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Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨 被引量：7
1
作者 史立宏 陶蓉 +5 位作者 王云甲 张秀荣 孙秀宁 周风华 罗荣城 张宝刚 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第16期1207-1211,共5页
目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab... 目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab2低表达的siGab2/A549#1、siGab2/A549#2细胞和对照SCR/A549细胞。应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测小分子干扰RNA(siRNA)干扰Gab2表达后的基因和蛋白表达水平。趋化运动实验检测细胞的迁移能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测siRNA干扰Gab2表达后,A549细胞在胰岛素样生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)刺激下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase-9,MMP-9)的表达及磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化人雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamy-cin,pmTOR)的活化情况。结果:siRNA干扰Gab2表达后,RT-PCR测定A549细胞Gab2mRNA相对表达量为1.340±0.009,Scr/A549细胞为1.201±0.074,siGab2#1/A549细胞为0.315±0.008,siGab2#2/A549细胞为0.289±0.007。蛋白印迹法检测A549细胞Gab2蛋白表达量为0.205±0.003,Scr/A549细胞为0.241±0.004,siGab2#1/A549细胞为0.128±0.002,siGab2#2/A549细胞为0.066±0.001。siGab2#2/A549细胞与A549细胞比较Gab2基因表达显著降低,t=168.032,P<0.001;Gab2蛋白表达也显著降低,t=64.352,P<0.001。siGab2#2/A549细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于SCR/A549细胞,t值分别为5.101和10.812,P值分别为0.029和0.002。在IGF-1刺激下,siGab2/A549细胞的MMP-2、MMP-9蛋白的表达量不再有明显变化,t值分别为-2.051和-2.652,P值分别为0.054和0.064。siGab2/A549细胞中pAkt、pmTOR的活化也显著抑制。结论:Gab2可能通过调节Akt/mTOR信号通路,促进A549细胞的侵袭能力。 展开更多
关键词 Gab2 肺肿瘤 A549细胞 侵袭
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阿霉素通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性 被引量：1
2
作者 徐金媛 成丛丛 +5 位作者 钟瑾怡 崔镓钰 张宝刚 王丽华 孙秀宁 史立宏 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第12期949-953,共5页
目的观察阿霉素(Adriamycin,ADM)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性的诱导作用并探讨其机制。方法培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞,用不同浓度阿霉素处理细胞24 h后,MTT法检测细胞生长抑制率及细胞对阿霉素的敏感度。免疫荧光染... 目的观察阿霉素(Adriamycin,ADM)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性的诱导作用并探讨其机制。方法培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞,用不同浓度阿霉素处理细胞24 h后,MTT法检测细胞生长抑制率及细胞对阿霉素的敏感度。免疫荧光染色法检测耐药蛋白ABCG2的表达;免疫印迹法检测Stat3、p-Stat3、转录因子cMyc及耐药蛋白ABCG2的表达水平。结果阿霉素持续刺激4周后,获得的MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显降低,且耐药蛋白ABCG2的表达明显增加;MDA-MB-468/ADM细胞p-Stat3、cMyc及ABCG2的表达量显著增加;MDAMB-468/ADM细胞培养液中加入WP1066后Stat3磷酸化明显抑制,cMyc及ABCG2的表达水平下调,并且MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显增强(P<0.05)。结论阿霉素可以通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞产生耐药性。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 阿霉素 耐药性 STAT3 CMYC ABCG2
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PGRN过表达慢病毒载体的构建与鉴定
3
作者 李敬 张玉英 +5 位作者 李树林 李森 刘春霄 李家仪 王红艳 梁淑娟 《潍坊医学院学报》 2019年第4期244-246,316,F0003,共5页
目的构建针对颗粒蛋白前体(PGRN)基因的过表达载体,鉴定PGRN基因过表达效率,研究其对胃癌细胞的生物学效应的影响。方法 PCR扩增获得人EPO基因信号肽与PGRN成熟蛋白编码的融合序列,经酶切、连接到慢病毒载体Plenti6/V5上,通过菌落PCR、... 目的构建针对颗粒蛋白前体(PGRN)基因的过表达载体,鉴定PGRN基因过表达效率,研究其对胃癌细胞的生物学效应的影响。方法 PCR扩增获得人EPO基因信号肽与PGRN成熟蛋白编码的融合序列,经酶切、连接到慢病毒载体Plenti6/V5上,通过菌落PCR、双酶切和DNA测序验证构建出Plenti6/V5-epo-PGRN载体,转染293T细胞的制备慢病毒。经纯化和病毒滴定后,感染BGC-823细胞并建立过表达胃癌细胞株,提取细胞总RNA和总蛋白,分别用RT-PCR法和WB法测定PGRN分子及蛋白过表达的水平,用MTT法和克隆形成检测细胞增殖能力。结果成功构建出PGRN过表达慢病毒载体,RT-PCR和WB分别显示过表达组BGC-823细胞表达PGRN的mRNA和蛋白较对照组明显增加,细胞增殖和克隆形成能力明显增强。结论构建的PGRN慢病毒过表达载体在分子与蛋白水平上明显上调BGC-823细胞株PGRN的表达,促进胃癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 颗粒蛋白前体 过表达 慢病毒
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