背景与目的:F-BOX蛋白(FBP)家族成员F-box only protein 43(FBXO43)在肝癌和结直肠癌等消化系统肿瘤中高表达,促进肿瘤恶性进展,且研究显示,FBXO43促进p53降解,发挥促瘤功能。为此本研究进一步探讨FBXO43在胃癌中的表达及其在胃癌恶性...背景与目的:F-BOX蛋白(FBP)家族成员F-box only protein 43(FBXO43)在肝癌和结直肠癌等消化系统肿瘤中高表达,促进肿瘤恶性进展,且研究显示,FBXO43促进p53降解,发挥促瘤功能。为此本研究进一步探讨FBXO43在胃癌中的表达及其在胃癌恶性进展中的功能与相关机制。方法:基于TCGA、GTEx和Kaplan-Meier Plotter等在线数据库,分析FBXO43在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者预后的相关性。用Western blot和qPCR检测FBXO43在胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平;用免疫组化检测在胃癌组织与癌旁组织中FBXO43的蛋白水平。利用脂质体转染特异性靶向FBXO43和p53的小分子干扰RNA分子(siFBXO43和sip53),分别或同时敲低HGC27和MGC803细胞中的FBXO43和p53的表达,利用CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移等实验,检测细胞生长、增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用免疫共沉淀(Co-IP)检测FBXO43和p53的相互作用情况,以及敲低FBXO43后,p53的总泛素化水平。结果:TCGA和GTEx数据显示,FBXO43在胃癌中表达水平明显上调(均P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据显示,FBXO43高表达的胃癌患者总生存期(HR=1.39,95%CI=1.09~1.78,P=0.0076)、无进展生存期(HR=1.35,95%CI=1.04~1.76,P=0.023)、进展后生存期(HR=1.6,95%CI=1.18~2.17,P=0.0021)均显著缩短。Western blot、qPCR和免疫组化结果显示,FBXO43在胃癌细胞和组织中上调,FBXO43蛋白水平与胃癌患者肿瘤大小、远处转移、TNM分期明显有关(均P<0.05)。CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移结果显示,敲低FBXO43表达,胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(均P<0.05)。敲低FBXO43表达,上调p53蛋白的水平。Co-IP结果显示,FBXO43与p53可以相互共沉淀,敲低FBXO43,p53的总泛素化水平显著增加。功能实验结果显示,同时敲低p53,FBXO43敲低对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用被拮抗,回复胃癌细胞的体外恶性表型(均P<0.05)�展开更多
文摘背景与目的:F-BOX蛋白(FBP)家族成员F-box only protein 43(FBXO43)在肝癌和结直肠癌等消化系统肿瘤中高表达,促进肿瘤恶性进展,且研究显示,FBXO43促进p53降解,发挥促瘤功能。为此本研究进一步探讨FBXO43在胃癌中的表达及其在胃癌恶性进展中的功能与相关机制。方法:基于TCGA、GTEx和Kaplan-Meier Plotter等在线数据库,分析FBXO43在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者预后的相关性。用Western blot和qPCR检测FBXO43在胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平;用免疫组化检测在胃癌组织与癌旁组织中FBXO43的蛋白水平。利用脂质体转染特异性靶向FBXO43和p53的小分子干扰RNA分子(siFBXO43和sip53),分别或同时敲低HGC27和MGC803细胞中的FBXO43和p53的表达,利用CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移等实验,检测细胞生长、增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用免疫共沉淀(Co-IP)检测FBXO43和p53的相互作用情况,以及敲低FBXO43后,p53的总泛素化水平。结果:TCGA和GTEx数据显示,FBXO43在胃癌中表达水平明显上调(均P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据显示,FBXO43高表达的胃癌患者总生存期(HR=1.39,95%CI=1.09~1.78,P=0.0076)、无进展生存期(HR=1.35,95%CI=1.04~1.76,P=0.023)、进展后生存期(HR=1.6,95%CI=1.18~2.17,P=0.0021)均显著缩短。Western blot、qPCR和免疫组化结果显示,FBXO43在胃癌细胞和组织中上调,FBXO43蛋白水平与胃癌患者肿瘤大小、远处转移、TNM分期明显有关(均P<0.05)。CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移结果显示,敲低FBXO43表达,胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(均P<0.05)。敲低FBXO43表达,上调p53蛋白的水平。Co-IP结果显示,FBXO43与p53可以相互共沉淀,敲低FBXO43,p53的总泛素化水平显著增加。功能实验结果显示,同时敲低p53,FBXO43敲低对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用被拮抗,回复胃癌细胞的体外恶性表型(均P<0.05)�
