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银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响及海马神经元的保护作用 被引量：21
1
作者 王德秀 蔡欣 +3 位作者 王钢 王忠伟 李文涛 王玉良 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期516-521,共6页
目的探讨银杏叶提取物(ginkgo biloba extracts,EGb761)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆的影响及海马神经元的保护作用。方法90只大鼠随机分为假手术组、模型组和药物组,每组30只;各组大鼠分别在15 d、1月和2月共3个时... 目的探讨银杏叶提取物(ginkgo biloba extracts,EGb761)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆的影响及海马神经元的保护作用。方法90只大鼠随机分为假手术组、模型组和药物组,每组30只;各组大鼠分别在15 d、1月和2月共3个时间点进行测定,每个时间点10只。采用双侧夹闭颈总动脉同时腹腔注射硝普钠的方法制备VD模型,利用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆功能,免疫荧光实验观察海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,Western blot技术检测各组大鼠海马区P-糖蛋白(P-GP)、兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)、caspase-3和cleaved caspase-3蛋白的表达水平,RT-PCR技术检测P-GP和EAAT2 mRNA的表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠各时间点的水迷宫实验逃避潜伏期(escape latency,EL)显著延长[假手术组EL:15 d(15.52±3.23)s,1月(14.21±2.62)s,2月(15.37±1.66)s;模型组EL:15 d(30.35±2.30)s,1月(40.78±3.55)s, 2月(33.88±1.47)s;均P<0.01),药物组大鼠各时间点的EL均明显短于模型组[药物组EL:15 d (25.69±2.44)s,1月(20.78±1.72)s,2月(18.23±1.67)s;均P<0.01]。免疫荧光显示,药物组各时间点GFAP的表达较模型组减少(P<0.01);Western blot结果显示,药物组各时间点cleaved caspase-3蛋白的表达显著低于模型组(P<0.01)。Western blot和RT-PCR结果共同显示,药物组15 d和1月时间点P-GP和EAAT2蛋白表达水平和mRNA的表达水平较模型组明显增大(P<0.01),2月时间点较模型组表达降低(P<0.01)。结论EGb761能改善VD大鼠的学习记忆能力,并通过调节不同时间点VD大鼠海马区P-GP和EAAT2蛋白及mRNA的表达(1月时间点内上调,至2月时间点下调),下调各时间点cleaved-caspase-3和GFAP的表达,延缓VD大鼠脑损伤,对神经细胞起到保护作用。 展开更多
关键词 银杏叶提取物 血管性痴呆大鼠 P-糖蛋白 兴奋性氨基酸转运体2 胶质纤维酸性蛋白
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神经元自噬在脑缺血再灌注损伤中的作用机制研究进展 被引量：9
2
作者 王德秀 蔡欣 +4 位作者 金成文 王凤斌 王鲁娟 张锐 王玉良 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期471-474,共4页
脑缺血再灌注(cerebral ischemia and reperfusion,IR)后会发生自噬(autophagy)现象,自噬水平的提高对维持神经元功能发挥着重要作用,但是如果自噬过度激活,则可能会造成神经元的凋亡。目前,脑缺血再灌注状态下自噬发生的程度以及自噬... 脑缺血再灌注(cerebral ischemia and reperfusion,IR)后会发生自噬(autophagy)现象,自噬水平的提高对维持神经元功能发挥着重要作用,但是如果自噬过度激活,则可能会造成神经元的凋亡。目前,脑缺血再灌注状态下自噬发生的程度以及自噬对神经元的调节机制尚不清楚,因而本文就目前的一些研究进展加以综述。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注 神经元 自噬
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血管性痴呆大鼠海马神经元LC3和Beclin-1的表达 被引量：7
3
作者 高健 王德秀 +1 位作者 王凤斌 王玉良 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期467-472,共6页
目的:在血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠,观察自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在海马CA1区神经元中的表达变化情况。方法:采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法制备VD大鼠模型,在1、3、5和7 d四个时间点,分别... 目的:在血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠,观察自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在海马CA1区神经元中的表达变化情况。方法:采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法制备VD大鼠模型,在1、3、5和7 d四个时间点,分别采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察CA1区神经元形态变化情况;免疫组化和Western Blot观察海马CA1区神经元上LC3和Beclin-1的表达情况。结果:模型组大鼠各时间点的逃逸潜伏期(escape latency,EL)比假手术组均明显延长(P<0.01)。HE染色结果发现,与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元出现严重损伤,且随时间延长逐渐加重。免疫组化和Western Blot积分光密度值测定结果显示,模型组大鼠各时间点LC3和Beclin-1的表达均比假手术组明显升高(P<0.01),5 d时间点达到高峰。结论:VD模型大鼠缺血再灌注短时间内海马CA1区神经元出现严重损伤,伴有自噬相关的LC3和Beclin-1一过性表达升高。 展开更多
关键词 VD模型 自噬 LC3 BECLIN-1 海马
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银杏叶提取物预处理对VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1表达的影响 被引量：7
4
作者 王德秀 高健 王玉良 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期314-320,共7页
目的:探讨银杏叶提取物(EGB761)预处理对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P-糖蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)的影响。方法:大鼠分为假手术组、模型组和EGB761预处理组。EGB761预处理组在造模前7 d给予EGB761生理盐水混悬液灌胃,假... 目的:探讨银杏叶提取物(EGB761)预处理对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P-糖蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)的影响。方法:大鼠分为假手术组、模型组和EGB761预处理组。EGB761预处理组在造模前7 d给予EGB761生理盐水混悬液灌胃,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法复制VD大鼠模型。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和胶质细胞酸性蛋白(GFAP)/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马CA1区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1表达水平的变化,Western Blot技术检测VD大鼠海马区P-GP和GLT-1蛋白的表达量。结果:(1)Morris水迷宫检测显示,与假手术组相比,模型组大鼠的逃逸潜伏期(Escape latency,EL)明显延长(P<0.01),而EGB761预处理组大鼠EL明显缩短(P<0.01)。(2)阳性细胞计数观察到,与假手术组相比,模型组海马CA1区Ng/P-GP的阳性细胞数明显减少,GFAP/GLT-1的阳性细胞数则显著增多(P<0.01),EGB761预处理组海马CA1区Ng/P-GP和GFAP/GLT-1的阳性细胞数较模型组均明显增多(P<0.01)。(3)积分光密度值测定观察到,模型组和EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较假手术组均明显增大(P<0.01);EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞IOD值均显著高于模型组(P<0.01)。(4)Western Blot分析结果显示,模型组和EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均比假手术组增大(P<0.01),EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均显著大于模型组(P<0.01)。结论:EGB761预处理可能通过上调VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1的表达来预防VD的发生。 展开更多
关键词 血管性痴呆 P-糖蛋白 谷氨酸转运体1 海马 银杏叶提取物 预处理 大鼠
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血管性痴呆大鼠海马神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化 被引量：4
5
作者 王德秀 王玉良 王钢 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期765-770,共6页
目的:探讨血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P精蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)长时间表达变化及其神经元保护机制。方法:采用反复脑缺血再灌注复制VD大鼠模型在15 d和1月两个时间点采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经... 目的:探讨血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P精蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)长时间表达变化及其神经元保护机制。方法:采用反复脑缺血再灌注复制VD大鼠模型在15 d和1月两个时间点采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和GFAP/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化。结果:(1)模型组大鼠各时间点的Morris水迷宫逃逸潜伏期比假手术组均明显延长(P<0.01)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低(P<0.01)而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及海马区神经元上P-GP和胶质细胞上GLT-1表达均明显升高(P<0.01);与模型组15 d时间点比较,模型组1月时间点的海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及P-GP和GLT-1的表达均明显升高(P<0.01)。(3)积分光密度值测定显示:模型15 d时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值比假手术组各时间点均明显变大(P<0.01);模型1月时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较15 d时间点更大(P<0.01)。结论:神经元的P-GP和胶质细胞的GLT-1可能参与VD大鼠海马神经元的保护。 展开更多
关键词 血管性痴呆 P-糖蛋白 谷氨酸转运体1 海马 神经颗粒素 大鼠
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Netol—siRNA干预对疼痛模型大鼠条件回避行为和前扣带回NMDA受体亚基的影响 被引量：2
6
作者 张雷 于剑锋 +5 位作者 杨舟静 胡军 陈静 石智勇 王钢 张岩 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期595-600,共6页
目的探讨NetO1-siRNA干预对神经病理性疼痛（neuropathic pain，NP）模型大鼠痛相关负性情绪和前扣带回（anterior cingulate cortex，ACC）的Neto1（Neuropilin and tolloid—like1）以及N-甲基-D-天冬氨酸（N—methyl-D—aspartate，N... 目的探讨NetO1-siRNA干预对神经病理性疼痛（neuropathic pain，NP）模型大鼠痛相关负性情绪和前扣带回（anterior cingulate cortex，ACC）的Neto1（Neuropilin and tolloid—like1）以及N-甲基-D-天冬氨酸（N—methyl-D—aspartate，NMDA）受体亚基NR2A和NR2B表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠40只，随机分为假手术组（sham operated group，SO组）、坐骨神经慢性压迫疼痛模型组（chronic constriction injury of the sciatic nerve，CCI组）。术后第24天，s0组和CCI组大鼠ACC部位经脑立体定位注射LV—Neto1—RNAi（30160—1），制备成siRNA SO组和siRNA CCI组。每组10只大鼠。采用坐骨神经慢性压迫损伤制备大鼠CCI模型。各组大鼠分别于第7天、14天、21天和28天测量机械缩足阈（mechanical with drawal threshold，MWT）和热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency，TWL）。RT—PCR和Western Blotting方法检测ACC部位的Neto1、NR2A和NR2B的mRNA和蛋白表达水平。结果CCI组的TWL和MWT比SO组均降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。CCI组回避分数[（410．54±44．79）s]比SO组[（240．23±27．02）s]升高，差异有统计学意义（P〈0．05），但与siRNA CCI组[（395．16±36.25）s]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。RT-PCR结果显示，CCI组Neto1、NR2A和NR2B表达水平比SO组均升高（P〈0．05），经Neto1—siRNA干预后，Neto1和NR2A表达水平降低（P〈0．05），但NR2B无显著变化。Western Blotting结果显示，CCI组Neto1、NR2A和NR2B表达水平比SO组均升高（P〈0．05），经Neto1—siRNA干预后，Neto1和NR2A表达水平降低（P〈0．05），但NR2B无显著变化。结论ACC部位的Neto1表达降低可以下调NMDA受体亚基NR2A的表达，但不影响NP所诱导的痛相关负性情绪。 展开更多
关键词 疼痛 前扣带回 条件性回避行为 Neto1蛋白 N-甲基-D-天冬氨酸受体
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大麻素受体1对神经病理性疼痛大鼠空间学习记忆和内侧前额叶脑区 N-甲基-D-天冬氨酸受体 N R1亚基表达的影响 被引量：1
7
作者 胡军 于剑锋 +3 位作者 张月明 王桂芝 梁映霞 王钢 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期839-845,共7页
目的：探讨大麻素受体1（CBR1）对神经病理性疼痛（NP）大鼠空间学习记忆和内侧前额叶（ mPFC）脑区N-甲基-D-天冬氨酸（ NMDA）受体NR1亚基表达的影响。方法选择健康的Wistar雄性大鼠36只，按照随机数字表法随机分成4组（每组9只）：... 目的：探讨大麻素受体1（CBR1）对神经病理性疼痛（NP）大鼠空间学习记忆和内侧前额叶（ mPFC）脑区N-甲基-D-天冬氨酸（ NMDA）受体NR1亚基表达的影响。方法选择健康的Wistar雄性大鼠36只，按照随机数字表法随机分成4组（每组9只）：假手术组（ SO组）、神经病理性疼痛模型组（ NP组）、生理盐水组（ NS组）和CBR1拮抗剂组（ AM251组）。其中，NS组、AM251组是在NP模型的基础上分别在mPFC脑区注射等体积生理盐水和AM251。采用单侧坐骨神经干慢性压迫法制备NP模型。 SO组和NP组分别于术后第3、7、14、21和28天测量机械缩足阈和热缩足潜伏期。术后第29天，按照随机数字表法随机抽取18只NP模型利用立体脑定位仪将生理盐水、AM251分别注射到mPFC脑区。术后第30～37天进行八臂迷宫实验。行为学完成后立即处死大鼠，通过Western印迹法、RT-PCR及免疫荧光方法测定mPFC脑区CBR1、NR1亚基的mRNA 和蛋白表达水平以及磷酸化NR1亚基（ p-NR1-Ser896）的蛋白表达水平。结果与SO组比较，NP组的机械性缩足阈和热缩足潜伏期降低（均P＜0.05），空间学习记忆功能减退（P＜0.05）。与NS组比较，AM251组的空间学习记忆能力明显改善（P＜0.05）。与SO组（CBR1的mRNA和蛋白表达水平分别为：0.23±0.06，0.42±0.03）比较，NP组CBR1的mRNA（0.43±0.12）和蛋白表达水平（0.53±0.05）均增加（均P＜0.05）。与NS组（CBR1的mRNA和蛋白表达水平分别为：0.42±0.11，0.52±0.10）比较，AM251组CBR1的mRNA（0.53±0.05）和蛋白表达水平（0.98±0.17）均增加（均P＜0.05）。与SO 组（ NR1亚基的mRNA和蛋白表达水平及p-NR1亚基的蛋白表达水平分别为：1.50±0.15，0.65±0.05，0.79±0.15）比较，NP组NR1亚基的mRNA（0.94±0.07）和蛋白表达水平（0.24±0.05）均减少（均P＜0.05）， p-NR1亚基的蛋白表达水平（0.33±0.04）减少（P＜0.05）。与NS组（ 展开更多
关键词 神经病理性疼痛 大麻素受体1 N-甲基-D-天冬氨酸受体
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尼氟酸对晚期内皮祖细胞生物学特性的影响
8
作者 刘建华 张晓芸 +2 位作者 崔晓栋 王钢 成敏 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第31期6012-6016,6081,共6页
目的:探讨ClCa通道抑制剂--尼氟酸(Niflumic,NFA)对大鼠骨髓来源的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学特性的影响。方法:密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2完全培养液进行体外培养,以第三代或第四代... 目的:探讨ClCa通道抑制剂--尼氟酸(Niflumic,NFA)对大鼠骨髓来源的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学特性的影响。方法:密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2完全培养液进行体外培养,以第三代或第四代的晚期EPCs作为靶细胞,应用RT-PCR检测晚期EPCs上是否存在Cl Ca通道标志基因TMEM16A和Cl Ca4的表达。采用CCK-8法、Ed U标记法、划痕实验、Boyden小室实验及Matrigel法分别检测10μmol/L NFA对细胞增殖、迁移及体外血管形成能力的影响;应用荧光定量PCR及流式细胞术检测内皮分化标志v WF和CD31基因及蛋白的表达。结果:晚期EPCs表达ClCa通道标志基因TMEM16A和ClCa4;NFA抑制晚期EPCs的迁移功能(P<0.05);但对EPCs的增殖、分化及成血管能力有促进作用。NFA上调了晚期EPCs的CD31和v WF基因和蛋白表达。结论:NFA能促进EPCs的增殖、分化及成血管能力,抑制EPCs的迁移能力。NFA对EPCs生物学特性的这类影响将为心血管疾病治疗药物选择方面提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 尼氟酸 内皮祖细胞 TMEM16A
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CaMK Ⅱ活性对H_2O_2所致SK-N-SH细胞氧化应激损伤的影响
9
作者 于剑锋 耿霞 +3 位作者 王钢 陈静 高文洁 黄科昌 《解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期535-538,共4页
目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_... 目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_2组(H_2O_2组),培养基中只添加CaMKⅡ活性抑制剂KN93组(KN93组),培养基中同时添加H_2O_2和KN93组(H_2O_2+KN93组),倒置显微镜观察细胞形态学,采用CCK-8法测定细胞活力,采用Fura-2/AM荧光法检测细胞内Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i),采用免疫印迹测定CaMKⅡ和磷酸化CaMKⅡ的表达,采用RT-PCR法检测CaMK mRNA表达。结果:与正常对照组比较,H202组细胞体呈圆形的细胞和脱落细胞增加,细胞突起长度缩短,细胞存活率降低,[Ca^(2+)]_i升高,磷酸化CaMKⅡ表达上调,CaMKⅡmRNA表达下调。与H_2O_2组比较,H_2O_2+KN93组脱落细胞明显减少,突起变长,细胞存活率增加,[Ca^(2+)]_i降低,磷酸化CaMKⅡ表达下调,CaMKⅡmRNA表达水平上调。结论:CaMKⅡ增强了H_2O_2诱导的人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤。 展开更多
关键词 过氧化氢 氧化应激 钙钙调蛋白依赖性蛋白激酶2型 神经母细胞瘤
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阿米替林对CCD诱发疼痛模型大鼠海马NMDA受体NR2B亚基表达和空间记忆的影响
10
作者 杨舟静 于剑锋 +3 位作者 陈静 高文洁 王孟岩 王钢 《潍坊医学院学报》 2017年第4期241-244,301,共5页
目的探讨阿米替林(AMI)对神经病理性疼痛大鼠认知和海马N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基表达的影响。方法将32只体重250~300g雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=8):假手术腹腔注射生理盐水组(SO+NS组),假手术腹腔注射AMI组(SO+AMI组)... 目的探讨阿米替林(AMI)对神经病理性疼痛大鼠认知和海马N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚基表达的影响。方法将32只体重250~300g雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=8):假手术腹腔注射生理盐水组(SO+NS组),假手术腹腔注射AMI组(SO+AMI组),背根神经节压迫(CCD)模型腹腔注射生理盐水组(CCD+NS组),CCD模型腹腔注射AMI组(CCD+AMI组)。采用CCD的方法制备神经病理性疼痛模型。CCD后5d开始腹腔每天注射AMI 10mg/kg或同体积生理盐水。各组大鼠分别于术后3,7,14,21,28d测右侧后爪机械缩足阈值。术后第28~32天,八臂迷宫检测大鼠的认知功能,检测后立即处死大鼠以蛋白印迹和反转录PCR方法检测大鼠对侧海马NR2B mRNA和蛋白表达水平。结果与SO+NS比较,CCD+NS组痛阈降低,出现空间记忆降低,对侧海马NR2B mRNA和NR2B蛋白表达明显减少。与CCD+NS组比较,CCD+AMI组空间记忆明显改善,NR2B mRNA和蛋白的表达明显增加。结论 AMI可部分反转神经病理性疼痛导致的空间记忆功能障碍并使海马的NR2B表达上调。 展开更多
关键词 阿米替林 神经病理性疼痛 空间记忆 海马 NR2B亚基
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