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鉴别检测野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒多重荧光定量PCR方法的建立 被引量：10
1
作者 韩勇军 曹鹏程 +4 位作者 赵亚齐 侯广争 王学军 马增彬 刘丽艳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期41-47,共7页
为建立一种鉴别检测野生型和基因缺失株非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV P72、CD2v、MGF360-14L基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测P72、CD2v、MGF360-14L基因的多重荧... 为建立一种鉴别检测野生型和基因缺失株非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV P72、CD2v、MGF360-14L基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测P72、CD2v、MGF360-14L基因的多重荧光定量PCR方法。该方法与伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应,可鉴别野生型和基因缺失株ASFV,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对P72、CD2v和MGF360-14L重组质粒标准品的最低检测限均为100 copies/m L,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性较好。利用ASFV核酸检测试剂盒与本实验室建立的方法分别对35份临床样品进行检测,两种方法的检出率均为68.57%,阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的多重荧光定量PCR方法对ASFV的鉴别检测、病原流行病学调查等研究具有重要意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 多重荧光定量PCR 鉴别诊断 基因缺失株
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米托蒽醌甲磺酸盐预处理脂肪间充质干细胞对犬糖尿病的治疗效果评价 被引量：1
2
作者 谭宁 李巴仑 +7 位作者 韩苗 李琛琛 景远翔 寇正 李娜 彭莎 赵献军 华进联 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1328-1344,共17页
本研究在高脂饮食(high-fat diet, HFD)饲喂和链脲佐菌素(streptozotin, STZ)注射的联合作用下成功建立小鼠及犬糖尿病模型,旨在探究米托蒽醌甲磺酸盐(mitoquionl mesylate, MitoQ)预处理脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal ... 本研究在高脂饮食(high-fat diet, HFD)饲喂和链脲佐菌素(streptozotin, STZ)注射的联合作用下成功建立小鼠及犬糖尿病模型,旨在探究米托蒽醌甲磺酸盐(mitoquionl mesylate, MitoQ)预处理脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs)对糖尿病动物模型治疗效果的提升作用及机制。取正常培养状态的ADMSCs及添加1μmol·L^(-1)MitoQ处理的ADMSCs,对MitoQ处理的细胞形态变化、生长、增殖、迁移及抗氧化能力等进行检测。选取48只8周龄的昆明(KM)雄性小鼠和12只中华田园犬,随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(Diabetes组)、ADMSCs单独治疗组(ADMSCs组)和MitoQ预处理ADMSCs联合治疗组(MitoQ-ADMSCs组)。常规方法制作小鼠及犬糖尿病模型,对模型小鼠和犬分别进行ADMSCs和MitoQ-ADMSCs细胞静脉移植治疗,细胞数为2×10^(6)·只^(-1)(小鼠)和1×10^(7)·只^(-1)(犬),每周1次,连续3周。持续监测临床指标变化,治疗结束后1周收样,血清学、组织学、氧化应激及犬血清代谢组学分析。结果表明,MitoQ预处理ADMSCs不会影响其细胞形态,但能促进其生长、增殖及迁移能力,同时增强其抗氧化能力;ADMSCs和MitoQ-ADMSCs移植治疗后,发现MitoQ显著促进ADMSCs降低血糖的能力,且提高胰岛β细胞功能和机体血糖调节能力;ADMSCs经MitoQ预处理后有效减轻糖尿病伴发的肝代谢功能障碍和血脂代谢异常;ADMSCs可以减轻胰腺和肝组织损伤,促进胰岛素分泌,减轻肝糖原合成障碍和纤维化水平,而MitoQ处理能够显著改善ADMSCs治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs能够有效提升机体的抗氧化能力,减轻氧化损伤,进而增强治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs可以显著促进机体内与抗氧化相关的代谢物表达上调。结果揭示,MitoQ能够通过提高ADMSCs的抗氧化能力、加速组织损伤修复,从而更好地治疗小鼠及犬糖尿病。 展开更多
关键词 米托蒽醌甲磺酸盐 脂肪间充质干细胞 犬 糖尿病
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布鲁氏菌量子点荧光微球免疫层析试纸条的研制
3
作者 许玉静 杨若松 +2 位作者 李翀 华利忠 杨卫军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期915-920,共6页
为制备基于量子点荧光微球的布鲁氏菌免疫层析试纸条,将布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体和山羊抗鼠Ig G抗体分别作为检测线和质控线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点荧光微球标记布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行... 为制备基于量子点荧光微球的布鲁氏菌免疫层析试纸条,将布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体和山羊抗鼠Ig G抗体分别作为检测线和质控线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点荧光微球标记布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行组装、切割制成检测用试纸条,并测定其敏感性、特异性和稳定性。以布鲁氏菌荧光定量PCR检测技术为对照,应用该试纸条检测临床样本120份,比较两种方法的符合率。结果显示,建立的量子点荧光微球免疫层析试纸条性能较好,检测敏感性达到1 ng/m L;特异性较好,与其他病原没有交叉反应;常温保存18个月或37℃保存28 d,其稳定性较好,变异系数分别为3.2%和14.6%;利用该试纸条和荧光定量PCR方法对120份临床样本进行检测,与荧光定量PCR检测结果相比,其阳性符合率为91%,阴性符合率为100%,总符合率为99%。上述结果表明,该试纸条操作简单、快速稳定、灵敏度高、成本低,20 min内即可完成检测,样本获取容易,可实现现场快速检测,在布鲁氏菌病的病原检测及净化工作中具有良好应用前景。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 量子点荧光微球 免疫层析技术
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布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条的研制
4
作者 杨若松 马增彬 +3 位作者 龚雅云 蔡云虹 南文龙 李知新 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期85-89,共5页
本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤... 本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤维素膜作为量子点结合垫,经组装、切割制备免疫层析试纸条。使用布鲁氏菌病阳性血清国家标准品测定所建立方法的灵敏度和稳定性,使用牛鼻气管炎阳性血清等常见牛病血清及牛布鲁氏菌病阴性血清国家标准品评价该方法的特异性;使用建立的方法与间接ELISA(iELISA)同步检测100份临床血清样品,比较两者的符合率。结果显示:量子点荧光微球免疫层析试纸条的最低检出限为0.3 IU/mL,常温保存18个月其检测灵敏度不变;与牛鼻气管炎、牛流行性腹泻、牛结节性皮肤病等临床疫病的血清抗体无交叉反应;与iELISA方法的阳性符合率为94.2%,阴性符合率为100%,总符合率为97.0%。结果表明,本研究建立的布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条敏感、特异、稳定,操作时不需要借助仪器,适用于临床快速检测和初筛,可为我国布鲁氏菌病防控提供技术支持。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 荧光微球 免疫层析技术 脂多糖
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用新型间充质干细胞制剂治疗猫创口延迟愈合
5
作者 李巴仑 吕长荣 +2 位作者 颜小云 赵献军 华进联 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期134-137,共4页
创伤后皮肤破裂或手术后皮肤创口都可能导致伤口(或切口)延迟愈合。身体是一个不断代谢的有机体,有自己的调节机制,皮肤损伤后的愈合时间也会遵循同样的规律。如果伤口愈合过程受到负面影响,则可能导致伤口延迟愈合。伤口出现延迟愈合... 创伤后皮肤破裂或手术后皮肤创口都可能导致伤口(或切口)延迟愈合。身体是一个不断代谢的有机体,有自己的调节机制,皮肤损伤后的愈合时间也会遵循同样的规律。如果伤口愈合过程受到负面影响,则可能导致伤口延迟愈合。伤口出现延迟愈合的原因包括感染、药物、异物存留、损伤严重、营养不良、疾病、组织对合不良、年龄因素、皮肤缺损、自体敏感、脂肪液化、皮下积液等。研究建立了一种直接注射的间充质干细胞(MSCs)制剂,用于治疗1例由自体敏感导致的猫创口延迟愈合。治疗后21 d,伤口完全愈合。MSCs的局部植入成功促进了溃烂伤口的皮肤再生,并促进了毛发再生。研究结果为进一步推动干细胞治疗宠物疾病提供了切实可行的治疗剂型并提供了良好的治疗案例。 展开更多
关键词 创伤延迟愈合 间充质干细胞 褪黑素 米托蒽醌甲磺酸盐 胶原蛋白
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警犬衰老和MSCs抗衰老效果评价
6
作者 张翊华 孙龙根 +4 位作者 白春娜 贺婷婷 韩厚玉 高利华 莫坚武 《中国工作犬业》 2024年第4期47-50,共4页
一、前言衰老(aging)是机体从构成物质、组织结构到生理功能随年龄增大出现衰退的过程。犬的生命周期只有13~15年,搜救犬、导盲犬、搜毒犬、搜爆犬、警犬、军犬等工作犬的训练科目众多、费时费力,因此训成犬的服役时间很短。延缓工作犬... 一、前言衰老(aging)是机体从构成物质、组织结构到生理功能随年龄增大出现衰退的过程。犬的生命周期只有13~15年,搜救犬、导盲犬、搜毒犬、搜爆犬、警犬、军犬等工作犬的训练科目众多、费时费力,因此训成犬的服役时间很短。延缓工作犬的衰老速度、适当延长其服役年限,已成为每个训犬人和用犬人的一致心愿,而且,宠物犬的衰老和延缓衰老问题也越来越受到重视。不仅如此,犬的衰老过程要比人类快7倍左右,是研究人类衰老的良好模型。 展开更多
关键词 构成物质 训练科目 服役年限 工作犬 搜爆犬 导盲犬 搜救犬 警犬
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mRNA疫苗在人和动物重大疫病防控中的研究进展 被引量：1
7
作者 高嘉淇 赵献军 华进联 《生理学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期647-658,共12页
已有大量研究证明mRNA疫苗具有安全性高、免疫效果好、开发潜力大等优点,在免疫治疗中是一种应用前景广阔的治疗策略。近年来,通过技术创新,mRNA疫苗的稳定性与体内递送效率大幅提高,目前一些mRNA疫苗已进入临床前试验。本文就mRNA疫苗... 已有大量研究证明mRNA疫苗具有安全性高、免疫效果好、开发潜力大等优点,在免疫治疗中是一种应用前景广阔的治疗策略。近年来,通过技术创新,mRNA疫苗的稳定性与体内递送效率大幅提高,目前一些mRNA疫苗已进入临床前试验。本文就mRNA疫苗的研究概况、技术以及在人和动物重大传染病中的应用三个方面对mRNA疫苗进展进行概述,以期为推进新型mRNA疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 mRNA疫苗 传染病 递送系统
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犬脂肪间充质干细胞静脉移植临床安全性研究
8
作者 罗家明 葛怀娜 +1 位作者 白春娜 葛秀国 《天津农学院学报》 CAS 2023年第6期62-68,共7页
为了验证犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)临床应用的安全性,本试验取第4代犬ASCs,显微镜下观察细胞形态,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化和细胞表面标志蛋白分析。结果显示ASCs呈纺锤体状贴壁生长,形态均匀一致... 为了验证犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)临床应用的安全性,本试验取第4代犬ASCs,显微镜下观察细胞形态,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化和细胞表面标志蛋白分析。结果显示ASCs呈纺锤体状贴壁生长,形态均匀一致,体外ASCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞。犬ASCs表达标记蛋白CD29、CD44、CD105和CD166,不表达CD34和CD45,符合典型的脂肪间充质干细胞特征。犬ASCs以1×10^(6)/kg进行静脉移植,速度10 mL/(kg·h),注射过程中未见任何不良反应。长期观察3个月,未见明显相关并发症。与移植前相比,血液检查发现白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数、嗜酸性粒细胞数、红细胞数、血红蛋白和血小板数等均无显著差异(P>0.05);血清生化检查发现白蛋白、ALT、AKP等肝指标差异不显著(P>0.05),肾指标肌酐、血清尿素、血磷和血钙差异不显著(P>0.05),胰腺相关指标血糖和血清淀粉酶均无显著差异(P>0.05),心肌损伤指标肌酸激酶和血脂指标胆固醇,在细胞移植前后也无显著差异(P>0.05)。本试验结果表明了犬ASCs应用的临床安全性,为细胞移植治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬 脂肪间充质干细胞 移植 安全性
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间充质干细胞在宠物临床疾病治疗中的应用
9
作者 杜佳欣 李巴仑 +3 位作者 赵献军 吴礼平 张选民 华进联 《现代畜牧兽医》 2023年第1期91-96,共6页
间充质干细胞是存在于机体间质组织中的成体干细胞,由于具有强大的自我更新能力、多向分化潜能和旁分泌的作用,已成为近年来宠物临床疾病治疗的研究热点。文章系统概述间充质干细胞在宠物各类疾病治疗中的有效性评价、发挥治疗作用的机... 间充质干细胞是存在于机体间质组织中的成体干细胞,由于具有强大的自我更新能力、多向分化潜能和旁分泌的作用,已成为近年来宠物临床疾病治疗的研究热点。文章系统概述间充质干细胞在宠物各类疾病治疗中的有效性评价、发挥治疗作用的机制和安全性评估等方面,旨在为间充质干细胞在宠物临床疾病治疗中的推广应用提供参考。 展开更多
关键词 间充质干细胞 宠物疾病治疗 治疗机制 安全性评估
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脂肪间质干细胞修复犬关节软骨损伤的研究
10
作者 滕鑫 艾力·艾尔肯 +3 位作者 吕长荣 张欣珂 赵献军 华进联 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期72-76,共5页
以手术方法建立2对共4处犬关节软骨组织损伤;使用无血清细胞培养液为对照,以标记有绿色荧光蛋白的犬脂肪间充质干细胞进行移植治疗试验。病理模型犬进行常规饲养15周后,对病理模型进行取样并系统检测。结果显示,试验组较对照组有更大面... 以手术方法建立2对共4处犬关节软骨组织损伤;使用无血清细胞培养液为对照,以标记有绿色荧光蛋白的犬脂肪间充质干细胞进行移植治疗试验。病理模型犬进行常规饲养15周后,对病理模型进行取样并系统检测。结果显示,试验组较对照组有更大面积和体积的新生关节软骨组织。新生软骨样组织呈绿色荧光蛋白(GFP)阳性。试验组与对照组的新生组织HE染色显示,试验组的细胞外基质染色较对照组更加均一,基质切面更加平整光滑。透明软骨的标志性基因COL2a1的免疫荧光染色显示,试验组可见较强的COL2a1阳性染色,而对照组仅有少量微弱的阳性染色。实时荧光定量PCR检测结果显示,试验组的COL2a1含量显著高于对照组(P<0.05)。试验结果表明,直接移植原代犬脂肪间充质干细胞到关节腔可有效修复犬软骨组织缺损,为干细胞治疗临床软骨组织损伤提供了科学依据。 展开更多
关键词 间充质干细胞 软骨组织损伤 干细胞移植治疗 犬
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