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蓝萼甲素调控NOD样受体蛋白3对大鼠心肌细胞缺血再灌注细胞焦亡的影响
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作者 席镇 隽兆东 +7 位作者 刘天宇 郝俊文 夏斌 任冠桦 艾合顺 王明玲 刘永新 孙忠东 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期494-497,共4页
目的探究蓝萼甲素(GLA)调控NOD样受体蛋白3对H9C2心肌细胞缺血再灌注诱发细胞焦亡的影响。方法将H9C2心肌细胞分为对照组(control组);缺氧复氧组(H/R),建立大鼠心肌细胞体外缺血再灌注模型(缺氧4 h,复氧4 h),GLA低剂量(5μmol/L)组和高... 目的探究蓝萼甲素(GLA)调控NOD样受体蛋白3对H9C2心肌细胞缺血再灌注诱发细胞焦亡的影响。方法将H9C2心肌细胞分为对照组(control组);缺氧复氧组(H/R),建立大鼠心肌细胞体外缺血再灌注模型(缺氧4 h,复氧4 h),GLA低剂量(5μmol/L)组和高剂量(10μmol/L)组分别预处理大鼠心肌细胞24 h后,在进行H/R处理。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、检测乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测焦亡相关蛋白:NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Gasdermin蛋白家族D(GSDMD)以及N端GSDMD(N-Gasdermin D,N-GSDMD)的表达。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3 mRNA的表达水平;组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞活性低于对照组(1.000比0.401±0.026,F=916.488,P<0.05),GLA低剂量组、高剂量组细胞比H/R组细胞活性高于对照组(0.469±0.014、0.520±0.009比0.401±0.026,F=916.488,P<0.05);Western blot结果显示:NLRP3/β-肌动蛋白(β-actin)在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.763±0.103、1.223±0.049、0.820±0.054、0.807±0.161,差异有统计学意义(F=13.093,P<0.05);cleaved-Caspase-1/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.525±0.050、0.944±0.059、0.789±0.621、0.705±0.069,差异有统计学意义(F=24.900,P<0.05);ASC/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.630±0.204、1.027±0.235、0.731±0.199、0.652±0.255,差异有统计学意义(F=10.202,P<0.05);GSDMD/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.640±0.148、1.202±0.173、0.852±0.196、0.638±0.073,差异有统计学意义(F=8.797,P<0.05),N-GSDMD/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.455±0.083、1.169±0.187、0.936±0.124、0.675±0.171,差异有统计学意义(F=22.2 展开更多
关键词 蓝萼甲素 NOD样受体蛋白3 缺血再灌注损伤 细胞焦亡 Gasdermin蛋白家族D
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热休克蛋白70对H9C2细胞免受氧糖剥夺损伤的保护作用及分子机制 被引量:1
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作者 刘天宇 夏斌 +4 位作者 任冠桦 席镇 刘永新 孙忠东 隽兆东 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期689-691,共3页
目的观察热休克蛋白70(HSP70)在对抗氧糖剥夺中的作用和发挥抗凋亡中的分子机制,寻找HSP70发挥作用的靶点。方法应用转染的技术将质粒和小干扰RNA(siRNA)转染入H9C2细胞内来过表达和沉默HSP70在细胞内的表达,将细胞分为对照组(control组... 目的观察热休克蛋白70(HSP70)在对抗氧糖剥夺中的作用和发挥抗凋亡中的分子机制,寻找HSP70发挥作用的靶点。方法应用转染的技术将质粒和小干扰RNA(siRNA)转染入H9C2细胞内来过表达和沉默HSP70在细胞内的表达,将细胞分为对照组(control组)、缺氧复氧组(H/R组)、过表达组(H/R+HSP70)、过表达阴性对照组(H/R+NC)、沉默组(H/R+siRNA)、沉默阴性对照组[H/R+NC(siRNA)]。建立心肌细胞的缺氧复氧模型。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞凋亡率,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、基质相互作用分子1(STIM1)的RNA表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测bax、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、基质相互作用分子1(STIM1)的表达,组间比较采用单因素方差分析。结果过表达组的凋亡细胞及凋亡蛋白bax(1.97±0.01)明显低于单纯缺氧复氧组bax(2.15±0.03,F=356.275,P<0.05),差异有统计学意义,而沉默组的凋亡细胞和凋亡蛋白bax(6.09±0.17)明显高于单纯缺氧复氧组bax(2.15±0.03,F=356.275,P<0.05),差异有统计学意义;过表达组STIM1的表达量(3.14±0.14)明显低于单纯缺氧复氧组(4.46±0.20,F=26.602,P<0.05),差异有统计学意义,而沉默组STIM1的表达量(8.58±0.24)明显高于单纯缺氧复氧组(4.46±0.20,F=26.602,P<0.05),差异有统计学意义。结论HSP70可能通过STIM1调节内质网钙失衡发挥抗凋亡作用。 展开更多
关键词 热休克蛋白70 心肌缺血 凋亡 基质相互作用分子1
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