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拟南芥SUA41基因的表达和功能分析 被引量:4
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作者 黄国文 韩玉珍 傅永福 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-100,共8页
植物的开花受多条途径的控制,其中包括光周期途径、春化途径、赤霉素途径、自主途径和温敏途径。SUA41(SUMO substrate in Arabidopsis 41)是本实验室筛选到的、SUMO(small ubiquitin modifier)的潜在底物,并且前人的研究发现它参与自... 植物的开花受多条途径的控制,其中包括光周期途径、春化途径、赤霉素途径、自主途径和温敏途径。SUA41(SUMO substrate in Arabidopsis 41)是本实验室筛选到的、SUMO(small ubiquitin modifier)的潜在底物,并且前人的研究发现它参与自主途径的开花调节,但其对开花时间的调节机制没有详细报道。文章对SUA41基因的表达、sua41突变体对不同环境条件的反应以及SUA41对开花时间调节的可能机制进行初步分析。结果显示,与野生型相比,sua41突变体在常温或低温、长日或者短日条件下均为早花,并且在低温和常温下的开花时间没有太大差别。过表达SUA41能够恢复sua41突变体的早花表型。SUA41基因在拟南芥的幼苗、根、茎、叶和花以及各个植物发育阶段都有表达,说明SUA41基因是一个组成型表达基因。SUA41基因的表达与GA处理无关,长日低温条件能够诱导SUA41基因的表达,且在温敏途径突变体fve和fca中SUA41基因的表达量减少。与野生型比较,sua41突变体中CO基因的mRNA表达量没有明显变化,FT和SOC1基因表达量增加且FT增加幅度更大,FLC的mRNA表达量减少。结果表明SUA41基因虽然在自主途径中起作用,但主要在温敏途径中参与拟南芥开花时间调节。 展开更多
关键词 开花调节 表达分析 自主途径 温敏途径
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植物原生质体融合技术的研究进展 被引量:4
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作者 黄国文 《湖南科技学院学报》 2011年第12期30-34,共5页
植物原生质体融合(protoplast fusion)技术能够克服植物远缘杂交不亲和的障碍,实现遗传物质重组,创造和培养植物新品种,对多基因控制农艺性状的改良和植物基因互作研究具有重要的意义。本文主要综述了原生质体融合方法、融合机理和融合... 植物原生质体融合(protoplast fusion)技术能够克服植物远缘杂交不亲和的障碍,实现遗传物质重组,创造和培养植物新品种,对多基因控制农艺性状的改良和植物基因互作研究具有重要的意义。本文主要综述了原生质体融合方法、融合机理和融合方式等的研究进展,并且分析了其应用和发展前景。 展开更多
关键词 原生质体 融合方法 融合方式 融合机制 应用
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SUA41蛋白表达和纯化及其多克隆抗体制备 被引量:3
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作者 黄国文 韩玉珍 傅永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期153-158,165,共7页
旨在制备特异性SUA41多克隆抗体,为深入研究其在植物生长发育中的功能提供有力的分子生物学和生物化学的工具。PCR扩增拟南芥SUA41基因中编码280个氨基酸(401-680位氨基酸)的特异片段,经过GATEWAY的DNA重组技术构建了原核表达载体pDEST1... 旨在制备特异性SUA41多克隆抗体,为深入研究其在植物生长发育中的功能提供有力的分子生物学和生物化学的工具。PCR扩增拟南芥SUA41基因中编码280个氨基酸(401-680位氨基酸)的特异片段,经过GATEWAY的DNA重组技术构建了原核表达载体pDEST17-SUA41,用热休克法转化到E.coliBL21(DE3)star感受态细胞,以异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出6×His-SUA41融合蛋白,用8 mol/L尿素缓冲液溶解包涵体并且经过水逐级去除尿素获得提纯的融合蛋白,并利用Western blotting鉴定确认。融合蛋白经Ni金属螯合柱亲和层析得以纯化,用SDS-PAGE进一步纯化。纯化的融合蛋白经过SDS-PAGE后切胶回收,免疫小白兔,制备多抗血清,然后用Western blotting进行检测,鉴定血清特异性和效价。结果显示,融合蛋白6×His-SUA41免疫兔,产生特异性的SUA41兔抗血清,可以检测到细菌和拟南芥组织中SUA41蛋白。用水提纯变性剂尿素溶解的包涵体蛋白具有可行性。制备的特异性SUA41兔抗血清效价高,能够有效地识别大肠杆菌表达的和拟南芥的SUA41蛋白。在有合适的对照情况下,该兔抗血清可以用于分析植物中SUA41蛋白的功能。 展开更多
关键词 SUA41 融合蛋白 蛋白纯化 兔抗血清
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环境条件对sua41突变体表型的影响 被引量:1
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作者 黄国文 《湖南科技学院学报》 2014年第5期92-96,共5页
突变体表型分析是基因功能研究的重要组成部分,通过对突变体的分析可以预见突变序列的未知功能。本文研究了sua41突变体的表型特征和可塑性变化。结果表明,与Col-0相对照,sua41的莲座叶和茎生叶片较小,植株的茎细小,花序轴顶端的花蕾较... 突变体表型分析是基因功能研究的重要组成部分,通过对突变体的分析可以预见突变序列的未知功能。本文研究了sua41突变体的表型特征和可塑性变化。结果表明,与Col-0相对照,sua41的莲座叶和茎生叶片较小,植株的茎细小,花序轴顶端的花蕾较少,在果枝上有聚合果现象;sua41突变体的早花表型与光照强度和光质无关;不同光照条件下sua41根长与野生型相比有差异;不同光质条件下sua41下胚轴长度比野生型的稍长;低温条件下sua41突变体根长比野生型的短,下胚轴长度比野生型的稍微长些。说明,SUA41基因除了调节开花时间之外,还调节茎、叶、上胚轴和根的生长以及花芽的形成。SUA41基因是一个多功能的基因。 展开更多
关键词 sua41突变体 表型 光照 温度
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羊蹄叶过氧化物酶的纯化和酶学性质研究 被引量:1
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作者 黄国文 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1777-1782,共6页
采用磷酸缓冲液浸提法提取羊蹄叶POD,对影响酶提取的主要因素(料液比、浸提液p H、浸提温度和浸提时间)进行单因素实验和正交实验,用p H沉淀和丙酮沉淀对酶进行了纯化,并研究了其酶学性质。结果表明,羊蹄叶POD的最佳提取条件是料液比为1... 采用磷酸缓冲液浸提法提取羊蹄叶POD,对影响酶提取的主要因素(料液比、浸提液p H、浸提温度和浸提时间)进行单因素实验和正交实验,用p H沉淀和丙酮沉淀对酶进行了纯化,并研究了其酶学性质。结果表明,羊蹄叶POD的最佳提取条件是料液比为1∶40,提取液p H为9,浸提温度是35℃,浸提时间为30 min。调节提取液的p H为5以及用1倍和0.8倍体积的丙酮沉淀提取液时蛋白相对沉淀量多和酶的比活性大。羊蹄叶POD以愈创木酚和H2O2为底物的Km分别是0.12 mmol/L和0.62×10-3mmol/L。Cu SO4对羊蹄叶POD活性有激活作用,而Zn SO4、Mg SO4、Ca Cl2、KCl和Na Cl对POD活性有抑制作用。研究证明羊蹄叶POD的提取和纯化方法简单有效,其酶学性质为理解羊蹄植物的生长特性和酶学应用提供依据。 展开更多
关键词 羊蹄叶 过氧化物酶 分离纯化 酶学性质
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3,5-二硝基水杨酸法测定植物总糖含量的探讨
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作者 黄国文 邵金华 《生物技术世界》 2013年第5期181-181,共1页
本文以淀粉和棉花为材料用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定了水解产物葡萄糖含量的变化。结果表明随着稀硫酸浓度增加和水解时间延长,淀粉水解得到的总糖含量逐渐增多,但是棉花水解得到的总糖含量很少且变化不明显。说明用DNS法测定植物总... 本文以淀粉和棉花为材料用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定了水解产物葡萄糖含量的变化。结果表明随着稀硫酸浓度增加和水解时间延长,淀粉水解得到的总糖含量逐渐增多,但是棉花水解得到的总糖含量很少且变化不明显。说明用DNS法测定植物总糖包含有淀粉大量水解产生的葡糖糖,而纤维素水解产生的葡萄糖很少。用碘液检测淀粉水解液为淡黄色时,测定的总糖含量较准确。 展开更多
关键词 淀粉 棉花 稀硫酸 水解
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