目的研究软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法采用三维微团培养法培养新西兰兔膝关节软骨细胞,将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组,通过秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨...目的研究软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法采用三维微团培养法培养新西兰兔膝关节软骨细胞,将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组,通过秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝,从大体形态、组织切片染色、免疫组化染色及RT-PCR分析成软骨细胞表型的改变。结果对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组细胞较密集、均一,丙烯酰胺组细胞较少、分散。对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组COLⅡ、蛋白多糖染色深,COLⅠ染色浅;而丙烯酰胺组COLⅡ、蛋白多糖染色浅,COLⅠ染色较深。RT-PCR数据统计分析显示对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比,COLⅠ(1.21±0.21 vs 1.55±0.06、1.70±0.07)及COLⅡ(1.10±0.12 vs 0.91±0.21、0.90±0.30)表达差异无统计学意义(P>0.05);而对照组COLⅡ表达明显多于丙烯酰胺组(0.26±0.06),COLⅠ表达明显低于丙烯酰胺组(9.63±0.38),差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙烯酰胺调节软骨细胞骨架波形蛋白中间纤丝可明显下调COLⅡ、蛋白多糖的表达。展开更多
目的探讨骨关节炎(OA)膝关节正常及退变区域原位软骨细胞自发性[Ca^(2+)]i(细胞内游离钙离子浓度)信号特征与差异。方法以西南医院关节外科提供的OA患者膝关节置换软骨组织作为研究对象,根据软骨区域分正常组与OA组。使用Fluo-8 AM钙离...目的探讨骨关节炎(OA)膝关节正常及退变区域原位软骨细胞自发性[Ca^(2+)]i(细胞内游离钙离子浓度)信号特征与差异。方法以西南医院关节外科提供的OA患者膝关节置换软骨组织作为研究对象,根据软骨区域分正常组与OA组。使用Fluo-8 AM钙离子探针以及荧光显微镜观测法对组织中原位软骨细胞在不同Ca^(2+)浓度环境下自发性[Ca^(2+)]i信号进行观测;使用图像处理软件与统计学单因素方差分析法对检测结果进行分析。结果正常与OA软骨细胞在0 mM与4 mM Ca^(2+)环境中均产生自发性[Ca^(2+)]i信号,且具向相邻细胞传递特性。正常组处于4 mM Ca^(2+)浓度中,表层及中层软骨细胞自发性[Ca^(2+)]i信号各项指标与深层软骨细胞比较存在统计学差异。(1)表层vs.深层,峰值量级:(1.73±0.13)vs.(2.90±0.25);响应率:(15.08%±8.29%)vs(69.65%±5.21%);峰值数目:(0.17±0.09)vs(0.95±0.08),P<0.05。(2)中层vs深层,峰值量级:(2.03±0.76)vs(2.90±0.25);响应率:(36.75%±6.73%)vs(69.65%±5.21%);峰值数目:(0.61±0.10)vs(0.95±0.08),P<0.05。但该差异在0 mM Ca^(2+)环境中不存在。OA组在0 mM或4 mM Ca^(2+)环境中各层软骨细胞[Ca^(2+)]i信号均不存在差异;但其中层与深层软骨细胞[Ca^(2+)]i信号易受胞外Ca^(2+)浓度影响。(1)中层,4 mM vs 0 mM:峰值量级:(2.3±0.11)vs.(1.86±0.11)、响应率:(53.88%±8.21%)vs.(26.50%±8.89%)、峰值数目:(0.84±0.94)vs.(0.28±0.07),P<0.05;(2)深层,4 mM vs 0 mM:峰值数目:(0.59±0.11)vs.(0.21±0.06),P<0.05。在4 mM Ca^(2+)环境中,OA组表层与中层细胞[Ca^(2+)]i信号明显强于正常组:(1)表层,OA vs正常:峰值量级:(2.62±0.51)vs(1.73±0.13),P<0.05;(2)中层,OA vs.正常:峰值量级:(2.3±0.11)vs.(2.03±0.76),P<0.05。但深层区域中没有此差异。结论正常软骨组织内各层细胞[Ca^(2+)]i信号特征具有差异,且依赖于胞外Ca^(2+)浓度调控;OA软骨细胞[Ca^(2+)]i信号相对于正常细胞存在差异,OA软骨组织内环境的异常展开更多
文摘目的研究软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法采用三维微团培养法培养新西兰兔膝关节软骨细胞,将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组,通过秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝,从大体形态、组织切片染色、免疫组化染色及RT-PCR分析成软骨细胞表型的改变。结果对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组细胞较密集、均一,丙烯酰胺组细胞较少、分散。对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组COLⅡ、蛋白多糖染色深,COLⅠ染色浅;而丙烯酰胺组COLⅡ、蛋白多糖染色浅,COLⅠ染色较深。RT-PCR数据统计分析显示对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比,COLⅠ(1.21±0.21 vs 1.55±0.06、1.70±0.07)及COLⅡ(1.10±0.12 vs 0.91±0.21、0.90±0.30)表达差异无统计学意义(P>0.05);而对照组COLⅡ表达明显多于丙烯酰胺组(0.26±0.06),COLⅠ表达明显低于丙烯酰胺组(9.63±0.38),差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙烯酰胺调节软骨细胞骨架波形蛋白中间纤丝可明显下调COLⅡ、蛋白多糖的表达。
文摘目的探讨骨关节炎(OA)膝关节正常及退变区域原位软骨细胞自发性[Ca^(2+)]i(细胞内游离钙离子浓度)信号特征与差异。方法以西南医院关节外科提供的OA患者膝关节置换软骨组织作为研究对象,根据软骨区域分正常组与OA组。使用Fluo-8 AM钙离子探针以及荧光显微镜观测法对组织中原位软骨细胞在不同Ca^(2+)浓度环境下自发性[Ca^(2+)]i信号进行观测;使用图像处理软件与统计学单因素方差分析法对检测结果进行分析。结果正常与OA软骨细胞在0 mM与4 mM Ca^(2+)环境中均产生自发性[Ca^(2+)]i信号,且具向相邻细胞传递特性。正常组处于4 mM Ca^(2+)浓度中,表层及中层软骨细胞自发性[Ca^(2+)]i信号各项指标与深层软骨细胞比较存在统计学差异。(1)表层vs.深层,峰值量级:(1.73±0.13)vs.(2.90±0.25);响应率:(15.08%±8.29%)vs(69.65%±5.21%);峰值数目:(0.17±0.09)vs(0.95±0.08),P<0.05。(2)中层vs深层,峰值量级:(2.03±0.76)vs(2.90±0.25);响应率:(36.75%±6.73%)vs(69.65%±5.21%);峰值数目:(0.61±0.10)vs(0.95±0.08),P<0.05。但该差异在0 mM Ca^(2+)环境中不存在。OA组在0 mM或4 mM Ca^(2+)环境中各层软骨细胞[Ca^(2+)]i信号均不存在差异;但其中层与深层软骨细胞[Ca^(2+)]i信号易受胞外Ca^(2+)浓度影响。(1)中层,4 mM vs 0 mM:峰值量级:(2.3±0.11)vs.(1.86±0.11)、响应率:(53.88%±8.21%)vs.(26.50%±8.89%)、峰值数目:(0.84±0.94)vs.(0.28±0.07),P<0.05;(2)深层,4 mM vs 0 mM:峰值数目:(0.59±0.11)vs.(0.21±0.06),P<0.05。在4 mM Ca^(2+)环境中,OA组表层与中层细胞[Ca^(2+)]i信号明显强于正常组:(1)表层,OA vs正常:峰值量级:(2.62±0.51)vs(1.73±0.13),P<0.05;(2)中层,OA vs.正常:峰值量级:(2.3±0.11)vs.(2.03±0.76),P<0.05。但深层区域中没有此差异。结论正常软骨组织内各层细胞[Ca^(2+)]i信号特征具有差异,且依赖于胞外Ca^(2+)浓度调控;OA软骨细胞[Ca^(2+)]i信号相对于正常细胞存在差异,OA软骨组织内环境的异常
