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四氧嘧啶与链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型的效果比较 被引量:68
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作者 杨润军 李青旺 赵蕊 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第2期17-20,共4页
用相同总剂量的四氧嘧啶1次给药和2次给药及较大剂量链脲佐菌素1次给药3种方法诱导小白鼠糖尿病模型,多次测定血糖,体重等糖尿病相关指标,以确定糖尿病模型建立的最佳方法。结果表明,四氧嘧啶建模率为91.94%,高于链脲佐菌素建模率(66... 用相同总剂量的四氧嘧啶1次给药和2次给药及较大剂量链脲佐菌素1次给药3种方法诱导小白鼠糖尿病模型,多次测定血糖,体重等糖尿病相关指标,以确定糖尿病模型建立的最佳方法。结果表明,四氧嘧啶建模率为91.94%,高于链脲佐菌素建模率(66.7%)(P<0.05);四氧嘧啶建模组的死亡率为15%及体重下降率为 18.1%,均高于链脲佐菌素建模组(死亡率3.3%,体重下降率12.0%)(P<0.05);四氧嘧啶连续2次小剂量给药的建模效果优于1次性大剂量给药。两种药物比较,虽然四氧嘧啶的建模率高于链脲佐菌素,但其对建模小鼠的损害亦明显大于链脲佐菌素,建模时连续小剂量给药,并于4.5~5 h后灌胃质量分数50%葡萄糖,可以降低死亡率, 提高建模率。 展开更多
关键词 糖尿病 动物模型 四氧嘧啶 链脲佐菌素 葡萄糖
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猪精液冷冻保存试验效果初报 被引量:17
2
作者 李刚 李青旺 +6 位作者 张树山 王立强 江中良 胡建宏 陈晓宇 韩增胜 夏凡 《中国农学通报》 CSCD 2005年第5期70-71,75,共3页
六种常温保存液对猪精液进行预处理后,再利用三种冷冻液进行冷冻保存试验,研究常温保存液和冷冻液对猪精液冷冻保存的影响及它们之间的配合效应,以冷冻-解冻后精子活力作为评定标准。结果表明:六种常温保存液对冻后精子的影响存在显著差... 六种常温保存液对猪精液进行预处理后,再利用三种冷冻液进行冷冻保存试验,研究常温保存液和冷冻液对猪精液冷冻保存的影响及它们之间的配合效应,以冷冻-解冻后精子活力作为评定标准。结果表明:六种常温保存液对冻后精子的影响存在显著差异(P=0.003);三种冷冻保护液对冻后精子活力的影响无明显差异(P=0.585),但与常温保存液之间表现出明显的配合效应(P=0.0001),可能与常温保存液和冷冻液的成分及它们之间的相互关系有关。试验说明所选用的三种冷冻基础液对精子活力的影响不大,但与常温保存液配合后却能表现出很强的影响力;就单独分析两种因素对精子活力影响而言,常温保存液的预处理占主导地位。 展开更多
关键词 精液冷冻保存 试验效果 初报 精子活力 配合效应 保存液 冷冻保护液 冷冻液 保存试验 评定标准 相互关系 活力影响 主导地位 预处理 常温 猪精液 再利用 基础液 影响力 解冻
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犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达及特性 被引量:13
3
作者 王微 李秀锦 +5 位作者 仲飞 王幸兴 韩冬梅 靳慧君 潘素敏 李巍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期648-652,共5页
【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)VP2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达... 【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)VP2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-VP2。经磷酸钙介导转染293T细胞,使其在真核细胞中进行分泌表达,并通过ELISA检测表达的VP2蛋白与犬转铁蛋白受体(TfR)结合的活性。【结果】序列分析结果表明,本实验构建的犬细小病毒VP2基因真核分泌型表达载体结构正确,将该表达载体转染的293T细胞,在培养基中通过Western-blot检测到有VP2重组蛋白的存在。经ELISA检测表明表达的重组VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。【结论】利用人的CD5信号肽实现了犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达,表达的VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2蛋白 293T细胞 分泌性表达 TFR
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四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型中体重与剂量关系的研究 被引量:12
4
作者 刘智华 李青旺 +3 位作者 高大威 李瑛 刘红军 冯涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2007年第6期59-61,共3页
目前,糖尿病已严重威胁人类健康,其发病率已占世界人口的5%,并呈逐年上升趋势。四氧嘧啶(alloxan)是一种有效的致高血糖模型的化学药物,但研究者普遍反映建模的成功率不高,存在小剂量无效、大剂量致死的现象。燕山大学生物工程... 目前,糖尿病已严重威胁人类健康,其发病率已占世界人口的5%,并呈逐年上升趋势。四氧嘧啶(alloxan)是一种有效的致高血糖模型的化学药物,但研究者普遍反映建模的成功率不高,存在小剂量无效、大剂量致死的现象。燕山大学生物工程实验室经过多次重复试验发现,四氧嘧啶剂量与体重存在相关性。为了找出四氧嘧啶剂量与体重的规律性而设计了此次试验,以摸索适合不同体重小鼠糖尿病模型的最佳建模剂量。 展开更多
关键词 四氧嘧啶 小剂量 糖尿病 体重 模型 小鼠 重复试验 人类健康
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鬼针草90%醇提物对U_(14)荷瘤小鼠的抑瘤效应 被引量:11
5
作者 冯涛 李青旺 +1 位作者 李健 刘智华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第4期1037-1038,共2页
以U14细胞株接种小鼠制成荷瘤模型,研究鬼针草90%醇提物对荷瘤小鼠的抑瘤效应。结果表明,90%鬼针草醇提物通过提高机体免疫力抑制小鼠肿瘤生长。
关键词 鬼针草 免疫器官 抑瘤作用 U14小鼠
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白花蛇舌草粗黄酮对小鼠肝损伤保护作用的研究 被引量:12
6
作者 郑岳 徐梅梅 +4 位作者 孙伟 卢坤玲 郑继尧 王益民 李健 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第24期3340-3342,共3页
目的探讨白花蛇舌草黄酮对小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法昆明种雄性小鼠40只随机分为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、白花蛇舌草粗黄酮低剂量组和高剂量组,灌胃给药14d。空白对照组腹腔注射豆油溶液,阴性对照组、低高剂量白... 目的探讨白花蛇舌草黄酮对小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法昆明种雄性小鼠40只随机分为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、白花蛇舌草粗黄酮低剂量组和高剂量组,灌胃给药14d。空白对照组腹腔注射豆油溶液,阴性对照组、低高剂量白花蛇舌草粗黄酮处理组及阳性对照组使用2%四氯化碳(CCl4)豆油溶液给予腹腔注射诱导小鼠急性肝损伤模型,24h后眼球取血分离血清,测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氮酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和谷氨酰转移酶(GGT)活性;处死小鼠制备肝匀浆,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,同时取肝脏组织进行病理学检查。结果高低剂量白花蛇舌草粗黄酮均可显著降低血清ALT、AST、ALP和GGT水平,显著升高肝脏组织SOD、CAT和GSH活性,降低肝组织MDA水平,白花蛇舌草粗黄酮对肝脏组织结构也显示显著保护作用。结论白花蛇舌草粗黄酮对CCl4诱导急性肝损伤有显著保护作用,可能是通过增加肝组织抗氧化能力而实现的。 展开更多
关键词 肝损伤保护 白花蛇舌草 粗黄酮 抗氧化 疾病模型 动物
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犬细小病毒NS1非结构蛋白可诱导细胞凋亡 被引量:8
7
作者 潘红丽 仲飞 +4 位作者 潘素敏 李秀锦 张峰 张考 陈慧慧 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期367-373,共7页
【目的】研究犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)非结构蛋白NS1在CPV引起宿主细胞凋亡中的作用,初步探讨CPV引起细胞凋亡的机制。【方法】首先采用PCR方法从犬细小病毒基因组中扩增NS1编码基因,然后利用pcDNA3.1A质粒构建NS1真核表达载... 【目的】研究犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)非结构蛋白NS1在CPV引起宿主细胞凋亡中的作用,初步探讨CPV引起细胞凋亡的机制。【方法】首先采用PCR方法从犬细小病毒基因组中扩增NS1编码基因,然后利用pcDNA3.1A质粒构建NS1真核表达载体pcDNA-NS1,并通过HEK293FT细胞瞬时表达NS1重组蛋白,用Western-blot检测以确定重组NS1蛋白能否在真核细胞中表达。然后用CPV感染和用pcDNA-NS1表达载体转染F81宿主细胞,通过AnnexinV/PI双染法检测磷脂酰丝氨酸外翻和通过化学发光法检测caspase-3/7活性,分析感染CPV或转染NS1基因对F81宿主细胞凋亡的影响。【结果】结果表明,本实验扩增的NS1基因序列与GenBank的序列一致,构建的表达载体结构正确,并能够介导NS1基因在真核细胞中表达。感染CPV和转染NS1基因均能诱导F81细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和明显提高细胞内caspase-3/7的活性,表明CPV和NS1蛋白均能引起细胞的凋亡。【结论】CPV诱导宿主细胞凋亡与其编码的NS1非结构蛋白有关。 展开更多
关键词 犬细小病毒 NS1蛋白 细胞凋亡
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基于NMR的代谢组学方法对硝酸钕急性生物效应的研究 被引量:6
8
作者 廖沛球 张晓宇 +5 位作者 魏来 李伟生 吴亦洁 李晓晶 倪嘉缵 裴奉奎 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期426-432,共7页
采用现代核磁共振和模式识别技术,分析了腹腔注射给药2、10和50mg/kg体重剂量硝酸钕48h内Wistar大鼠尿液和血清的核磁共振氢谱。由尿液及血清中内源性代谢物如柠檬酸、肌酸酐、N-氧三甲胺、氨基酸、乳酸、琥珀酸、牛磺酸及葡萄糖等物种... 采用现代核磁共振和模式识别技术,分析了腹腔注射给药2、10和50mg/kg体重剂量硝酸钕48h内Wistar大鼠尿液和血清的核磁共振氢谱。由尿液及血清中内源性代谢物如柠檬酸、肌酸酐、N-氧三甲胺、氨基酸、乳酸、琥珀酸、牛磺酸及葡萄糖等物种的浓度变化,结合大鼠血清指标和肝、肾组织切片图研究了轻稀土化合物Nd(NO3)3在大鼠体内的急性生物效应。结果表明,3个剂量的Nd(NO3)3主要对大鼠肝脏造成了不同程度的损伤,而且随着剂量的升高渐趋严重。同时,Nd(NO3)3也对肾脏的特定部位(肾乳头、肾小管)造成了损害。 展开更多
关键词 硝酸钕 体液 核磁共振 生物效应 模式识别 代谢组学
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重组猪肺表面活性蛋白A在体外可抑制PRRSV感染宿主细胞 被引量:8
9
作者 张峰 仲飞 +7 位作者 李秀锦 王幸兴 张考 陈慧慧 李振 李文艳 潘红丽 韩冬梅 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期654-660,共7页
【目的】研究重组猪肺表面活性蛋白A(SP-A)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的抑制作用。【方法】采用PCR方法从含有猪SP-A基因的质粒中扩增SP-A基因,并将其插入到含有人CD5信号肽序列的真核表达载体pcDNA3.1A-CD5中,构建成S... 【目的】研究重组猪肺表面活性蛋白A(SP-A)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的抑制作用。【方法】采用PCR方法从含有猪SP-A基因的质粒中扩增SP-A基因,并将其插入到含有人CD5信号肽序列的真核表达载体pcDNA3.1A-CD5中,构建成SP-A基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5-SPA/MH。将重组表达载体通过磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western blot方法鉴定表达产物,采用Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析法从培养基中分离和纯化重组SP-A蛋白,通过ELISA方法检测SP-A蛋白与PRRSV的结合活性。将SP-A蛋白与PRRSV孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,感染72 h后测定病毒滴度,分析重组SP-A蛋白对PRRSV感染的抑制作用。【结果】结果表明构建的真核表达载体能够介导SP-A基因在HEK293T细胞中进行分泌表达;表达的重组猪SP-A蛋白能够与PRRSV进行剂量依赖性结合;用重组猪SP-A蛋白与PRRSV进行孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,结果显示SP-A处理的PRRSV感染细胞后的病变程度明显低于对照组。感染72 h后,SP-A处理组的PRRSV在MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞的滴度明显低于SP-A非处理组。【结论】重组猪SP-A在体外对PRRSV的感染有明显的抑制作用,揭示SP-A具有抗PRRSV的活性。 展开更多
关键词 猪肺表面活性蛋白A 抗病毒活性 猪繁殖与呼吸综合征病毒 真核表达
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地锦草抗宫颈癌活性研究 被引量:8
10
作者 玮罕 耿果霞 +2 位作者 李青旺 李健 田永芝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期192-194,共3页
地锦草临床上多用于治疗菌痢、肠炎、病毒性肝炎、咳血、尿血、便血等。本试验通过建立小鼠U14宫颈癌模型,利用水煎法得到水提物,根据抑瘤率和对突变型p53蛋白表达的影响来研究地锦草水提物体内抗宫颈癌活性。结果表明,地锦草水提物能... 地锦草临床上多用于治疗菌痢、肠炎、病毒性肝炎、咳血、尿血、便血等。本试验通过建立小鼠U14宫颈癌模型,利用水煎法得到水提物,根据抑瘤率和对突变型p53蛋白表达的影响来研究地锦草水提物体内抗宫颈癌活性。结果表明,地锦草水提物能够显著抑制肿瘤生长,同时能使肿瘤组织的突变型p53蛋白的表达量显著下调。这可能是地锦草水提物抗肿瘤作用的潜在机制。 展开更多
关键词 地锦草 U14宫颈癌 P53蛋白
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GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析 被引量:6
11
作者 仲飞 仲振宇 +1 位作者 梁爽 李秀锦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期716-719,共4页
目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素。方法:选用gfp报告基因,在体外利用含T7RNA聚合酶的mMESSAGERNA转录试剂盒,合成含有帽子结构的GFPmRNA,通过酵母多聚A聚合酶加尾,制备结构完整的GFPmRNA。与此同时... 目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素。方法:选用gfp报告基因,在体外利用含T7RNA聚合酶的mMESSAGERNA转录试剂盒,合成含有帽子结构的GFPmRNA,通过酵母多聚A聚合酶加尾,制备结构完整的GFPmRNA。与此同时,从人的外周血液中分离单核细胞,并在体外经GM-CSF和IL-4刺激分化为DC。通过转染试剂介导将合成的GFPmRNA转染到DC内并使其表达。采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平。结果:体外合成GFPmRNA,经转染试剂介导,实现了gfp基因在DC中的表达。不同的转染试剂、mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响。采用Transmes-sengerTransfectionKit转染试剂,1μgGFPmRNA在200μLX-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC,可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上)。结论:在适当的条件下,通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率。 展开更多
关键词 树突状细胞 MRNA GFP 基因转染
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白细胞介素-12对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用 被引量:6
12
作者 潘素敏 李秀锦 +5 位作者 仲飞 柳新保 韩冬梅 王幸兴 潘宏丽 王微 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期196-201,共6页
犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12(IL-12)基因表达载体提高VP2DNA... 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12(IL-12)基因表达载体提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平。首先采用RT-PCR方法从小鼠脾淋巴细胞中分别扩增IL-12大亚基(P40)和小亚基(P35)cDNA基因;然后在真核表达载体pcDNA3.1A上通过引入内部核糖体进入位点(IRES)序列,分别将P40基因和P35基因插入到IRES序列的上下游,构建成IL-12(P40和P35双亚基)基因表达载体,pcDNA-P40-IRES-P35。将上述表达载体与本室构建的VP2表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导相应基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2载体单免疫和VP2载体和IL-12载体共免疫方法对小鼠进行免疫(用pcDNA3.1A作为对照)。免疫后在特定时间通过ELISA方法检测小鼠血清抗VP2蛋白的抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果表明,扩增的小鼠IL-12P40和P35亚基基因与GenBank的参考序列基本一致。Western-blot检测结果表明,重组IL-12和VP2均能够在HEK293T细胞中进行分泌性表达。ELISA检测结果表明利用IL-2载体与VP2载体共免疫小鼠,其血清中抗VP2的抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01),抗体水平在第35天高达1:5120。淋巴细胞增殖试验结果表明,免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组(P<0.01),VP2载体与IL2载体共免疫组的刺激指数明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。由此可见,在小鼠体内,IL-12基因表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平。 展开更多
关键词 IL-12 细小病毒 VP2基因 DNA疫苗
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腺病毒介导犬干扰素-γ基因的表达及其体外抗犬细小病毒的作用 被引量:6
13
作者 张考 靳慧君 +5 位作者 仲飞 李秀锦 能昌爱 陈慧慧 李文艳 温洁霞 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1400-1407,共8页
【目的】构建含犬干扰素-γ(cIFN-γ)基因的重组腺病毒,并在培养的犬肾细胞MDCK中分析其抗犬细小病毒的活性。【方法】首先将cIFN-γcNDA基因克隆到腺病毒穿梭质粒中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle3-cIFN-γ。利用特异... 【目的】构建含犬干扰素-γ(cIFN-γ)基因的重组腺病毒,并在培养的犬肾细胞MDCK中分析其抗犬细小病毒的活性。【方法】首先将cIFN-γcNDA基因克隆到腺病毒穿梭质粒中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle3-cIFN-γ。利用特异的酶切位点,通过直接连接法将cIFN-γ表达盒插入到腺病毒基因组质粒pAdeno-X中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒基因组质粒pAd-cIFN-γ。pAd-cIFN-γ质粒经酶切线性化后转染人胚胎肾细胞HEK293T,在细胞中拯救出含有cIFN-γ基因的复制缺陷型重组腺病毒。然后用该重组腺病毒处理(感染)培养的犬肾细胞MDCK,再用犬细小病毒感染重组腺病毒处理的细胞,分析重组腺病毒在体外抗犬细小病毒的活性。【结果】通过连接法构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,构建的重组腺病毒能够介导cIFN-γ在MDCK细胞中进行分泌表达。用含cIFN-γ基因的重组腺病毒处理MDCK细胞,可明显地抑制犬细小病毒在细胞中的增殖,表明构建的重组腺病毒具有明显的抗犬细小病毒的活性。【结论】构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,并证明该重组病毒在体外具有明显的抗犬细小病毒的活性。 展开更多
关键词 干扰素-Γ 腺病毒载体 抗病毒活性 犬细小病毒
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犬白细胞介素-7基因对犬细小病毒DNA疫苗的免疫增强作用 被引量:6
14
作者 孙岩 仲飞 +7 位作者 李秀锦 王幸兴 王璐 贾启恒 韩冬梅 李振 张峰 潘红丽 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2058-2066,共9页
【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作... 【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,分别构建成与Myc/His标签融合和非融合的cIL-7真核分泌型表达载体pcDNA-cIL7/MH和pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将pcDNA-cIL7/MH质粒转染HEK 293T细胞使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的表达载体能否介导cIL-7基因在真核细胞中进行分泌表达。用已构建的VP2表达载体pcDNA-CD5-VP2与pcDNA-cIL7载体共免疫小鼠,并设pcDNA-CD5-VP2单免疫小鼠和pcDNA-cIL7单免疫小鼠作为对照。免疫后通过ELISA方法检测抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验和ELISA方法分别检测免疫后35 d小鼠脾脏淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素的表达水平。【结果】本试验扩增的cIL-7基因序列与GenBank中犬的序列完全一致。构建的表达载体能够介导cIL-7基因在HEK293T细胞中进行分泌表达。动物免疫试验结果显示,cIL-7与VP2共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价分别极显著和显著高于VP2单免疫组(P<0.01和P<0.05);共免疫组小鼠淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平也显著高于VP2单免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-7基因可增强小鼠对VP2 DNA疫苗的免疫应答反应。 展开更多
关键词 犬IL-7 细小病毒 VP2基因 DNA疫苗
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N,N-二甲基甲酰胺(DMF)对猪精液冷冻效果的影响 被引量:3
15
作者 张树山 李青旺 +3 位作者 胡建宏 江中良 刘宏 王立强 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第11期51-54,61,共5页
【目的】研究N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Di methylformamide,DMF)与甘油配制的混合保护剂对猪冷冻精子的保护效果。【方法】以DMF和甘油配制成混合冷冻保护剂对猪精液进行冷冻,试验共设对照组(30mL/L甘油)、A组(10mL/L DMF+20mL/L甘油)、B组... 【目的】研究N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Di methylformamide,DMF)与甘油配制的混合保护剂对猪冷冻精子的保护效果。【方法】以DMF和甘油配制成混合冷冻保护剂对猪精液进行冷冻,试验共设对照组(30mL/L甘油)、A组(10mL/L DMF+20mL/L甘油)、B组(20mL/L DMF+10mL/L甘油)、C组(30mL/L DMF)和D组(50mL/L DMF)5个处理组,以活动精子百分率、精子活率、精子直线运动速率、精子顶体完整率以及精子质膜完整率为检测指标,对猪精子冷冻效果进行评价。【结果】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂对猪精子有较好的冷冻保护作用,与其他处理组相比,除精子直线运动速率和质膜完整率与10mL/L DMF+20mL/L甘油组无显著差异外,其他各项指标均优于其他组及甘油对照组。30mL/L DMF对猪精子的毒性强于同浓度甘油,但20mL/LDMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂的毒性与甘油对照组无显著差异(P>0.05)。【结论】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂比单一使用甘油或DMF能起到更好的冷冻保护作用。 展开更多
关键词 猪精液 冷冻保存 N N-二甲基甲酰胺 精子品质
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IL-2与IL-7基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用 被引量:5
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作者 陈慧慧 仲飞 +6 位作者 李秀锦 王璐 孙岩 能昌爱 张考 李文艳 温洁霞 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1392-1399,共8页
【目的】探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和cIL-7双基因表达载体。然后利用本实验室构建的CPV VP... 【目的】探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和cIL-7双基因表达载体。然后利用本实验室构建的CPV VP2、cIL-2和cIL-7表达载体及本文构建的双基因表达载体,以不同组合对小鼠进行免疫,即VP2单免疫,VP2+cIL-2、VP2+cIL-7和VP2+cIL-2/cIL-7共免疫。通过ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠血清VP2的抗体水平,并分析中和抗体的效价,通过细胞增殖实验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,并用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。【结果】本实验构建的双基因表达载体结构正确,并能够介导cIL-2与cIL-7基因在真核细胞中进行同步分泌表达。小鼠免疫结果表明,VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价均显著高于VP2+cIL-2和VP2+cIL-7共免疫组(P<0.05)。VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠的淋巴细胞刺激指数比其它免疫组略有升高但尚未达到显著水平,然而γ干扰素的表达水平显著高于其它免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-2和cIL-7基因对CPV VP2 DNA疫苗免疫原性的增强作用具有明显的协同效应。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 白细胞介素-7 生物佐剂 犬细小病毒 VP2DNA疫苗
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曲酸菌的选育及发酵工艺条件研究 被引量:5
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作者 李凤林 谢晓松 《发酵科技通讯》 CAS 2009年第3期15-18,共4页
本研究采用紫外线(UV)诱变育种技术,对产曲酸的米曲霉菌株进行诱变,得到NKS-145B3菌株产酸能力稳定且产酸量高。以此为出发菌株,通过各项实验确定出发酵的工艺条件。
关键词 紫外线(UV)诱变 曲酸菌 发酵工艺
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重组猪蛔虫抗菌肽cecropin P1在毕赤酵母中的表达及抑菌活性 被引量:4
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作者 李巍 仲飞 +7 位作者 李秀锦 张峰 刘龙飞 王淼 李凌 王幸兴 韩冬梅 潘素敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1133-1137,共5页
根据已发表的蛔虫抗菌肽cecropin P1基因编码序列设计引物,采用RT-PCR方法从猪肠道蛔虫中扩增出cecropin P1基因,并将其插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽下游的SnaBⅠ和NotⅠ位点之间,构建成cecropin P1基因的酵母分泌型... 根据已发表的蛔虫抗菌肽cecropin P1基因编码序列设计引物,采用RT-PCR方法从猪肠道蛔虫中扩增出cecropin P1基因,并将其插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽下游的SnaBⅠ和NotⅠ位点之间,构建成cecropin P1基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/cecropin P1。载体经SalⅠ酶切线性化,电转化到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中,然后利用以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选得到高拷贝cecropin P1基因的重组酵母。经PCR检测证明cecropin P1基因已整合到毕赤酵母的染色体中。重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,通过Tricine-SDS-PAGE检测,重组酵母能够分泌表达重组cecropin P1,同时表达的cecropin P1对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。 展开更多
关键词 猪蛔虫 抗菌肽 CECROPIN P1 毕赤酵母 抑菌活性
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人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 吴国芳 李青旺 +4 位作者 李健 韩增胜 张勇 宁国柱 王磊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第11期70-71,共2页
为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Cas... 为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性。结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达;人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01)。结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白 细胞凋亡 细胞周期 P53 CASPASE-3
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红景天粗多糖中基分对猪精子冻后生化指标及活力的影响 被引量:4
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作者 赵红卫 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第5期57-63,共7页
试验将采自5头杜洛克(2~4岁)猪精液(2次/周)冷冻解冻于含有红景天粗多糖中基分(Middle Components of Rhocliola Polysacchoride,MCRP)的稀释液中,应用计算机辅助精子分析系统对猪精子运动特征进行了评价,其它参数用常规精子评... 试验将采自5头杜洛克(2~4岁)猪精液(2次/周)冷冻解冻于含有红景天粗多糖中基分(Middle Components of Rhocliola Polysacchoride,MCRP)的稀释液中,应用计算机辅助精子分析系统对猪精子运动特征进行了评价,其它参数用常规精子评价方法进行评估,分析MCRP对猪精子冻后生化指标及活力的影响。结果表明,MCRP在稀释液中的有效浓度范围为4.0~6.0mg/L,当MCRP浓度为6mg/L时,其各项指标均显著高于其它各组(P〈0.05),而且冷冻解冻后,MCRP添加于稀释液I的精子质量显著优于MCRP添加到稀释液II的精子质量(P〈0.05)。冷冻解冻液中MCRP的浓度与解冻后解冻液中的谷胱甘肽、精子线粒体活性、精子低渗肿胀系数呈显著正相关(P〈0.05),而与解冻液中的丙二醛浓度呈显著负相关(r=-0.982,P〈0.05)。猪精液冷冻保护液中添加MCRP能够有效地抵抗由于冷冻产生的活性氧自由基对精子的伤害,从而提高精子冻后质量,但是MCRP抑制活性氧自由基的具体成分仍需要进一步的研究。 展开更多
关键词 抗氧化剂 MCRP 氧化应激 猪精子 冷冻保存
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