascular density,MVD)及血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的数目。结果:成瘤率100%。Ad-Canstatin转染组Canstatin蛋白表达增多;Ad-Canstatin组裸鼠食量大于两对照组(P<0.05)。同时排泄量、饮水量均少于两对照组(P<0.05)。体重生长曲线显示Ad-Canstatin组体重持续增加,两对照组体重后期出现不增或下降趋势。Ad-Canstatin组移植瘤瘤体积增长缓慢,治疗第10天,瘤体积小于两对照组(P<0.05);Ad-Canstatin组瘤重小于两对照组(P<0.05),抑瘤率:37.50%。Ad-Canstatin组肝、肾、造血系统未见异常。Ad-Canstatin组MVD、VM数目均少于两对照组(P<0.05)。结论:腺病毒介导Canstatin基因可通过抑制瘤内血管生成,从而抑制HepG2肝癌移植瘤的生长,实验期内未见明显不良反应。 展开更多

关键词 肝癌 血管抑素 基因导入 血管生成

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程序性死亡分子1及其配体在急性感染性疾病中的作用 被引量：2

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作者 庹清章 张万江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期663-665,共3页

程序性死亡分子1(PD-1)及其配体在慢性感染性疾病中抑制免疫力的作用已得到证实,但它在急性感染性疾病中的具体作用却不是十分明确。最近研究结果提示:PD-1途径在一些急性感染性疾病中能够抑制CD8+T细胞应答,并能通过失助的记忆CD8+T细... 程序性死亡分子1(PD-1)及其配体在慢性感染性疾病中抑制免疫力的作用已得到证实,但它在急性感染性疾病中的具体作用却不是十分明确。最近研究结果提示:PD-1途径在一些急性感染性疾病中能够抑制CD8+T细胞应答,并能通过失助的记忆CD8+T细胞抑制应答。PD-1除了能限制T细胞和B细胞非依赖性适应性免疫反应之外,还能限制树突状细胞(DC)和巨噬细胞的功能,这是最近研究发现的PD-1在固有免疫中的一种新的作用。因此,PD-1在急性感染性疾病中能够影响免疫反应,但对这种影响作用发生机制的研究则刚刚起步,现就PD-1及其配体在急性感染性疾病中对效应记忆性T细胞应答的调节作用的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 PD-1 PD-1配体 急性感染性疾病 作用

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低氧条件下三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG_2凋亡作用 被引量：1

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作者 翟顺生 赵贵先 +1 位作者 张志会 王雪雯 《农垦医学》 2009年第4期306-310,共5页

目的:探讨低氧条件下三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡作用。方法:分别在常氧和低氧(CoCl_2 200μmol/L)条件下以2、4、8μmol/L As_2O_3作用人肝癌HepG_2细胞,24、48、72小时后以MTT法检测细胞增殖抑制率,以AnnexinV/PI双... 目的:探讨低氧条件下三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡作用。方法:分别在常氧和低氧(CoCl_2 200μmol/L)条件下以2、4、8μmol/L As_2O_3作用人肝癌HepG_2细胞,24、48、72小时后以MTT法检测细胞增殖抑制率,以AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,分析两种条件下As_2O_3对细胞增殖抑制率和凋亡率的影响。结果:常氧及低氧条件下细胞增殖抑制率,细胞早期凋亡率均随As_2O_3浓度增加及作用时间延长而升高(P<0.05)。相同浓度As_2O_3、相同作用时间,低氧条件下细胞增殖抑制率及凋亡率升高更为明显。结论:在低氧条件下As_2O_3促进细胞凋亡,抑制肝癌HepG_2细胞增殖的作用显著增强。 展开更多

关键词 低氧 三氧化二砷 人肝癌细胞株HEPG2 凋亡

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卡介苗ERP基因缺失突变株在小鼠体内毒力的研究 被引量：1

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作者 杜燕 张万江 +3 位作者 吴芳 王萍 李蕾 吴江东 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第2期141-144,共4页

为初步研究卡介苗ERP基因缺失突变株对小鼠的毒性作用,将卡介苗ERP基因缺失突变株和BCG分别皮下接种BALB/c小鼠后,取小鼠脾脏和肺脏匀浆,将匀浆液稀释后接种于罗氏培养基,培养3周后计菌落数(CFU);同时观察肺部病理改变,并比较和分析免... 为初步研究卡介苗ERP基因缺失突变株对小鼠的毒性作用,将卡介苗ERP基因缺失突变株和BCG分别皮下接种BALB/c小鼠后,取小鼠脾脏和肺脏匀浆,将匀浆液稀释后接种于罗氏培养基,培养3周后计菌落数(CFU);同时观察肺部病理改变,并比较和分析免疫16周时各组小鼠肺、肝、脾的脏器系数.结果表明,卡介苗ERP基因缺失突变株较BCG对BALB/c小鼠毒性低. 展开更多

关键词 结核分支杆菌 卡介苗ERP基因缺失突变株 BCG 毒性

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三氧化二砷对肿瘤血管内皮细胞作用的研究

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作者 傅文达 王雪雯 张建华 《农垦医学》 2011年第2期130-135,共6页

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制。方法:采用肝癌HepG2细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)成为肿瘤血管内皮细胞(tumor-derived ... 目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制。方法:采用肝癌HepG2细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)成为肿瘤血管内皮细胞(tumor-derived endothelial cells,Td-EC),通过细胞迁徙实验流式细胞术、流式细胞术、血管形成实验检测As2O3对Td-EC细胞生物学特征的影响。结果:As2O3在体外对Td-EC有显著促进凋亡的作用,并能抑制其迁移和血管的形成,较在同样条件下对HUVEC的凋亡、迁移和血管形成作用显著。结论:As2O3在体外可特异地抑制Td-EC生长及功能。 展开更多

关键词 AS2O3 肿瘤血管内皮细胞 凋亡 迁移 血管形成

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血管能抑素的应用及研究进展

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作者 史文荣 王雪雯 《现代肿瘤医学》 CAS 2013年第1期194-197,共4页

血管能抑素是继血管生成抑制素、内皮抑素之后新发现的一种血管生成和肿瘤生长抑制因子。动物实验研究结果显示,血管能抑素通过抑制血管生成、阻断肿瘤生长的营养供应,从而抑制了多种肿瘤细胞的生长和转移。近年来因其具有良好的抗肿瘤... 血管能抑素是继血管生成抑制素、内皮抑素之后新发现的一种血管生成和肿瘤生长抑制因子。动物实验研究结果显示,血管能抑素通过抑制血管生成、阻断肿瘤生长的营养供应,从而抑制了多种肿瘤细胞的生长和转移。近年来因其具有良好的抗肿瘤血管生成活性而倍受关注,成为抗肿瘤治疗研究的新热点之一。本文就其作用机制尤其是在肿瘤治疗中的应用现状及研究进展进行综述和展望。 展开更多

关键词 血管能抑素 血管新生 肿瘤 基因治疗

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小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成 被引量：13

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作者 梁霄 罗小林 +2 位作者 钟华 胡清华 何芳 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期289-295,共7页

为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca^(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small... 为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca^(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca^(2+)浓度(intracellular Ca^(2+)concentration, [Ca^(2+)]i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。结果显示,实验成功将CaR siRNA转入HUVEC,Western blot 检测结果显示转染48 h后,CaR蛋白表达降低(P < 0.05);与未转染对照组和阴性对照组相比,在精胺 + Ca^(2+)刺激下,CaR siRNA转染组的[Ca^(2+)]i、eNOS活性和NO含量均显著降低(P < 0.05)。上述结果表明,CaR在精胺介导的HUVEC Ca^(2+)内流和NO生成中发挥重要作用。 展开更多

关键词 内皮细胞 钙敏感受体 钙信号 NO siRNA

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