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基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用
被引量:
2
1
作者
付洁
刘潜
+4 位作者
欧伦
孙云娟
李梦怡
张晶
宋海峰
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期743-747,共5页
目的:考察基于核酸的酶联桥接分析(ELBA)法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性,为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线(5-50000pmol·L-1)。...
目的:考察基于核酸的酶联桥接分析(ELBA)法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性,为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线(5-50000pmol·L-1)。LNCap细胞中转染双链siRNA(终浓度100nmol·L-1),24h后取上清、细胞裂解物及RNA诱导沉默复合体(RlSC),根据标准曲线对各组分中反义链RNA浓度进行定量。分别配制含双链siRNA5-25000pmol·L-1或反义siRNA5-25000pmol·L-1的小鼠全血浆样品,用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义siRNA3-6250pmol·L-1样品,考察ELBA方法对血浆和生物基质中siRNA反义链进行定量的特异性和定量范围。sc给予C57小鼠LNCap细胞制备移植瘤模型,iv给予双链siRNA药物15nmol·kg-1,30min后ELBA法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA浓度。结果基于ELBA方法对细胞基质中反义链siRNA定量范围为5-50000pmol·L-1,且ELBA可以对转染双链siRNA的细胞裂解物和RlSC复合物中的反义链siRNA进行特异定量。ELBA对血浆中双链siRNA中的反义链无响应,对血浆和组织中siRNA反义链的定量分析范围分别为5-25000pmol·L-1和3-3125pmol·L-1。双链siRNA在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30min后,ELBA检测发现,反义链RNA分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论ELBA方法可用于siRNA药物的反义链的定量分析及组织分布研究。
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关键词
核酸杂交-酶联桥接分析法
SIRNA
药代动力学
组织分布
下载PDF
职称材料
题名
基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用
被引量:
2
1
作者
付洁
刘潜
欧伦
孙云娟
李梦怡
张晶
宋海峰
机构
军事医学
科
学院放射与辐射医学研究所
药
理毒理学研究室
湘乡市
人民
医院
临床
药学
科
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期743-747,共5页
基金
国家科技重大专项(2012ZX09301003-001-007)~~
文摘
目的:考察基于核酸的酶联桥接分析(ELBA)法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性,为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线(5-50000pmol·L-1)。LNCap细胞中转染双链siRNA(终浓度100nmol·L-1),24h后取上清、细胞裂解物及RNA诱导沉默复合体(RlSC),根据标准曲线对各组分中反义链RNA浓度进行定量。分别配制含双链siRNA5-25000pmol·L-1或反义siRNA5-25000pmol·L-1的小鼠全血浆样品,用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义siRNA3-6250pmol·L-1样品,考察ELBA方法对血浆和生物基质中siRNA反义链进行定量的特异性和定量范围。sc给予C57小鼠LNCap细胞制备移植瘤模型,iv给予双链siRNA药物15nmol·kg-1,30min后ELBA法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA浓度。结果基于ELBA方法对细胞基质中反义链siRNA定量范围为5-50000pmol·L-1,且ELBA可以对转染双链siRNA的细胞裂解物和RlSC复合物中的反义链siRNA进行特异定量。ELBA对血浆中双链siRNA中的反义链无响应,对血浆和组织中siRNA反义链的定量分析范围分别为5-25000pmol·L-1和3-3125pmol·L-1。双链siRNA在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30min后,ELBA检测发现,反义链RNA分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论ELBA方法可用于siRNA药物的反义链的定量分析及组织分布研究。
关键词
核酸杂交-酶联桥接分析法
SIRNA
药代动力学
组织分布
Keywords
ELBA
siRNA
pharmacokinetics, tissue distribution
分类号
R927 [医药卫生—药学]
O657 [理学—分析化学]
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职称材料
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作者
出处
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被引量
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1
基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用
付洁
刘潜
欧伦
孙云娟
李梦怡
张晶
宋海峰
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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