目的研究敲低和过表达LDHB(lactate dehydrogenase B)对HeLa细胞生长的影响。方法根据慢病毒质粒pLn(pLL3.7-neo)特点,设计三对分别靶向LDHB c DNA 48,201,443位核苷酸序列的shRNA(short hairpin RNA)引物,退火后与pLn重组。同时,将LDHB...目的研究敲低和过表达LDHB(lactate dehydrogenase B)对HeLa细胞生长的影响。方法根据慢病毒质粒pLn(pLL3.7-neo)特点,设计三对分别靶向LDHB c DNA 48,201,443位核苷酸序列的shRNA(short hairpin RNA)引物,退火后与pLn重组。同时,将LDHB cDNA与慢病毒质粒pIp(pBOBI-IRES-puro)重组,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,将获得的病毒上清感染HeLa细胞,Western blot鉴定LDHB的敲低和过表达对LDHB蛋白水平的影响,并观察其对HeLa细胞生长的影响。结果靶向LDHB第48位核苷酸的shRNA显著敲低LDHB(P<0.01),443位次之,201位无敲低作用。shRNA序列对HeLa细胞生长的抑制作用与其敲低效果成正相关。转染pIp-LDHB显著升高LDHB在HeLa细胞中的表达水平(P<0.01),但不影响其生长。结论敲低LDHB抑制HeLa细胞生长,下调LDHB的表达可能有助于宫颈癌的治疗。展开更多
文摘目的研究敲低和过表达LDHB(lactate dehydrogenase B)对HeLa细胞生长的影响。方法根据慢病毒质粒pLn(pLL3.7-neo)特点,设计三对分别靶向LDHB c DNA 48,201,443位核苷酸序列的shRNA(short hairpin RNA)引物,退火后与pLn重组。同时,将LDHB cDNA与慢病毒质粒pIp(pBOBI-IRES-puro)重组,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,将获得的病毒上清感染HeLa细胞,Western blot鉴定LDHB的敲低和过表达对LDHB蛋白水平的影响,并观察其对HeLa细胞生长的影响。结果靶向LDHB第48位核苷酸的shRNA显著敲低LDHB(P<0.01),443位次之,201位无敲低作用。shRNA序列对HeLa细胞生长的抑制作用与其敲低效果成正相关。转染pIp-LDHB显著升高LDHB在HeLa细胞中的表达水平(P<0.01),但不影响其生长。结论敲低LDHB抑制HeLa细胞生长,下调LDHB的表达可能有助于宫颈癌的治疗。
