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特殊结构双靶点CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用 被引量:2
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作者 刘灿 彭浩 +7 位作者 曾伟杰 李薇 陈可可 李琬婷 曾桂芳 梁晓 胡隽源 周明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1730-1740,共11页
目的:探索并设计一种新颖的双靶点嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)结构,获得相应CAR-T细胞并验证其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:构建并制备5种包含人源化CD19 scFv和CD79b scFv、CD8 hinge&TM-4-1BB-CD3ζ和/或... 目的:探索并设计一种新颖的双靶点嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)结构,获得相应CAR-T细胞并验证其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:构建并制备5种包含人源化CD19 scFv和CD79b scFv、CD8 hinge&TM-4-1BB-CD3ζ和/或CD3ε链胞内区的双靶点CAR-T细胞,荧光素酶法和ELISA法检测CAR-T细胞对3M-CD19-CD79b-Luc靶细胞的杀伤能力和细胞因子的分泌,选取最优结构CAR-T细胞治疗Daudi-Luc细胞构建的白血病小鼠模型并评估其疗效,同时使用其他靶点代入优选结构,相同方法验证该结构的稳定性及有效性。结果:CAR-19-79b-T细胞培养7 d后,CAR-19表达率为21.6%-36.3%,CAR-79b表达率为21.7%-37.8%。CAR-19-79b-T细胞在10∶1效靶比时,对3M-CD19-CD79b-Luc细胞的杀伤率均显著高于T细胞对照组,其中CARⅢ、CARⅣ号结构细胞杀伤能力最强,均显著高于T细胞组(P<0.01);CARⅣ与CAR V结构IFN-γ和TNF-α的分泌量均最低,且两者间均无统计学意义(P>0.05)。杀伤显著且分泌细胞因子水平低的CARⅣ细胞对Daudi-Luc白血病小鼠治疗效果明显,延长小鼠生存周期至64 d,T细胞对照组小鼠于(41.0±2.4)d全部死亡。相同结构构建的CAR-19-BCMA-T和CAR-19-22-T均表现出了显著的杀伤能力和较低的细胞因子水平。结论:成功设计了一种新颖的抗双靶点CAR-T细胞,能够高效杀伤相应的肿瘤细胞,同时分泌较少的细胞因子(如TNF-α,IFN-γ),而且对Daudi淋巴瘤小鼠动物模型有显著的治疗效果,该双靶点CAR结构表现出良好的杀伤特异性和安全性。 展开更多
关键词 CD19 CD79b 双靶点嵌合抗原受体 淋巴瘤
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CD19和CD22双靶点CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用 被引量:1
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作者 李薇 曾伟杰 +8 位作者 彭浩 刘灿 刘广花 肖非笛 曾桂芳 梁晓 蔡车国 胡隽源 周明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期623-630,共8页
目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:将含有人源化CD19 Sc Fv的二代CAR分子和带有CD3ε链作为共刺激结构域的CD22 Sc Fv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢... 目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:将含有人源化CD19 Sc Fv的二代CAR分子和带有CD3ε链作为共刺激结构域的CD22 Sc Fv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢病毒载体p LTR-CMV-MCS中,以HEK-293T细胞包装相应的慢病毒载体,感染健康志愿者提供的T细胞制备CAR-19-22-T细胞,同时以相同二代结构分别构建单靶向CAR-T细胞作为参照。构建表达荧光素酶、CD19和/或CD22的前列腺癌3M细胞(靶细胞)。将各种CAR-T细胞与靶细胞共同培养,采用荧光素酶化学发光法和ELISA法检测其对靶细胞的杀伤能力和细胞因子的分泌水平。通过尾静脉注射Raji-Luc细胞构建NOD-SCID免疫缺陷小鼠白血病模型,分别注射各组CAR-T细胞进行治疗并评估其疗效。结果:培养7 d的CAR-19-22-T细胞的CAR-19表达率为13.7%,CAR-22表达率为14.3%。CAR-19-22-T细胞在10∶1效靶比时,对3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc和3M-CD19-CD22-Luc细胞的杀伤率均显著高于T细胞[(78.1±14.4)%vs(11.1±4.3)%(、46.7±10.7)%vs(12.4±2.7)%(、90.5±4.3)%vs(14.3±3.7)%,均P<0.01];与3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc、3M-CD19-CD22-Luc靶细胞共培养后,CAR-19-22-T细胞IFN-γ、TNF-α和IL-2水平均显著低于CAR-19-T和CAR-22-T细胞(P<0.05或P<0.01)。CAR-19-22-T细胞对移植Raji-Luc细胞模型小鼠治疗效果明显,其生存期显著长于T细胞组(P<0.01),与CAR-19-T组和CAR-22-T组荷瘤小鼠比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:成功设计并制备了一种双靶点CAR-19-22-T细胞,其能够有效杀伤表达CD19和/或CD22抗原的肿瘤细胞,对Raji-Luc细胞的白血病模型小鼠有显著的治疗效果。 展开更多
关键词 CD19 CD22 双靶点CAR-T细胞 淋巴细胞白血病 靶向治疗
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造血干细胞无关供者心理压力现状及影响因素研究
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作者 李芳 朱满丽 +3 位作者 曾庆玲 王紫艳 张希琳 邱红霞 《湖南师范大学学报(医学版)》 2023年第6期145-150,共6页
目的:调查造血干细胞无关供者的心理压力现状,探讨其与领悟社会支持、应对方式之间的关系,并分析其影响因素。方法:采用便利抽样方法,选取2020年8月―2022年12月在湖南省人民医院血液内科进行造血干细胞采集的94名无关供者作为研究对象... 目的:调查造血干细胞无关供者的心理压力现状,探讨其与领悟社会支持、应对方式之间的关系,并分析其影响因素。方法:采用便利抽样方法,选取2020年8月―2022年12月在湖南省人民医院血液内科进行造血干细胞采集的94名无关供者作为研究对象,运用一般资料调查表、中文版压力知觉量表、领悟社会支持量表及简易应对方式问卷对其进行调查。采用独立样本t检验及单因素方差分析判断不同特征的无关供者在心理压力得分上的差异,采用Pearson相关分析明确无关供者的心理压力与社会支持、应对方式、焦虑、抑郁的相关性,采用多元线性回归分析明确无关供者的心理压力的影响因素。结果:造血干细胞无关供者的心理压力得分总分为(18.74±8.735)分,其中有20人(21.3%)为健康危险性心理压力。单因素分析结果表明,不同年龄、文化程度、职业类型、常住地、献血次数的无关供者心理压力得分差异存在统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果表明,无关供者心理压力得分与家庭支持、朋友支持、其他支持、积极应对均呈负相关(r=-0.565~-0.482,P<0.01),与消极应对呈正相关。多元线性回归分析结果表明,积极应对、朋友支持是影响无关供者心理压力的主要因素(R^(2)=0.373,P<0.001)。结论:造血干细胞无关供者的心理压力处于中等水平,五分之一以上的无关供者存在健康危险性心理压力,并受多种因素影响。医护人员应主动关注无关供者的心理压力水平,结合影响因素制定针对性的心理干预措施,提高无关供者的捐献意愿与体验,推进我国造血干细胞捐献事业高质量发展。 展开更多
关键词 造血干细胞 无关供者 心理压力 现状 影响因素
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