期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到366篇文章
< 1 2 … 19 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
改良间羟基联苯法用于测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量 被引量：13
1
作者 任珍芸 刘爱萍 +5 位作者 陈晓航 王玺 刘倩 张轶 张新庄 沈荣 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期644-649,共6页
目的:建立并验证可测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量的改良间羟基联苯法。方法:优化间羟基联苯和氨基磺酸盐的工作体积;并对改良间羟基联苯法进行线性范围、精密度以及准确度的验证;比较改良间羟基联苯法与咔唑法测定样品结果的差异。... 目的:建立并验证可测定肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量的改良间羟基联苯法。方法:优化间羟基联苯和氨基磺酸盐的工作体积;并对改良间羟基联苯法进行线性范围、精密度以及准确度的验证;比较改良间羟基联苯法与咔唑法测定样品结果的差异。结果:间羟基联苯和氨基磺酸盐的最佳工作体积分别为80和10μL。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg·mL^(-1),其质量浓度与吸光值呈良好的线性关系,R^2>0.99;2型(160603批)、5型(161001批)、9V型(160901批)和22F型(160303批)荚膜多糖批内及批间CV值分别为1.47%~3.11%和4.44%~8.47%;D-葡萄糖醛酸分别以5,10和20μg·mL^(-1)的浓度加入以上几个型别的荚膜多糖后,其回收率为92.11%~103.46%。用改良间羟基联苯法和咔唑法测定出的肺炎球菌荚膜多糖的糖醛酸含量有差异(P<0.05),前者测定分子质量分布与咔唑法测定的结果有较好的一致性。结论:改良间羟基联苯法可检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,其精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗的质量控制。 展开更多
关键词 肺炎球菌荚膜多糖 糖醛酸 咔唑法 改良间羟基联苯法 氨基磺酸盐
原文传递
2018年甘肃省10岁以下儿童流感病毒和呼吸道合胞病毒感染特征 被引量：12
2
作者 于德山 傅生芳 +10 位作者 徐丛杉 马超 张慧 王婉 陈建华 唐悦 李保娣 赵忆宁 李红育 关文竹 王健 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2020年第2期155-159,共5页
目的为了解甘肃省2018年10岁以下儿童中门诊流感样(influenza-like illnes,ILI)病例中流感病毒(influenza virus,Flu)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的病原学特点及流行特征,为Flu、RSV疾病的诊断治疗及防控提供依... 目的为了解甘肃省2018年10岁以下儿童中门诊流感样(influenza-like illnes,ILI)病例中流感病毒(influenza virus,Flu)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的病原学特点及流行特征,为Flu、RSV疾病的诊断治疗及防控提供依据。方法选取甘肃省19家国家级流感监测哨点医院ILI病例咽拭子标本共8559份,用实时荧光PCR检测流感病毒,对其中的3436份,用RT-PCR法对RSV检测。结果Flu阳性934份,阳性率10.91%,其中甲型H1N1阳性431例、H3N2阳性70例、乙型428例、甲型H1N1和乙型混合5例;RSV阳性320份,阳性率9.31%。14个市州之间Flu、RSV检测阳性率差异存在统计学意义(χ^2=56.99,Р<0.01;χ^2=263.34,Р<0.01)。流感1月份为最高峰,阳性率为50.70%,乙型B/Yamagata系(占53.53%)和甲型H1N1(占39.93%)同时流行。RSV的流行高峰在2~4月,阳性率达13.98%,5岁以下儿童RSV阳性率10.11%,高于5岁及以上儿童RSV的阳性率6.94%.具有统计学意义(χ^2=7.67,Р<0.01)。结论10岁以下儿童ILI就诊病例中RSV和Flu是主要的病原,每年冬春季节存在流行高峰,建议加强RSV的监测。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 流感病毒 儿童 流行病学
原文传递
硫酸-咔唑微孔板法检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量 被引量：8
3
作者 任珍芸 陈晓航 +5 位作者 王玺 张轶 张新庄 刘倩 刘爱萍 沈荣 《微生物学免疫学进展》 2017年第2期36-41,共6页
目的利用微孔板检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法以微孔板为反应容器,对常规硫酸-咔唑法的咔唑质量浓度和加热时间进行优化;并对建立的方法进行线性范围、精密度以及准确度的验证及初步应用。结... 目的利用微孔板检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法以微孔板为反应容器,对常规硫酸-咔唑法的咔唑质量浓度和加热时间进行优化;并对建立的方法进行线性范围、精密度以及准确度的验证及初步应用。结果最佳的咔唑质量浓度为0.10 mg/m L,加热时间为20 min。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg/m L范围内,其质量浓度与校正后吸光值呈良好的线性关系,r2>0.99;批内及批间CV值分别为1.54%~3.02%及4.53%~7.75%;加入5μg/m L、10μg/m L、20μg/m LD-葡萄糖醛酸的8-160502、9V-160102、22F-160103荚膜多糖,D-葡萄糖醛酸的回收率为92.21%~110.47%。微孔板法校正前与常规方法在测定肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量时差异无统计学意义(P>0.05),与校正后结果差异有统计学意义(P<0.05)。微孔板法测定分子质量分布与常规方法有较好的一致性。结论硫酸-咔唑微孔板法可有效检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,操作简便快捷,精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的质量控制。 展开更多
关键词 微孔板 肺炎链球菌荚膜多糖 糖醛酸
下载PDF
两种AH100-ATS高压均质机在汉逊酵母细胞破碎中适用性的研究 被引量：1
4
作者 王玢 邵志伟 +7 位作者 杨林鹏 陈卓涛 马素娟 杨千苇 周静 李薇 杨俊杰 周晖国 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第1期48-54,共7页
目的 评价150型AH100-ATS高压均质机和40型AH100-ATS高压均质机在汉逊酵母细胞破碎中的适用性。方法 用2种AH100-ATS高压均质机分别重复破碎3组汉逊酵母,每组细胞破碎3次,光学显微镜下观察并比较2种高压均质机破碎汉逊酵母细胞前后的形... 目的 评价150型AH100-ATS高压均质机和40型AH100-ATS高压均质机在汉逊酵母细胞破碎中的适用性。方法 用2种AH100-ATS高压均质机分别重复破碎3组汉逊酵母,每组细胞破碎3次,光学显微镜下观察并比较2种高压均质机破碎汉逊酵母细胞前后的形态;SDS-PAGE电泳检测破碎后细胞中目的蛋白的释出;血球计数板计数且计算破碎后的细胞破碎率;Bradford法检测及计算蛋白释出度;计时破碎所需要的时间。结果 光学显微镜下,2种高压均质机破碎汉逊酵母细胞前后的细胞形态均可见明显差别;150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母细胞后释出蛋白的粒径分布体积比高于40型AH100-ATS高压均质机,差异有统计学意义(P<0.05);SDS-PAGE电泳结果显示,150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母后目的蛋白的灰度值高于40型AH100-ATS高压均质机,差异有统计学意义(P<0.05)。150型AH100-ATS高压均质机破碎汉逊酵母细胞3次后,细胞破碎率分别为24.16%、35.63%、48.67%,总细胞破碎率为65.70%;蛋白释出度分别为41.69%、38.29%、15.80%,破碎完成后总蛋白释出度为62.63%;平均使用时间分别为16.7、16.7、19.0 min,破碎完成后总时间为52.3 min。40型AH100-ATS高压均质机破碎破碎汉逊酵母细胞后细胞破碎率分别为16.10%、11.40%、28.78%,总细胞破碎率为58.41%;蛋白释出度分别为24.72%、21.04%、9.57%,破碎完成后总蛋白释出度为55.48%;平均使用时间分别为61.0、59.7、60.7 min,破碎完成后总时间为181.3 min。每次破碎的细胞破碎率、蛋白释出度、所需时间,以及总细胞破碎率、总蛋白释出度、总破碎时间,2种高压均质机差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 150型AH100-ATS破碎汉逊酵母的释出蛋白的粒径分布体积比、目的蛋白、细胞破碎率和蛋白释出度均高于40型AH100-ATS,150型AH100-ATS破碎所需的时间远少于40型AH100-ATS。150型AH100-ATS高压均质机可以用于中试大规模� 展开更多
关键词 高压均质机 汉逊酵母细胞 高压均质破碎 细胞破碎率 蛋白释出度 破碎时间
原文传递
轮状病毒疫苗稳定性的影响因素及其研究方法 被引量：6
5
作者 裴玉欣 鱼轲 魏至栋 《微生物学免疫学进展》 2020年第4期93-98,共6页
轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起世界范围内儿童严重急性腹泻的主要病原之一,易感人群为儿童,尤其是6~14月龄的婴幼儿。目前,预防RV感染导致中、重度婴幼儿腹泻最好的方式是进行RV疫苗的接种,但该疫苗在RV腹泻发病率及致死率较高的地区接... 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起世界范围内儿童严重急性腹泻的主要病原之一,易感人群为儿童,尤其是6~14月龄的婴幼儿。目前,预防RV感染导致中、重度婴幼儿腹泻最好的方式是进行RV疫苗的接种,但该疫苗在RV腹泻发病率及致死率较高的地区接种覆盖率尚不尽如人意。其中,RV疫苗的稳定性是评定疫苗效力合格与否的主要因素之一。长效期及热稳定性的疫苗对RV疫苗的生产、储存、运输及提高接种覆盖率等均会带来积极的影响。现就RV疫苗稳定性的几个影响因素及其研究方法作一概述。 展开更多
关键词 轮状病毒 稳定性 因素 配方 含量
原文传递
除菌过滤在轮状病毒疫苗生产工艺中的初步应用
6
作者 童彦军 陈同 +3 位作者 伏署光 贺倩 马超 李佳林 《中国医药工业杂志》 EI CAS CSCD 2024年第1期120-124,共5页
为了考察除菌过滤工序对三价轮状病毒疫苗质量属性的影响、评估在生产工艺中增加除菌过滤操作的可行性,分2个阶段进行了22批的半成品过滤试验。试验滤膜孔径为0.22μm,材质为聚偏二氟乙烯(PVDF),考察除菌过滤对试验产品病毒滴度及外观... 为了考察除菌过滤工序对三价轮状病毒疫苗质量属性的影响、评估在生产工艺中增加除菌过滤操作的可行性,分2个阶段进行了22批的半成品过滤试验。试验滤膜孔径为0.22μm,材质为聚偏二氟乙烯(PVDF),考察除菌过滤对试验产品病毒滴度及外观、pH值、渗透压和澄清度的影响,并对拟选定的滤膜材质进行细菌截留试验。结果显示,采用PVDF材质、孔径为0.22μm的除菌滤器进行三价轮状病毒疫苗半成品的除菌过滤,对试验产品的病毒滴度、外观、pH值和渗透压的影响不显著(P>0.05),但能显著提高试验产品的澄清度(P<0.05)。该研究为在三价轮状病毒疫苗半成品的配制工艺中增加除菌过滤工序积累了关键数据和经验。 展开更多
关键词 三价轮状病毒疫苗 半成品 除菌过滤 细菌截留试验
原文传递
国产碟式离心机在规模化生产中酵母发酵液菌体分离纯化适用性的研究
7
作者 邵志伟 王玢 +5 位作者 周晖国 陈卓涛 杨林鹏 杨千苇 李薇 杨俊杰 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第1期62-66,共5页
目的 探究国产碟式离心机在规模生产中酵母发酵液菌体分离纯化工艺中的效果,摸索国产碟式离心机对酵母发酵液菌体分离纯化的适用性。方法 检测离心过程中上清液A_(600 nm)值,判断离心工艺分离的效果;检测离心后菌体固含量,评价离心效果... 目的 探究国产碟式离心机在规模生产中酵母发酵液菌体分离纯化工艺中的效果,摸索国产碟式离心机对酵母发酵液菌体分离纯化的适用性。方法 检测离心过程中上清液A_(600 nm)值,判断离心工艺分离的效果;检测离心后菌体固含量,评价离心效果是否满足菌体分离的要求;通过计算最终菌体回收率来判断在国产碟式离心机离心过程中菌体可能的损耗;对比国产碟式离心机和大容量离心机离心工艺时间,以菌体固含量和菌体形态检测等指标评价国产碟式离心机在生产规模中的适用性;对比国产碟式离心机离心前后酵母形态的完整性,评价碟式离心机剪切力对酵母分离纯化的影响。结果 国产碟式离心机和大容量离心机离心后酵母发酵液的上清液A_(600 nm)值差异无统计学意义(P=0.053 3,P>0.05);国产碟式离心机离心后菌体固含量均>80%,接近大容量离心机离心后菌体固含量;国产碟式离心机和大容量离心机离心后菌体回收率差异也无统计学意义(P=0.066 4,P>0.05);规模生产中相同体积的酵母发酵液用国产碟式离心机比大容量离心机能够大幅度缩短离心工艺时间,差异有统计学意义(P<0.000 1);国产碟式离心机离心前后酵母形态的完整性结果显示,离心剪切力对酵母几乎没有影响。结论 在酵母发酵液菌体分离中,国产碟式离心机与大容量离心机离心效果接近,但离心纯化时间较短,在规模生产时较适用于本研究中酵母发酵液菌体分离的应用,后续可用于其他规模化生产工艺研究及应用。 展开更多
关键词 国产碟式离心机 规模生产 酵母发酵液 菌体分离 离心 菌体固含量 菌体回收率 剪切力
原文传递
结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定
8
作者 张光磊 孙田华 +7 位作者 吴智远 张婷婷 胡丽娜 王婷 李会 蒋保余 李朋伟 焦磊 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第4期472-477,共6页
目的构建结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中表达、纯化后研究Rv2626c重组蛋白的抗原性。方法将GenBank公布的结核分枝杆菌H37Rv株Rv2626c蛋白的氨基酸序列(登录号:CCP45424.1)按E.coli密... 目的构建结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中表达、纯化后研究Rv2626c重组蛋白的抗原性。方法将GenBank公布的结核分枝杆菌H37Rv株Rv2626c蛋白的氨基酸序列(登录号:CCP45424.1)按E.coli密码子偏好转换为对应的DNA序列,合成该DNA序列并克隆至pET24a(+)质粒上,构建pET24a(+)-Rv2626c重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中,以不同的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度、温度和时间条件下诱导表达Rv2626c蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)对Rv2626c重组蛋白进行鉴定。利用镍螯合亲和层析法纯化Rv2626c重组蛋白并将其免疫青紫蓝兔,制备抗Rv2626c抗血清,采用Western Blot和酶联免疫吸附法分别检测抗血清的特异性和效价。结果pET24a(+)-Rv2626c重组质粒构建成功。SDS-PAGE检测显示:转入该重组质粒的E.coli经IPTG诱导后表达Rv2626c重组蛋白,分子量约14500,大小与预期相符;Rv2626c重组蛋白的最佳诱导表达条件为31℃1.0 mmol/L IPTG诱导表达6 h,目的蛋白主要以可溶性形式存在,与Western Blot检测结果一致。Rv2626c重组蛋白免疫青紫蓝兔获得的高免血清特异性良好,经酶联免疫吸附法测定该血清效价为1∶256000。结论在E.coli中成功表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白,且纯化的Rv2626c重组蛋白具有较好的纯度和抗原活性,为进一步揭示其生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv2626c重组蛋白 抗原活性鉴定
原文传递
重组戊型肝炎病毒病毒样颗粒体外生物学活性研究
9
作者 秦海艳 谢忆 +3 位作者 张巧玲 杨林鹏 刘宇阳 杨俊杰 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第2期14-20,共7页
目的 评价重组戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)体外生物学活性,为重组HEV VLP疫苗的应用提供基础研究数据。方法 将0.00(空白对照)、0.25、1.00、4.00μg/mL的重组HEV VLP分别与BALB/c小鼠... 目的 评价重组戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)体外生物学活性,为重组HEV VLP疫苗的应用提供基础研究数据。方法 将0.00(空白对照)、0.25、1.00、4.00μg/mL的重组HEV VLP分别与BALB/c小鼠的骨髓细胞和脾脏淋巴细胞共同培养。检测小鼠骨髓细胞MHCII、CD40和CD86分子的表达情况,评价重组HEV VLP促进小鼠骨髓细胞向抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC)分化和成熟的情况;分析脾脏淋巴细胞中活化的B淋巴细胞(CD19~+CD69~+)、活化的T淋巴细胞(CD3~+CD69~+)、辅助性T淋巴细胞(T helper lymphocytes, Th)(CD3~+CD4~+)和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTL)(CD3~+CD8~+)细胞的比例,评价重组HEV VLP促进小鼠脾脏B淋巴细胞和T淋巴细胞活化和分化情况。结果 0.25、1.00、4.00μg/mL的重组HEV VLP刺激的小鼠骨髓细胞MHCII、CD40和CD86分子表达均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。0.25、1.00、4.00μg/mL的重组HEV VLP刺激的小鼠脾脏淋巴细胞中活化的B淋巴细胞和T淋巴细胞比例均升高,差异均有统计学意义(P均<0.01)。1.00、4.00μg/mL的重组HEV VLP刺激的小鼠脾脏淋巴细胞中Th细胞比例均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 重组HEV VLP在小鼠体外实验中表现出良好的生物学活性,为重组HEV VLP疫苗的开发奠定了良好的理论和实验基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 病毒样颗粒 骨髓 脾脏 淋巴细胞 生物学活性
原文传递
G9P[8]型轮状病毒HN-28灭活病毒在小鼠中的免疫原性和保护效力评价
10
作者 寇桂英 火文 +6 位作者 程亚慧 唐悦 关文竹 王云瑾 陈汉泉 包红 李雄雄 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第2期1-7,共7页
目的 将G9P[8]型轮状病毒HN-28灭活后与弗氏佐剂配伍免疫小鼠,评价其免疫原性和保护效力。方法 将冻融1次的HN-28病毒收获液离心去除细胞碎片,上清用50%蔗糖垫底进行超速离心,用MEM培养液重悬沉淀得到纯化的病毒,通过SDS-PAGE和Western ... 目的 将G9P[8]型轮状病毒HN-28灭活后与弗氏佐剂配伍免疫小鼠,评价其免疫原性和保护效力。方法 将冻融1次的HN-28病毒收获液离心去除细胞碎片,上清用50%蔗糖垫底进行超速离心,用MEM培养液重悬沉淀得到纯化的病毒,通过SDS-PAGE和Western blot分析纯化后的病毒;然后用甲醛灭活病毒,将灭活病毒在MA-104细胞上连续盲传代3次,通过观察细胞病变(cytopathic effect, CPE)和半数细胞感染病变法(CCID_(50))进行病毒灭活验证检测;将灭活病毒与弗氏佐剂按1∶1比例混合,免疫BALB/c小鼠,对照组用MEM与弗氏佐剂按1∶1比例混合后按相同方法和剂量免疫BALB/c小鼠。定期采血并用ELISA检测小鼠血清中抗轮状病毒IgG和IgA滴度;3剂免疫后用病毒微量中和试验测定每剂免疫后血清中和抗体并计算几何平均滴度(geometric average titer, GMT);3剂免疫后28 d,用HN-28活病毒灌胃攻毒,评价血清抗体对小鼠的保护效力。结果 SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,纯化后的病毒纯度较高,在预期分子量处出现了对应的条带;HN-28灭活病毒在MA-104细胞连续传3代,显微镜下均未观察到CPE,CCID_(50)检测结果为阴性;免疫小鼠血清检测结果显示,HN-28灭活病毒在小鼠体内诱导产生的IgG抗体平均滴度为4.53 lg、IgA抗体平均滴度为2.54 lg、中和抗体平均滴度为2.86 lg,而对照组和免疫前血清中IgG、IgA均为阴性;与实验组小鼠相比,攻毒后1周,对照组小鼠体温明显升高,腹泻率增加,对照组小鼠粪便中轮状病毒的检出率高于实验组。结论 HN-28灭活病毒在BALB/c小鼠中具有良好的免疫原性和保护性。 展开更多
关键词 轮状病毒 HN-28毒株 免疫原性 攻毒试验 保护性 评价
原文传递
免疫亲和层析法对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)中猪细小病毒的去除效果评价
11
作者 包正琦 段丽娟 +5 位作者 张锐 马宁 刘建光 戴于栋 梁凌宇 高建军 《国际生物制品学杂志》 CAS 2024年第1期29-32,共4页
目的评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺对猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的去除效果.方法分别采用首次装填和重复使用100次的层析柱,对3批中试规模生产的中间品进行缩小规模的层析工艺去除病毒效果评价.... 目的评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺对猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的去除效果.方法分别采用首次装填和重复使用100次的层析柱,对3批中试规模生产的中间品进行缩小规模的层析工艺去除病毒效果评价.将PPV指示病毒加至层析前的料液中,分别于层析纯化上样前、流穿、洗脱、在位清洗阶段取样进行病毒滴度检测.结果新装填的免疫亲和层析柱对PPV的去除效果符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.30 lgTCID_(50)/0.1 ml.免疫亲和层析柱重复使用100次,对PPV的去除效果仍符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.33 lgTCID_(50)/0.1 ml.结论马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺具有良好的PPV去除效果,层析柱重复使用100次与首次使用的病毒去除效果无明显差别. 展开更多
关键词 免疫亲和层析 马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2) 猪细小病毒 病毒去除
原文传递
电位滴定法测定生物制品中氯化钠含量方法的建立及应用
12
作者 强鹏侠 卓晓琴 +4 位作者 蒋婉蓉 秦翔 冯潇 慕艳红 冯德杰 《国际生物制品学杂志》 CAS 2024年第3期164-168,共5页
目的建立用电位滴定法测定生物制品中氯化钠含量的方法并进行初步应用。方法以氯化钠基准物质为对照, 根据硝酸银滴定液滴定电位测定样品中氯化钠含量并验证方法。分别用不同方法测定同一样品并比较。结果在6~15 mg/ml范围内, 氯化钠浓... 目的建立用电位滴定法测定生物制品中氯化钠含量的方法并进行初步应用。方法以氯化钠基准物质为对照, 根据硝酸银滴定液滴定电位测定样品中氯化钠含量并验证方法。分别用不同方法测定同一样品并比较。结果在6~15 mg/ml范围内, 氯化钠浓度与消耗的硝酸银滴定液体积呈良好的线性关系, 回归方程的决定系数为0.999 9;脑膜炎球菌多糖疫苗培养基、破伤风抗毒素原液、b型流感嗜血杆菌结合疫苗、疫苗用氢氧化铝佐剂中氯化钠平均回收率分别为100.0%、99.8%、100.2%、100.3%, 表明电位滴定法具有良好的准确度;同批次供试品6次测定结果的相对标准偏差最大为0.7%, 表明电位滴定法具有良好的重复性;将供试品在稀释后分别放置5和30 min后再检测, 对结果无明显影响, 表明该方法具有良好的耐用性;对电位滴定法和中国药典2020年版采用的福尔哈德法所得结果进行统计学分析, 从t检验结果可知, 2种方法测定结果差异无统计学意义(t值在-2.12~2.50, P>0.05)。结论建立了用电位滴定法测定生物制品中氯化钠含量的方法, 该方法线性范围良好、重复性好、定量准确, 适用于生物制品中氯化钠含量的检测。 展开更多
关键词 生物制品 氯化钠 电位滴定法
原文传递
促胰岛素分泌肽融合蛋白对2型糖尿病小鼠模型的降糖研究 被引量：1
13
作者 张艳丽 杨军 +2 位作者 高雪峰 王婉如 陈勇 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第3期51-56,共6页
目的研究促胰岛素分泌肽融合蛋白(glucagon-like peptide fusion protein,简称E4F4)皮下给药对2型糖尿病小鼠的降糖作用,评价E4F4的降糖效果,为该蛋白的进一步研究提供依据。方法选取雄性C57BL/6小鼠,采用高脂饲料联合腹腔注射低剂量链... 目的研究促胰岛素分泌肽融合蛋白(glucagon-like peptide fusion protein,简称E4F4)皮下给药对2型糖尿病小鼠的降糖作用,评价E4F4的降糖效果,为该蛋白的进一步研究提供依据。方法选取雄性C57BL/6小鼠,采用高脂饲料联合腹腔注射低剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法,构建2型糖尿病小鼠模型,随机分为模型对照组和E4F4高(500μg/kg)、中(250μg/kg)、低剂量(125μg/kg)组。药物干预后,测量小鼠体质量和摄食量的变化,测定随机和空腹血糖。2周给药结束后,进行口服葡萄糖耐量试验,并测定血清胰岛素水平及附睾脂肪含量。结果E4F4给药2周,各剂量组小鼠随机体质量在3 d时降幅最大,9~10 d开始恢复至基线值水平;高、中、低剂量组小鼠平均每日摄食量分别为4.8、5.2和5.5 g,均低于模型对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05);高、中、低剂量组随机血糖与模型对照组相比平均下降率分别为25.2%、20.3%和16.9%,空腹血糖与模型对照组相比平均下降率分别为44.3%、42.1%和38.7%;E4F4各剂量组可显著改善小鼠口服糖耐量和血清胰岛素水平,并对附睾脂肪占比有降低作用,其中E4F4高剂量组(500μg/kg)效果优于其他剂量组。结论E4F4可降低2型糖尿病小鼠的血糖,并对胰岛素抵抗有一定改善作用,具有较好的降糖、减重效果。 展开更多
关键词 促胰岛素分泌肽融合蛋白 链脲佐菌素 2型糖尿病 血糖 胰岛素抵抗
原文传递
冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量检测方法的建立及应用 被引量：5
14
作者 强鹏侠 姜珊 +5 位作者 卓晓琴 蔡文博 雒丽红 冯潇 傅元欣 冯德杰 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第4期38-43,共6页
目的建立用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的方法,并对方法进行初步应用。方法样品经离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行检测,依外标... 目的建立用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的方法,并对方法进行初步应用。方法样品经离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行检测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证及初步应用。结果蔗糖质量浓度在2.5~40.0 mg/mL范围内,r2均>0.999;5.0、10.0、20.0 mg/mL不同质量浓度的3个蔗糖对照品溶液平均回收率分别为99.9%、100.2%、100.7%;最小检出限和定量限分别为0.005、0.050 mg/mL;分别改变柱温及流速,即柱温从30℃改变为32℃,流速从1.5 mL/min改变为1.3 mL/min时,对蔗糖含量检测无明显影响,表明该方法具有良好的耐用性。初步应用结果显示,建立的方法可准确检测疫苗的蔗糖含量,RSD最大仅为0.6%,精密度良好,具有很好的重复性。结论建立了用HPLC检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的方法,该方法线性范围良好、重复性好、定量准确,适用于冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗中蔗糖含量的检测。 展开更多
关键词 冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗 蔗糖 高效液相色谱法
原文传递
G1P[8]型轮状病毒HN15D2株在Vero细胞上适应及传代稳定性的研究
15
作者 寇桂英 关文竹 +5 位作者 王云瑾 火文 王名强 包红 周旭 李雄雄 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第4期12-17,共6页
目的 将G1P[8]型轮状病毒HN15D2株适应于Vero细胞,评价其在Vero细胞上的传代稳定性。方法 将从MA-104细胞上分离纯化的HN15D2毒株按照感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.01、0.05和0.10分别接种Vero细胞,通过显微镜观察细胞... 目的 将G1P[8]型轮状病毒HN15D2株适应于Vero细胞,评价其在Vero细胞上的传代稳定性。方法 将从MA-104细胞上分离纯化的HN15D2毒株按照感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.01、0.05和0.10分别接种Vero细胞,通过显微镜观察细胞病变(cytopathogenic effect, CPE),采用细胞培养半数感染量(50%cell culture infective dose,CCID_(50))检测病毒滴度并绘制病毒增殖曲线,确定HN15D2在Vero细胞上的最适MOI。在病毒传代过程中,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)检测病毒基因带型;通过全基因测序分析病毒在MA-104细胞和Vero细胞中基因序列的同源性;电镜观察HN15D2毒株病毒形态;将HN15D2毒株在Vero细胞上连续传15代后分析各代次病毒滴度及基因电泳带型变化。结果 HN15D2毒株感染Vero细胞后形成明显的细胞病变;当MOI为0.05时,获得的病毒收获液滴度最高,为5.75 lgCCID_(50)/mL,确定病毒接种的最适MOI为0.05;全基因测序结果显示,2种细胞培养获得的病毒11个基因节段同源性在99.7%~100.0%;电镜下可以观察到典型的轮状病毒颗粒;HN15D2毒株在Vero细胞上连续传15代,病毒基因带型未发生变化,滴度稳定在5.25~5.75 lg-CCID_(50)/mL。结论 轮状病毒HN15D2毒株成功适应于Vero细胞,在连续传代过程中具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 轮状病毒 型 VERO细胞 病毒适应 病毒传代 稳定性
原文传递
人G1P[8]型轮状病毒HN15D2毒株的分离纯化及鉴定
16
作者 寇桂英 王云瑾 +7 位作者 程亚慧 关文竹 火文 王名强 包红 陈汉泉 周旭 李雄雄 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第2期76-81,共6页
目的对轮状病毒(rotavirus,RV)阳性临床粪便标本进行毒株分离、纯化及鉴定。方法将感染RV的腹泻患儿粪便标本在单层恒河猴肾细胞MA104上传代培养,分离毒株,通过噬斑法克隆纯化病毒,电子显微镜(电镜)观察病毒形态和大小;采用SDS-PAGE、... 目的对轮状病毒(rotavirus,RV)阳性临床粪便标本进行毒株分离、纯化及鉴定。方法将感染RV的腹泻患儿粪便标本在单层恒河猴肾细胞MA104上传代培养,分离毒株,通过噬斑法克隆纯化病毒,电子显微镜(电镜)观察病毒形态和大小;采用SDS-PAGE、免疫印迹法和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)、反转录PCR及全基因组测序对病毒进行鉴定。结果对大量临床标本进行传代筛选和噬斑纯化,得到1株RV野毒株。50%蔗糖超速离心纯化病毒在电镜下可见直径约75 nm的典型RV颗粒;SDS-PAGE和免疫印迹法结果显示在预期位置出现目的条带;IFA结果显示所分离病毒为RV;RNA-PAGE显示分离株电泳型为长型,电泳图谱中11个条带呈现4∶2∶3∶2排列;PCR扩增片段及全基因组测序结果表明分离毒株为G1P[8]型。结论成功分离出1株人G1P[8]型RV野毒株,并命名为HN15D2。 展开更多
关键词 轮状病毒 分离 纯化 鉴定
原文传递
线性化聚乙烯亚胺介导的高效瞬时转染条件的优化
17
作者 陈玥如 赵忆宁 +3 位作者 唐悦 王婉 傅生芳 李雄雄 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第3期156-160,共5页
目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore... 目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)/pcDNA3.1+,通过瞬时转染的方式将质粒转入HEK293F细胞中进行表达.对转染试剂PEI与重组质粒的比例以及收获时间进行优化,通过倒置显微镜观察、SDS-PAGE和流式细胞仪检测目标蛋白的表达量,确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件.采用优化后的条件在T500摇瓶(工作体积120 ml)中进行扩大表达.结果构建的重组质粒EGFP/pcDNA3.1+序列正确,在重组质粒浓度为3.0μg/ml、DNA∶PEI为2∶1、转染后24 h添加终浓度为2 mmol/L的丙戊酸钠、转染后4 d收获条件下,目的蛋白的表达量最高.此条件也适用于放大培养体积至T500的瞬时转染.结论优化了一种快速有效的基于PEI的瞬时转染方法来高水平表达重组蛋白. 展开更多
关键词 线性化聚乙烯亚胺 瞬时转染 人胚胎肾293F细胞 增强型绿色荧光蛋白
原文传递
抗狂犬病毒单克隆抗体中残留宿主细胞蛋白ELISA定量检测方法的验证
18
作者 赵晓瑞 叶星 +4 位作者 南建军 郭岚 徐玺丰 王倩 安晨 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第6期328-332,共5页
目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性... 目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性、耐用性、检测限及定量限。结果2种抗狂犬病毒单抗发酵液稀释10000倍后检出的HCP含量分别为31.42和19.36 ng/ml。制剂溶液、HEK293F和E.coli培养上清液中未检出HCP。3种浓度的HCP加标供试品的加标回收率均在80%~120%之间。3种浓度的HCP加标供试品重复性检测结果及中间精密度检测结果相对标准偏差均<20%。分别对3次残余HCP检测绘制四参数标准曲线,决定系数均>0.990。在一定范围内改变孵育时间和显色时间,HCP测定结果在合理的偏差范围内。检测限和定量限分别为2和3 ng/ml。结论抗狂犬病毒单抗中HCP残留量的ELISA定量检测方法专属性、准确度、精密度、线性及耐用性良好。 展开更多
关键词 抗狂犬病毒单克隆抗体 宿主细胞蛋白 酶联免疫吸附测定
原文传递
不同搅拌策略对破伤风梭状芽孢杆菌发酵生产破伤风毒素的影响
19
作者 郑喆 张建飞 +6 位作者 丁苗 李振忠 王忠 陈文韬 付晶 冯鹏 陈作江 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第4期35-41,共7页
目的考察不同搅拌策略对破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridium tetani,C.tetani)大规模发酵生产破伤风毒素的影响,建立稳定的C.tetani发酵工艺。方法在1500 L发酵罐中,采用不同搅拌策略发酵C.tetani。发酵过程中测定发酵液菌体浓度和毒素絮... 目的考察不同搅拌策略对破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridium tetani,C.tetani)大规模发酵生产破伤风毒素的影响,建立稳定的C.tetani发酵工艺。方法在1500 L发酵罐中,采用不同搅拌策略发酵C.tetani。发酵过程中测定发酵液菌体浓度和毒素絮状单位(flocculation unit,Lf),并应用实时荧光定量PCR测定tent基因和tetR基因的表达量;发酵液经深层过滤、超滤、两步盐析等工艺纯化后得到精制毒素,测定精制毒素的絮状单位、体积和蛋白氮含量,并计算其产量、纯度和收率。结果不同搅拌策略对C.tetani的生长、产毒、tent基因和tetR基因的表达量以及精制毒素的产量、纯度和收率均有显著影响(P均<0.05);Stir-3组批培养结束时的平均产毒量为(110±10)Lf/mL,精制毒素的平均产量为(88±9)Lf/mL培养基,均高于其他试验组(P均<0.05);Stir-3组精制毒素的平均收率和纯度分别为79.8%±3.0%和(2798±83)Lf/mg PN,高于Stir-1和Stir-4组(P均<0.05),但与Stir-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论C.tetani大规模发酵时,可以采取两阶段搅拌控制策略(前12 h不搅拌,12 h后连续搅拌)以提高破伤风毒素的产量和纯度,不同搅拌策略可通过影响tent基因和tetR基因的表达量进而影响C.tetani的产毒量。 展开更多
关键词 破伤风梭状芽孢杆菌 大规模发酵 破伤风毒素 tent基因 tetR基因
原文传递
电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法的验证
20
作者 喻大鑫 丁文博 +5 位作者 董继刚 马平 夏莲坤 杜送田 安建科 马国荣 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第4期42-47,共6页
目的以氯化钠溶液为样品和洗脱液,对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,确定该方法测定柱效的最优条件。方法设计四因素三水平正交实验对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,考察不同样品体积、流速... 目的以氯化钠溶液为样品和洗脱液,对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,确定该方法测定柱效的最优条件。方法设计四因素三水平正交实验对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,考察不同样品体积、流速、样品浓度和洗脱液浓度对Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效和对称性的影响。依据正交实验结果确定电导法测定柱效的最优条件并进行验证。结果9次实验测得柱效均>2800 N/m、对称性为1.020~1.160。通过单因素方差分析,样品体积对柱效的影响无统计学意义(P=0.123,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.735,P>0.05);流速对柱效的影响无统计学意义(P=0.600,P>0.05),对对称性的影响有统计学意义(P=0.032,P<0.05);样品浓度对柱效的影响无统计学意义(P=0.319,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.824,P>0.05);洗脱液浓度对柱效的影响无统计学意义(P=0.930,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.596,P>0.05)。通过极差分析,确定测定柱效的最优条件为:样品体积为600 mL、样品浓度为1.0 mol/L、洗脱液浓度为0.2 mol/L、流速为20 cm/h;重复性和耐用性考察中柱效RSD均<5%,对称性RSD均<5%。将丙酮对照实验结果和重复性实验结果进行t检验,柱效和对称性结果均无统计学意义(P均>0.05)。结论电导法可用于测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效,确定的最优条件重复性、耐用性良好,可准确、真实地评估Sepharose 4FF凝胶层析柱的性能。 展开更多
关键词 Sepharose 4FF凝胶层析柱 柱效 电导法 单因素方差分析 极差分析
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 19 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部