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KiSS-1基因的表达对裸鼠子宫内膜癌皮下种植瘤的影响 被引量:2
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作者 孟丽荣 张淑兰 +2 位作者 鲁艳明 乔宠 赵彦艳 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第23期1785-1789,共5页
目的探讨KiSS-1对子宫内膜癌转移抑制的效果及基因转染的方法和途径。方法将裸鼠分为对照组、空质粒转染组(空质粒与HEC-1B细胞同时注入裸鼠皮下)及KiSS-1质粒转染组(基因质粒与HEC-1B细胞同时注入裸鼠皮下)3组。成瘤后从解剖及组织学... 目的探讨KiSS-1对子宫内膜癌转移抑制的效果及基因转染的方法和途径。方法将裸鼠分为对照组、空质粒转染组(空质粒与HEC-1B细胞同时注入裸鼠皮下)及KiSS-1质粒转染组(基因质粒与HEC-1B细胞同时注入裸鼠皮下)3组。成瘤后从解剖及组织学角度观察各组皮下瘤及转移瘤的体积和数量变化,从分子生物学水平检测pcDNA3.0-KiSS-1质粒在活体组织中的转染效果及表达水平,分析KiSS-1基因对肿瘤组织细胞侵袭转移能力的影响。结果用子宫内膜癌细胞株建立裸鼠皮下移植瘤是可行的,成瘤率为86%。KiSS-1质粒转染组较对照组及空转染组肿瘤细胞的KiSS-1mRNA表达明显增强,P=0.006。MMP-9mRNA表达明显减弱,P<0.05。实验组中肿瘤细胞KiSS-1mRNA的表达强度与转染pcDNA3.0-KiSS-1质粒的剂量有明确关系,P=0.05。结论建立子宫内膜癌裸鼠皮下种植瘤动物模型方法简单,成功率高,易于观察。KiSS-1基因体内转染方法可行,对细胞生物学影响与转染剂量有明确关系。KiSS-1基因可能是子宫内膜癌基因治疗的一个有前景基因。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 细胞系 基因 肿瘤抑制 明胶酶B 质粒 肿瘤转移 模型 动物 转染
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KiSS-1基因转染子宫内膜癌HEC-1B细胞系及其意义的研究 被引量:3
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作者 孟丽荣 张淑兰 +2 位作者 鲁艳明 乔宠 赵彦艳 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第11期838-842,共5页
目的:构建KiSS-1基因质粒并将KiSS-1基因质粒导入子宫内膜癌细胞HEC-1B中,建立稳定、高效和低毒的转染方法,观察其转染率及表达情况。方法:采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将高纯度的KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR... 目的:构建KiSS-1基因质粒并将KiSS-1基因质粒导入子宫内膜癌细胞HEC-1B中,建立稳定、高效和低毒的转染方法,观察其转染率及表达情况。方法:采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将高纯度的KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后肿瘤细胞的KiSS-1 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白Metastine的表达。结果:1)使用重组的真核表达载体,将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌细胞中,并获得稳定表达。2)子宫内膜癌细胞KiSS-1基因转染前后表达水平有明显差异,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中KiSS-1 mRNA蛋白的相对表达量分别为0.1231±0.0366、0.1486±0.0287和0.5060±0.0198,Metastin蛋白的相对表达量分别为0.1549±0.0189、0.1497±0.0029和0.4469±0.0078,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=161.547,P=0.000;F=607.993,P=0.000。3)转染后的子宫内膜癌细胞的MMP-9 mR-NA表达下调,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中MMP-9 mRNA的相对含量分别为0.3576±0.0501、0.3500±0.0254和0.1677±0.0014,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=32.963,P=0.001。结论:利用脂质体作为载体将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌HEC-1B细胞是可行、有效和稳定的;转染后细胞的KiSS-1 mRNA表达明显增强,MMP-9 mRNA的表达明显降低;KiSS-1基因可能参与抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和转移,可考虑为子宫内膜癌基因治疗的一个有意义的基因。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 细胞系 KISS-1 MMP-9 细胞凋亡 转染
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HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响 被引量:6
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作者 张淑兰 鲁艳明 +1 位作者 孟丽荣 赵彦艳 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期48-53,共6页
目的探讨 HER-2小分子干扰 RNA(siRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭和趋化能力的影响。方法选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株 SKOV3细胞 GAPDH 蛋白和 HER-2蛋白的表... 目的探讨 HER-2小分子干扰 RNA(siRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭和趋化能力的影响。方法选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株 SKOV3细胞 GAPDH 蛋白和 HER-2蛋白的表达水平,以吸光度(A)值表示。然后在 HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择 HER-2 siRNA Ⅰ、HER-2siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ3段靶序列,体外转录合成 HER-2 siRNA。实验分为4组:空白对照组、脂质体组、非特异性转染组(非特异性 siRNAⅢ)、特异性转染组(HER-2 siRNAⅢ),以β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,用荧光实时定量 PCR 和蛋白印迹法检测转染前后 SKOV3细胞 HER-2 mRNA 和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后 SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化。结果 GAPDH siRNA 能明显抑制 SKOV3细胞内源性 GAPDH 蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 GAPDH siRNA 转染 SKOV3细胞后,其 GAPDH 蛋白的表达水平分别为0.6855±0.0259、0.5698±0.0275、0.4542±0.0296、0.3341±0.0178及0.1816±0.0180,各剂量间比较,差异有统计学意义(F=198.126,P<0.01)。HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ均有抑制 HER-2蛋白表达的作用,HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ转染后 SKOV3细胞中 HER-2蛋白的相对表达水平(分别为0.2162±0.1589、0.1562±0.0067),分别与空白对照组、非特异性转染组及转染 HER-2siRNA Ⅰ的 SKOV3细胞(分别为0.3674±0.0350、0.3839±0.0188、0.3532±0.0197)比较,差异均有统计学意义(F=69.461,P<0.01)。不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 HER-2 siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平比较,差异有统计学意义(F=174.53,P<0.01);HER-2siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平分别为0.0506±0.0017、0.0266±0.0011及0.0154±0.0020,不同时间点比较,HER-2 mRNA 的相对表达水平呈明显下降趋势 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 RNA 小分子干扰 受体 erbB-2 基因 ERBB-2
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