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枯草芽孢杆菌Expansin蛋白的原核表达及活性分析 被引量：1
1
作者 叶凯霞 朱华琛 +1 位作者 赵庆新 陈洪生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第9期977-982,共6页
目的原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性。方法以过夜培养的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,... 目的原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性。方法以过夜培养的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,构建重组质粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并对表达条件进行优化。产物经Ni-NTA纯化,检测其与多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶)及多糖复合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制剂的协同活性(synergistic activity,SA)。结果经双酶切鉴定,重组质粒heh-p ET28a(+)构建正确;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃诱导30 h的最适表达条件下,表达量约为1. 2 mg/m L,其相对分子质量为26 400,目的蛋白纯度达95%;该蛋白与纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的SA分别为171. 53%、61. 95%、230. 00%,与PCE降解滤纸(filter paper)、秸秆(rice straw)的SA分别为312. 83%、356. 59%。结论重组的融合蛋白HEH与PDE均具有较高的协同作用,为Expansin在生物质木质纤维素糖化领域的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 EXPANSIN 原核细胞 基因表达 多糖糖化 协同活性
原文传递
PelA-Expansin融合蛋白原核重组表达研究
2
作者 魏玲玲 叶凯霞 +1 位作者 李嘉欣 赵庆新 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期17-20,45,共5页
扩张蛋白(Expansin)具有削弱细胞壁多糖之间氢键,增强多糖降解酶降解多糖的效率。在食品领域、生物能源领域和生物制药领域,具有广泛的应用价值。自然状态下,Expansin蛋白在植物、真菌、细菌等生物中的表达量较少,目前,枯草芽孢杆菌Expa... 扩张蛋白(Expansin)具有削弱细胞壁多糖之间氢键,增强多糖降解酶降解多糖的效率。在食品领域、生物能源领域和生物制药领域,具有广泛的应用价值。自然状态下,Expansin蛋白在植物、真菌、细菌等生物中的表达量较少,目前,枯草芽孢杆菌Expansin重组表达研究受到广泛关注。以来源于构巢曲霉的果胶酸裂解酶(PelA)为融合标签,构建高效表达融合蛋白PelA-Expansin的工程菌newexpansin/pelA-pET-28a(+)/BL21(DE3),在OD_(600)为0.4、0.01 mmol/L IPTG、15℃和150 r/min下,表达24 h,融合蛋白产量约为3.0 mg/mL。建立融合蛋白一次性His-tag亲和纯化工艺,工艺中上样、清洗和洗脱缓冲液中咪唑浓度分别为30、60和500 mmol/L,目标蛋白纯度约为95%,得率约为75%;融合蛋白协同纤维素酶、木聚糖酶和果胶酸水解酶酶降解多糖的效率分别为300%、150%和125%;为扩张蛋白Expansin在食品、能源、医药及农业等领域的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 扩张蛋白基因 果胶酸裂解酶 融合表达 分离纯化 活性分析
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